王慶玲，梁 冰

Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)的臨床應(yīng)用及評價

王慶玲，梁 冰＊

目的 通過Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)臨床應(yīng)用效果評價該系統(tǒng)的相關(guān)性能。方法分析筆者所在醫(yī)院9800份血培養(yǎng)標(biāo)本的病原菌檢出率，病原菌構(gòu)成分布以及儀器判定陽性的報警時間。結(jié)果9800份血培養(yǎng)中檢出病原菌共870份，陽性率為8.88%；前五位分別為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和陰溝腸桿菌。24 h內(nèi)檢出陽性率為70.9%，48 h內(nèi)檢出率為88.7%，72 h內(nèi)檢出率為94.9%。結(jié)論Versa TREK血培養(yǎng)儀檢出病原菌的范圍廣，敏感性、特異性高，能夠滿足臨床需求。

Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)；血培養(yǎng)；病原菌

引起血流感染的病原菌種類廣泛，除醫(yī)源性因素越來越突出外，常見于手術(shù)并發(fā)癥、繼發(fā)于組織的微小感染和免疫力低下時的內(nèi)源性感染。由于血流感染病死率高（高達(dá)35%［1］），危害嚴(yán)重，快速、早期診斷顯得尤為重要。血液樣本的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷血流感染的重要手段。目前多數(shù)微生物實驗室采用自動化儀器進(jìn)行血液標(biāo)本的培養(yǎng)，血培養(yǎng)儀檢測敏感性和特異性對于及時診斷血流感染有重要影響。本文通過9800份血培養(yǎng)樣本的病原菌陽性檢出率，陽性報警時間與菌種分布等指標(biāo)對現(xiàn)用的Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)的實驗性能進(jìn)行臨床應(yīng)用的評價。

1 材料與方法

1.1 Versa TREK全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)賽默飛世爾科技Versa TREK528全自動血培養(yǎng)儀及其配套血培養(yǎng)瓶（Versa TREKREDOX1需氧培養(yǎng)瓶，Versa TREKREDOX 2厭氧培養(yǎng)瓶）。

1.2 細(xì)菌鑒定儀器VITEK-Ⅱ Compact全自動微生物分析儀（法國梅里埃公司）；基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀 （Microflex MALDI-TOF MS）（德國布魯克公司）。

1.3 樣本來源2012年12月1日—2016年6月1日筆者所在醫(yī)院住院和門診患者送檢的9800份血培養(yǎng)標(biāo)本。

1.4 標(biāo)本采集要求在患者寒戰(zhàn)時或發(fā)熱初期，患者接受抗生素治療之前在雙側(cè)肘靜脈采集2套，對已使用抗生素?zé)o法停止用藥的患者，應(yīng)在下次用藥前采集。每人每套需氧和厭氧瓶各采集5～10 ml血液，嚴(yán)格無菌操作采集的血液立即注入培養(yǎng)瓶內(nèi)并迅速輕搖使之充分混合，以防血液凝固，標(biāo)本采集后及時送檢。

1.5 儀器陽性報警的處理程序臨床采集的血液樣本及時送入微生物室放入Versa TREK血培養(yǎng)儀（按照儀器的操作說明書進(jìn)行）。若儀器陽性報警，首先轉(zhuǎn)種至哥倫比亞血平板、麥康凱平板、巧克力平板，35℃，5%CO2培養(yǎng)18～24 h，同時轉(zhuǎn)種沙保羅平板，29℃培養(yǎng)18～120 h，厭氧培養(yǎng)轉(zhuǎn)至厭氧袋（法國梅里埃公司生產(chǎn)）內(nèi)。另外采集陽性瓶中的血液進(jìn)行革蘭染色鏡檢。第二天應(yīng)用VITEK系統(tǒng)或質(zhì)譜儀進(jìn)行細(xì)菌和真菌鑒定。

