李 偉，呂西香，王曉燕，姜曉玲，周 林

轉(zhuǎn)錄因子E2F3在胃癌組織中的表達(dá)及其預(yù)后價(jià)值＊

李 偉，呂西香，王曉燕，姜曉玲，周 林＊

目的 探討轉(zhuǎn)錄因子E2F3在胃癌組織中的表達(dá)及其預(yù)后價(jià)值。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)82例胃癌組織和胃旁組織中E2F3的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)分析其表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果胃癌組織中E2F3陽(yáng)性表達(dá)率為65．8%，和癌旁正常胃黏膜組織陽(yáng)性率（23．2%）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0．001。E2F3表達(dá)與分化程度（P＜0．01）、TNM分期（P＜0．05）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0．05）密切相關(guān)，而與性別（P=0．131）、年齡（P=0．358）、腫瘤大?。≒=0．728）、浸潤(rùn)深度（P=0．367）和其他器官轉(zhuǎn)移（P=0．348）無(wú)關(guān)。生存期分析提示，E2F3表達(dá)陽(yáng)性患者，相比于陰性表達(dá)的，其生存期更短，P＜0．01。結(jié)論轉(zhuǎn)錄因子E2F3與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其表達(dá)與胃癌患者預(yù)后緊密相關(guān)，具有重要臨床意義。

胃癌；E2F3；免疫組織化學(xué)；預(yù)后

胃癌的發(fā)病率在腫瘤中居第四位，病死率居第二位，在包括我國(guó)在內(nèi)的發(fā)展中國(guó)家尤為嚴(yán)重［1］。研究胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制并尋找關(guān)鍵性調(diào)控分子對(duì)胃癌的診斷、治療以及預(yù)后具有重要作用。E2F轉(zhuǎn)錄因子3（E2F transcription factor 3，E2F3）是轉(zhuǎn)錄因子E2F家族的重要一員，調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程，已被證實(shí)在多種腫瘤中高表達(dá)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［2－6］。然而，E2F3在胃癌中的表達(dá)及功能仍不清楚。該研究通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)82例胃癌組織和癌旁組織中E2F3的表達(dá)，分析其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，并探討其潛在預(yù)后價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集解放軍第八十八醫(yī)院普外科2006年1月1日—2009年12月31日手術(shù)切除的人類胃癌82例，癌旁組織選取距癌灶邊緣5 cm以上的正常胃組織。所有標(biāo)本均經(jīng)病理確診。所有患者術(shù)前均未接受過(guò)放療和化療。82例胃癌患者中男53例，女29例；年齡35～85歲，中位年齡64歲。高分化和中分化腺癌44例，低分化和未分化腺癌38例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例。Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期57例。

1.2 試劑一抗為兔抗人E2F3購(gòu)于Abcam公司，采用1∶100的比例稀釋。二抗為過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素（SP）染色試劑盒和濃縮型二甲基聯(lián)苯胺（DAB），購(gòu)自上海生工生物工程有限公司。

1.3 方法采用SP免疫組織化學(xué)法，以PBS液代替一抗做陰性對(duì)照，以試劑公司提供的陽(yáng)性照片做陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)免疫組化染色評(píng)分主要依據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比。結(jié)果由兩位病理科醫(yī)師在不知患者臨床資料的情況下打分。染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比判定：0%、1%～10%、11%～50%、51%～75%和75%以上的細(xì)胞為陽(yáng)性，分別被評(píng)分為0、1、2、3和4分，0和1分判定為陰性，2、3和4分判定為陽(yáng)性。

1.5 隨訪隨訪時(shí)間自術(shù)后第1天，末次隨訪或死亡時(shí)間以月為計(jì)量單位，隨訪至2015年6月，隨訪時(shí)間最長(zhǎng)106個(gè)月，最短2個(gè)月，無(wú)失訪，隨訪方式為電話問(wèn)詢，每3個(gè)月隨訪1次。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)分析軟件。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)分析E2F3蛋白在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異以及E2F3的表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理學(xué)特征間的關(guān)系；應(yīng)用Kaplan-Meier方法進(jìn)行生存線的描繪；生存曲線差異性應(yīng)用Log-rank試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E2F3在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)利用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)E2F3在82例胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)E2F3主要定位于胞核中，在胞質(zhì)中也有一定表達(dá)，在胃癌組織中陽(yáng)性率達(dá)65．8%，而在癌旁組織中僅為23．2%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．001）。圖1和表1所示，胃癌組織中E2F3表達(dá)相對(duì)于癌旁組織明顯升高。

圖1 E2F3在胃癌組織和癌旁組織中表達(dá)情況（SP×400）

表1 E2F3在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)情況

2.2 E2F3表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系為了明確E2F3在胃癌中的生物學(xué)功能以及其潛在臨床價(jià)值，該研究免疫組化結(jié)果和臨床相關(guān)資料結(jié)合起來(lái)分析E2F3表達(dá)水平與胃癌臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。利用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算E2F3在82例胃癌組織的表達(dá)水平與各個(gè)臨床特征之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，E2F3表達(dá)水平與分化程度 （P＜0．01）、TNM分期（P＜0．05）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0．05）密切相關(guān)，而與性別 （P=0．131）、年齡 （P=0．358）、腫瘤大小 （P= 0．728）、浸潤(rùn)深度（P=0．367）和其他器官轉(zhuǎn)移（P= 0．348）無(wú)關(guān)（表2）。

表2 胃癌中E2F3表達(dá)情況與臨床病理特征關(guān)系

2.3 胃癌組織中E2F3的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系為進(jìn)一步了解E2F3在胃癌中的臨床價(jià)值，該研究對(duì)82例患者進(jìn)行生存期分析，利用Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)E2F3表達(dá)陽(yáng)性患者的生存期明顯較陰性表達(dá)者短，預(yù)后更差，P＜0．01（圖2）。

