牛長(zhǎng)春，萬(wàn)雅芳，李甜，廖璞

(重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗(yàn)科/重慶市臨床檢驗(yàn)中心，重慶 400014)

·臨床檢驗(yàn)技術(shù)研究·

雙水平校準(zhǔn)糾正苦味酸法肌酐檢測(cè)偏移*

牛長(zhǎng)春，萬(wàn)雅芳，李甜，廖璞

(重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗(yàn)科/重慶市臨床檢驗(yàn)中心，重慶 400014)

目的通過(guò)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(室間質(zhì)評(píng))分析苦味酸法檢測(cè)肌酐的偏移及校準(zhǔn)對(duì)偏移的影響。方法利用重慶市臨床檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)，開(kāi)展冰凍混合人源血清(參考方法賦值)調(diào)查，分析苦味酸法與酶法肌酐檢測(cè)結(jié)果間的差異及偏移；用雙濃度水平冰凍混合人源血清(參考方法賦值)校準(zhǔn)常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)后檢測(cè)室間質(zhì)控品。結(jié)果2012年至2016年重慶市苦味酸法肌酐檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室數(shù)下降；苦味酸法實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)健均值與酶法存在差異，且差值與肌酐水平有相關(guān)性(r=0.774 6)；冰凍混合人源血清(參考方法賦值)調(diào)查及國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心正確度驗(yàn)證結(jié)果均顯示，苦味酸法肌酐在低濃度存在正偏移(最大達(dá)10.39%和13.31%)，且偏移與濃度相關(guān)(r=0.988 9)，而酶法肌酐的偏移較小(最大達(dá)1.04%和1.49%)；用冰凍混合人源血清校準(zhǔn)常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)后，苦味酸法肌酐檢測(cè)在低濃度的正偏移被抵消。結(jié)論苦味酸法肌酐檢測(cè)在低值范圍存在正偏移，雙濃度水平校準(zhǔn)可糾正此偏移。

校準(zhǔn)；雙濃度水平；肌酐；室間質(zhì)量評(píng)價(jià)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the bias of creatinine testing by external quality assessment (EQA)and analyze the effects of calibration on the bias of tested values using Jaffe assay.MethodsThe EQA data from The Clinical Laboratory Centre of Chongqing City were utilized to investigate the frozen pooled-human serum in which the value of creatinine was determined by reference method. The differences between Jaffe assay and creatine oxidase method were analyzed and the bias was evaluated. After the routine measurement systems were calibrated using the frozen pooled-human sera with double levels, the EQA samples were tested.ResultsThe number of the laboratories using Jaffe method for creatinine measurement reduced significantly in Chongqing from 2012 to 2016. The robust average values of Jaffe assay were different from enzymatic assay significantly and the difference of the values were correlated with the concentration of creatinine (r=0.774 6). The results of the investigation using frozen pooled human serum and the trueness verification program of National Center for Clinical Laboratories indicated the positive bias of Jaffe assay was observed in low levels of creatinine with maximum of 10.39% and 13.31% and the bias correlated with the concentration of creatinine (r=0.988 9), by contrast the bias was low in enzymatic assay with maximum of 1.04% and 1.49% only. After the measurement systems were calibrated by frozen pooled human sera with double-levels, the positive bias of Jaffe assay in the low concentration of creatinine could be corrected.ConclusionThere may be a positive bias of Jaffe assay for the samples with low concentration of creatinine, which could be corrected by using the calibrators with double-levels.