1.6 質(zhì)量控制按照CLSI－M22－A2標(biāo)準(zhǔn)及REDOX1、REDOX2培養(yǎng)瓶使用說明書要求進(jìn)行質(zhì)量控制。按ISO15189 CNAS－CL02文件對血培養(yǎng)儀進(jìn)行性能驗證：季度回顧分析全自動血培養(yǎng)儀的假陰性率和假陽性率；選用金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC 25922、白假絲酵母菌ATCC90028以及脆弱擬桿菌ATCC25285，對105、104～101等5個不同濃度標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸液模擬常規(guī)操作上機(jī)測定，觀察血培養(yǎng)瓶陽性報警時間是否適當(dāng)（＜72 h）。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析統(tǒng)計分析軟件采用SPSS 19．0對需氧瓶和厭氧瓶陽性報警時間進(jìn)行Wilcoxon秩和檢驗，對5類病原菌陽性報警時間進(jìn)行Kruskal-Wallis檢驗，類間兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0．05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)量控制結(jié)果質(zhì)量控制結(jié)果見表1。性能驗證結(jié)果顯示Versa TREK血培養(yǎng)分析系統(tǒng)假陽性率0．30%，假陰性率0%，結(jié)果可靠有效。標(biāo)準(zhǔn)菌株采用配制105、104～101cfu/ml等5個濃度菌懸液，模擬臨床標(biāo)本（成人需氧10 ml、厭氧10 ml）上機(jī)測試，所有培養(yǎng)瓶在＜1 d（24 h）內(nèi)均報陽性，儀器報陽時間均＜72 h，其敏感度和特異度符合預(yù)期要求。

表1 質(zhì)量控制結(jié)果

2.2 病原菌分布9800份血培養(yǎng)標(biāo)本共檢出病原菌907株，陽性率為8．88%，其中腸桿菌科細(xì)菌437株 （48．18%），凝固酶陰性葡萄球菌 129株（14．22%），金黃色葡萄球菌96株（10．58%），腸球菌屬69株（7．61%），非發(fā)酵菌屬50株（5．51%），念珠菌屬72株（7．94%），鏈球菌屬32株（3．53%），其他22株（2．43%）。需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)病原菌構(gòu)成及分布如表2。

2.3 對需氧瓶和厭氧瓶陽性報警時間進(jìn)行Wilcoxon秩和檢驗P＜0．05差異具有顯著性，需氧培養(yǎng)陽性報警時間中位數(shù)為13．0 h，厭氧培養(yǎng)為19．2 h。需氧瓶和厭氧瓶的陽性報警時間分布箱式圖見圖1。

表2 需氧和厭氧條件下病原菌生長的分布（株）

圖1 需氧瓶和厭氧瓶陽性報警時間分布箱式圖

2.4 病原菌的陽性報警時間分布最早陽性報警時間為0．5 h，病原菌位大腸埃希菌。12 h內(nèi)檢出陽性率為38．3%，24 h內(nèi)檢出陽性率為70．9%，48 h內(nèi)檢出率為88．7%，72 h內(nèi)檢出率為94．9%。907株病原菌的報警時間分布見表3，各菌屬陽性報警時間分布箱式圖見圖2。對5類病原菌陽性報警時間進(jìn)行Kruskal-Wallis檢驗，P＜0．05差異具有顯著性。各菌屬報警時間中位數(shù)見表4。

圖2 各病原菌屬陽性報警時間分布箱式圖

表3 907株病原菌在不同陽性報警時間檢出率

表4 各菌屬報警時間中位數(shù)（h）

3 討論

Versa TREK血培養(yǎng)儀是通過氣壓感應(yīng)技術(shù)檢測各種氣體（包括CO2，O2，N2和H2）的產(chǎn)生和消耗連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)菌生長情況［2］，可以同時進(jìn)行血液、無菌體液培養(yǎng)、分枝桿菌培養(yǎng)、結(jié)核分枝桿菌藥敏測試的“四合一”培養(yǎng)系統(tǒng)。很多厭氧菌通常不能產(chǎn)生足夠的CO2，但是會產(chǎn)生其他氣體（如N2或H2），因此，該培養(yǎng)系統(tǒng)避免了單一檢測CO2的局限性，使得該培養(yǎng)儀檢測細(xì)菌的范圍明顯增大。Versa TREK血培養(yǎng)瓶為80 ml大容量培養(yǎng)基，營養(yǎng)豐富、抗生素充分稀釋，聚茴香腦磺酸鈉的含量低，這些條件都利于病原菌的充分生長。