圖2 E2F3表達(dá)與胃癌患者生存期之間關(guān)系

3 討論

E2F家族轉(zhuǎn)錄因子控制細(xì)胞周期進(jìn)程，包括E2F1、E2F2、E2F3、E2F4、E2F5、E2F6、E2F7和E2F8八個(gè)成員，其中E2F1-E2F3是轉(zhuǎn)錄活化因子，而E2F4-E2F8是轉(zhuǎn)錄抑制因子。E2F3作為E2F家族中重要一員，定位于染色體6p22.3，全長(zhǎng)91.5kb，編碼產(chǎn)物為E2F3蛋白，分為E2F3a和E2F3b兩個(gè)亞基。正常情況下，E2F3與細(xì)胞周期蛋白D1形成二聚體，參與細(xì)胞周期的調(diào)控，是細(xì)胞周期進(jìn)程的強(qiáng)力轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)因子［7］。近期研究表明，E2F3參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在包括膀胱癌、前列腺癌、喉癌和乳腺癌等多種腫瘤中表達(dá)增高。多項(xiàng)研究的結(jié)果表明，膀胱癌中E2F3的高表達(dá)和擴(kuò)增與腫瘤的分期、分級(jí)、增殖和侵襲密切相關(guān)，并且6p22.3擴(kuò)增子是膀胱癌侵襲性的分子標(biāo)志物［2-4］。Lee等指出E2F3表達(dá)沉默通過(guò)減少進(jìn)行有絲分裂細(xì)胞的百分比來(lái)降低乳腺癌的增殖與生長(zhǎng)［5，6］。最近研究表明，多種microRNA，包括miR-203、miR-432、miR-200b和miR-377，靶向作用于E2F3參與腫瘤的生長(zhǎng)和侵襲進(jìn)程［8-11］。以上研究均表明E2F3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。然而，目前E2F3在胃癌中的功能和機(jī)制尚不清楚。

為了明確E2F3在胃癌中的生物學(xué)功能和其臨床價(jià)值，該研究首先利用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)E2F3在胃癌以及癌旁組織中的表達(dá)情況。筆者發(fā)現(xiàn)E2F3在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)明顯增高，其表達(dá)與分化程度、TNM 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度和其他器官轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)；生存期分析結(jié)果提示E2F3陽(yáng)性表達(dá)的生存期越短，其預(yù)后更差。該研究結(jié)果與E2F3在其他腫瘤中的發(fā)現(xiàn)非常相似，表明E2F3的高表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其表達(dá)強(qiáng)度可以作為胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

E2F3主要通過(guò)p16Ink4a-Rb-E2F3和Arf-mdm2-p53兩條信號(hào)通路參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。腫瘤抑癌基因視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Rb蛋白的磷酸化直接調(diào)控E2F3的活性。當(dāng)Rb蛋白去除磷酸化時(shí)，E2F3表達(dá)失活，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯于G1/S期；當(dāng)Rb蛋白磷酸化時(shí)，E2F3被釋放而活化，使細(xì)胞周期順利通過(guò)G1/S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖［2，12-14］。因此pRb/E2F3互相調(diào)控是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要通路。E2F3是Arf-mdm2-p53通路的抑制因子，在E2F3缺失時(shí)Arf阻遏解除，p53的活性得到增強(qiáng)而啟動(dòng)一系列抑癌通路；而當(dāng)E2F3表達(dá)增加時(shí)，p53抑癌途徑失調(diào)，最終促進(jìn)腫瘤的生成和進(jìn)展［14，15］。E2F3是否通過(guò)這兩條信號(hào)通路參與胃癌的調(diào)控，仍需進(jìn)一步研究來(lái)探明。

綜上所述，E2F3表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可以作為胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，具有重要臨床意義，但其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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［2016－08－21收稿，2016－09－19修回］

［本文編輯：吳 蓉］

Expression of transcription factor E2F3 in gastric cancer tissues，and its prognostic value

LI Wei①，LV Xi－xiang，WANG Xiao－yan，et al．Department of Gastroenterology，the 88th Hospital of PLA，Tai'an，Shandong 271000，China

ObjectiveTo determine the expression and prognostic value of transcription factor E2F3 in gastric cancer tissues．MethodsE2F3 expression in 82 paired of gastric carcinoma tissues and adjacent nontumor tissues were detected by immunohistochemical method，and the relationship between E2F3 expression and clinicopathological factors as well as prognosis were analyzed．ResultsPositive expression of E2F3 was detectable in 65．8%of gastric carcinoma tissues and there was significant difference，compared with positive rate in adjacent non－tumor tissues（23．2%，P＜0．001）．Expression of E2F3 was correlated with differentiation（P＜0．01），TNM staging（P＜0．05），and lymph node metastases（P＜0．05），but not with patient gender（P=0．131），age（P=0．358），tumor size（P= 0．728），invasion depth（P=0．367），and metastasis to other organs（P=0．348）．Survival analysis showed that the patients with positive expression of E2F3 had shorter overall survival，compared with negative expression（P＜0．01）．Conclusion E2F3 is strongly related with gastric cancer development＆ aggression and could be a great predictor for gastric cancer prognosis．

Gastric cancer；E2F3；Immunohistochemistry；Prognosis

R735．2

A

10．14172/j．issn1671－4008．2017．02．004

國(guó)家自然科學(xué)基金（81402337）

271000山東泰安，解放軍88醫(yī)院消化內(nèi)科（李偉，呂西香，周林），病理科（王曉燕，姜曉玲）

周林，Email：zhoulin1105＠163．com