Keywords: calibration; double-levels; creatinine; external quality assessment

雖然診斷腎病的新標(biāo)志物，如中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、腎損傷分子1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C等[1-2]，越來(lái)越受關(guān)注，但肌酐(creatinine, Cr)作為傳統(tǒng)標(biāo)志物在腎病診斷中依然發(fā)揮重要作用，改善全球腎臟病預(yù)后組織(Kidney Disease Improving Global Outcomes，KDIGO)的腎臟疾病指南中[3]，肌酐是腎病診斷、分級(jí)的重要依據(jù)，腎小球?yàn)V過(guò)率、尿微量清蛋白和肌酐比率等指標(biāo)均基于肌酐濃度計(jì)算。肌酐檢測(cè)方法主要包括苦味酸法和酶法，雖然越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室使用酶法，但使用苦味酸法的實(shí)驗(yàn)室依然占很大比例。據(jù)2016年國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“衛(wèi)計(jì)委”)臨床檢驗(yàn)中心數(shù)據(jù)，苦味酸法檢測(cè)肌酐的實(shí)驗(yàn)室占26.7%(598/2 237)。本研究通過(guò)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(室間質(zhì)評(píng))分析苦味酸法檢測(cè)肌酐的偏移及校準(zhǔn)方式對(duì)偏移的影響。

1 材料與方法

1.1室間質(zhì)評(píng)冰凍血清樣品的制備 由重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗(yàn)科留取檢測(cè)后血清，收集肌酐高、中、低水平血清，排除脂血、溶血和高膽紅素標(biāo)本，所有血清HIV、HCV和HBV均陰性。所收集血清分別混合后按每管1 mL分裝，-80 ℃保存。冰凍血清樣品用干冰保存并送國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心參考實(shí)驗(yàn)室賦值，方法為同位素稀釋質(zhì)譜法，各水平賦值濃度分別為：436、77、96、274、86 μmol/L。

1.2冰凍混合人源血清室間質(zhì)評(píng)調(diào)查 在重慶市范圍內(nèi)選擇44個(gè)試驗(yàn)單位，儀器包括西門(mén)子、貝克曼、雅培、Roche、日立、東芝、邁瑞7種品牌9個(gè)型號(hào)，其中配套系統(tǒng)9家。使用1.1中所制備冰凍血清開(kāi)展調(diào)查。國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心2016年小分子正確度驗(yàn)證計(jì)劃數(shù)據(jù)由國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心生化室提供。

1.3雙水平冰凍混合人源血清校準(zhǔn)試驗(yàn)

1.3.1檢測(cè)系統(tǒng)的選擇 選擇17個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)(配套檢測(cè)系統(tǒng)7個(gè)，開(kāi)放檢測(cè)系統(tǒng)10個(gè))，儀器包括西門(mén)子、貝克曼、雅培、Roche、日立、邁瑞6種品牌8個(gè)型號(hào)，試劑包括原裝試劑及邁克、中生、美康等試劑，苦味酸法及酶法分別包括5個(gè)和12個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)。

1.3.2冰凍混合人源血清制備及賦值 同1.1。各水平賦值分別為：95.8、582.3 μmol/L。

1.3.3校準(zhǔn)方式 雙濃度水平校準(zhǔn)。

1.3.4室間質(zhì)評(píng)物準(zhǔn)備及檢測(cè) 2016年重慶市臨床檢驗(yàn)中心常規(guī)化學(xué)室間質(zhì)評(píng)品由英國(guó)朗道公司提供，均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)均滿(mǎn)足要求。用3.0 mL蒸餾水或去離子水復(fù)溶后，室溫放置30 min，輕微混勻至完全溶解后取樣測(cè)定。檢測(cè)時(shí)樣品分為5份，每份檢測(cè)3次，計(jì)算均值(共15次檢測(cè))。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用ClinetEQA軟件統(tǒng)計(jì)室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)方法依據(jù)《GB/T 28043 利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)進(jìn)行能力驗(yàn)證的統(tǒng)計(jì)方法》，苦味酸法及酶法肌酐檢測(cè)分組后數(shù)據(jù)采用穩(wěn)健分析[4]，獲得穩(wěn)健均值。用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算相關(guān)系數(shù)(r)。

2 結(jié)果

2.1重慶市肌酐檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)方法變化及結(jié)果比較 2012至2016年共開(kāi)展室間質(zhì)評(píng)13次，苦味酸法由2012年的122個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室減少為91個(gè)實(shí)驗(yàn)室，酶法參加實(shí)驗(yàn)室數(shù)由136家增長(zhǎng)為262家。在13次室間質(zhì)評(píng)的65個(gè)水平中，兩種方法穩(wěn)健均值相關(guān)性較好(r=0.999 2)，但存在較大差異，且差值與肌酐水平具有相關(guān)性(r=0.774 6)。