周庭銀等［3］報道ESP全自動血培養(yǎng)儀的最早報警時間為2 h，顧海彤等［4］報道法國梅里埃BacT/ Alert 3D血培養(yǎng)系統(tǒng)最早報警時間為4 h，本組資料細(xì)菌生長陽性的最早報警時間為0.5 h。法國梅里埃BacT/Alert 3D血培養(yǎng)系統(tǒng)和美國BD BACTEC FX血培養(yǎng)系統(tǒng)均是檢測細(xì)菌代謝產(chǎn)生的CO2來檢測細(xì)菌生長情況［5］。Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)的全氣體檢測技術(shù)避免了只檢測CO2的局限性，可能是檢測敏感性大大提高的原因。另外，大容量的培養(yǎng)基對于稀釋干擾因素，提高細(xì)菌營養(yǎng)儲備，在培養(yǎng)震蕩條件下的充分營養(yǎng)輸送對于提高檢測靈敏度都有很好的幫助。結(jié)果顯示，Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)最早陽性報警時間明顯早于梅里埃BacT/Alert 3D血培養(yǎng)系統(tǒng)、美國BD BACTEC FX血培養(yǎng)系統(tǒng)［6］和ESP全自動血培養(yǎng)儀［3］，更利于對血流感染病原菌的早期診斷，為臨床的及時診斷及針對性的抗感染治療贏得時間。

引起血流感染的常見細(xì)菌有大腸埃希菌及其他腸桿菌科細(xì)菌，非發(fā)酵革蘭陰性桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、念珠菌及厭氧性細(xì)菌等［7］。從本文檢出細(xì)菌的構(gòu)成及分布看，該系統(tǒng)有能力為引起血流感染的主要病原菌提供營養(yǎng)支持并滿足其分離培養(yǎng)條件，菌種覆蓋廣泛，有文獻(xiàn)表明，Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)是唯一能夠檢出厭氧消化鏈球菌的系統(tǒng)［8］并且在僅采集0.5～1 ml血液時能夠檢出淋病奈瑟菌［9］，能夠滿足臨床需要。

本組資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，病原菌檢出時間與病原菌的種類有關(guān)。各病原菌中陽性報警時間最早的為腸桿菌科細(xì)菌，明顯早于非發(fā)酵菌屬、葡萄球菌屬和念珠菌屬。腸球菌屬與鏈球菌屬的陽性報警時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與顧海彤等［4］報道一致。腸球菌屬陽性報警時間早于葡萄球菌屬、非發(fā)酵菌屬和念珠菌屬，與郭健蓮等［10］報道一致，但有報道［4］腸球菌屬陽性報警時間較晚，其原因尚需進(jìn)一步分析，可能與抗生素應(yīng)用、血液中的病原菌原始量等有關(guān)，因為血液標(biāo)本中病原菌的原始量與陽性報警時間呈負(fù)相關(guān)［11］。

綜上所述，Versa TREK血培養(yǎng)系統(tǒng)陽性報警時間早，分離病原菌種類覆蓋范圍廣，能夠滿足臨床需求，對于血流感染的及時診斷和治療有重要的臨床應(yīng)用價值。

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［2016－08－18收稿，2016－09－16修回］

［本文編輯：吳 蓉］

Clinical application and evaluation of Versa TREK blood culture system

WANG Qing-ling①，LIANG Bing.Qingdao University，Qingdao，Shandong 266071，China

ObjectiveTo evaluate the related performance of Versa TREK blood culture system through observing its clinical application.MethodsThe 9800 blood samples obtained from author's hospital were detected by Versa TREK blood culture system，in which positive rate，positive alarm time and the distribution of microorganisms were analyzed.ResultsAmong the 9800 samples 870 were for positive rate（8.88%i.e）detected with positivepathogen，and the top fiveisolateswere Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，Staphylococcus aureus，Staphylococcus epidermidis，Enterobacter cloacae.The positive rate was 70.9%within 24h，88.7%within 48h and 94.9%within 72h.ConclusionVersa TREK blood culture system could detect various microorganisms with higher sensitivity and specificity，which can meet clinical request.

Versa TREK blood culture system；Blood culture；Pathogen

R446.5

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.02.007

266071山東青島，青島大學(xué)（王慶玲）；解放軍401醫(yī)院檢驗科（梁冰）

梁冰，Email：jyk401@126.com