2.2冰凍人源血清調(diào)查的苦味酸法肌酐檢測(cè)的偏移 苦味酸法低濃度(77、86、96 μmol/L)均值高于參考方法賦值(偏移分別為10.39%、8.95%、8.13%)，高濃度均值偏移較小，偏移與濃度相關(guān)(r=0.988 9)；酶法分組的穩(wěn)健均值偏移較小(偏移分別為1.04%、-0.18%、-0.95%)。國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心的數(shù)據(jù)(2016年小分子正確度驗(yàn)證計(jì)劃)結(jié)果也顯示，苦味酸方法低值(57.1、120.5 μmol/L)處偏移分別達(dá)13.31%和12.95%，高值(558.3 μmol/L)偏移僅為-0.90%；酶法檢測(cè)各水平偏移均較小(偏移分別為-0.35%、1.49%、1.34%)。

2.3雙水平冰凍人源血清校準(zhǔn)后苦味酸法肌酐檢測(cè)的偏移 在低濃度處相對(duì)室間質(zhì)評(píng)穩(wěn)健均值，苦味酸法組均值明顯下降(降幅最大為10.67%)，各濃度下降程度與肌酐濃度相關(guān)(r=0.818 0)，即苦味酸法在低濃度的正偏移被糾正。酶法肌酐各濃度水平偏移變化均較小(-1.36%、0、0.07%、0.95%、0.84%)。

3 討論

臨床實(shí)驗(yàn)室肌酐檢測(cè)準(zhǔn)確性對(duì)腎臟疾病患者的診斷、預(yù)后、監(jiān)測(cè)有重要的意義，目前腎小球?yàn)V過(guò)率估計(jì)值、尿液微量清蛋白和肌酐比率等計(jì)算項(xiàng)目在腎臟疾病診療中廣泛應(yīng)用，對(duì)肌酐檢測(cè)提出了更高要求。美國(guó)國(guó)家腎臟疾病教育計(jì)劃(National Kidney Disease Education Program，NKDEP)對(duì)肌酐提出的正確度要求為與參考方法間的偏移<4.4 μmol/L[5]。

臨床檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)可有效監(jiān)測(cè)一定區(qū)域內(nèi)肌酐檢測(cè)狀況，用室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)可評(píng)價(jià)和分析肌酐檢測(cè)準(zhǔn)確性。目前，雖然各臨床實(shí)驗(yàn)室由于檢測(cè)性能[6-7]而選擇了酶法檢測(cè)肌酐，用苦味酸法的實(shí)驗(yàn)室數(shù)明顯下降，但苦味酸法在重慶市及全國(guó)范圍內(nèi)仍占有一定比例，因此仍然需要關(guān)注苦味酸法檢測(cè)肌酐的質(zhì)量。近5年室間質(zhì)評(píng)結(jié)果顯示，苦味酸法與酶法檢測(cè)肌酐雖然相關(guān)性較好，但差值也比較明顯，且差值與肌酐濃度相關(guān)性明顯，出現(xiàn)此現(xiàn)象原因可能有二，一是校準(zhǔn)的差異，另一是由于質(zhì)控品互通性。

在室間質(zhì)評(píng)中，冰凍人源血清有較好的互通性[8-9]。為去除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響，我們用冰凍人源血清(參考方法賦值)進(jìn)行了室間質(zhì)評(píng)，苦味酸法檢測(cè)肌酐在低值存在正偏移(最高達(dá)10.39%)，高值存在負(fù)偏移，酶法檢測(cè)肌酐與參考方法定值間差異較小(最高僅1.04%)。此結(jié)果與國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心2016年小分子正確度驗(yàn)證計(jì)劃一致，也與意大利室間質(zhì)評(píng)正確度評(píng)價(jià)中表現(xiàn)相似[10]：在70～90 μmol/L的肌酐范圍內(nèi)，包括貝克曼、西門(mén)子等10個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)幾乎全部正偏移，5～7個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)偏移超過(guò)9%，在160～175 μmol/L的肌酐范圍偏移明顯減小。因此，在排除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)肌酐檢測(cè)方法間差異的影響后，我們認(rèn)為校準(zhǔn)可能是導(dǎo)致苦味酸肌酐在低值范圍處正偏倚的原因。

國(guó)內(nèi)體外診斷試劑生產(chǎn)商提供的校準(zhǔn)品大多僅一個(gè)濃度水平，而苦味酸法檢測(cè)肌酐0濃度處吸光度并非為零點(diǎn)，即使使用空白補(bǔ)償?shù)姆绞揭膊⒉荒芡耆鉀Q此問(wèn)題[7]。不同體外診斷試劑生產(chǎn)商的校準(zhǔn)品存在基質(zhì)差異。在本研究中，我們使用冰凍人源血清(參考方法賦值)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行兩點(diǎn)校準(zhǔn)，以去除試劑空白對(duì)檢測(cè)的影響。冰凍血清經(jīng)參考方法定值后作為檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)品，此種校準(zhǔn)方式可將正確度從參考方法傳遞到常規(guī)方法，由于校準(zhǔn)品具備較好的互通性，校準(zhǔn)品的定值不依賴(lài)于所使用的分析系統(tǒng)，且此賦值血清在溯源鏈中有較高的級(jí)別。國(guó)內(nèi)也曾報(bào)道該種校準(zhǔn)方式[11]。檢測(cè)系統(tǒng)被校準(zhǔn)后，多次檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)物，結(jié)果顯示具備正偏移的室間質(zhì)評(píng)穩(wěn)健均值下降10.67%，苦味酸法檢測(cè)肌酐在低值范圍被糾正。因此，使用雙水平校準(zhǔn)品可以糾正低濃度的正偏倚。

[1]Fassett RG, Venuthurupalli SK, Gobe GC,etal. Biomarkers in chronic kidney disease: a review[J]. Kidney Int, 2011, 80(8): 806-821.

[2]Martensson J, Martling CR, Bell M. Novel biomarkers of acute kidney injury and failure: clinical applicability[J]. Br J Anaesth, 2012, 109(6): 843-850.

[3]Levey AS, Becker C, Inker LA. Glomerular filtration rate and albuminuria for detection and staging of acute and chronic kidney disease in adults: a systematic review[J]. JAMA, 2015, 313(8): 837-846.

[4]金中淦, 居漪, 唐立萍, 等. 四分位數(shù)穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)和迭代穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果分析中的比較[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2013, 31(7): 545-546.

[5]Myers GL, Miller WG, Coresh J,etal. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program[J]. Clin Chem, 2006, 52(1): 5-18.

[6]Hermida FJ, Lorenzo MJ, Perez A,etal. Comparison between ADVIA Chemistry systems Enzymatic Creatinine_2 method and ADVIA Chemistry systems Creatinine method(kinetic Jaffe method)for determining creatinin[J]. Scand J Clin Lab Invest, 2014, 74(7): 629-636.

[7]Delanaye P, Cavalier E, Cristol JP,etal. Calibration and precision of serum creatinine and plasma cystatin C measurement: impact on the estimation of glomerular filtration rate[J]. J Nephrol, 2014, 27(5): 467-475.

[8]Miller WG, Myers GL, Ashwood ER,etal. Creatinine measurement: state of the art in accuracy and interlaboratory harmonization[J]. Arch Pathol Lab Med, 2005, 129(3): 297-304.

[9]Wang Y, Wang J, Zhao H,etal. Assessment of enzyme measurement procedures in China through a trueness verification program[J]. Clinica Chimica Acta, 2016, 461：98-102.

[10]Carobene A, Ceriotti F, Infusino I,etal. Evaluation of the impact of standardization process on the quality of serum creatinine determination in Italian laboratories[J]. Clinica Chimica Acta, 2014, 427:100-106.

[11]童清, 陳寶榮. 冰凍混合人血清酶校準(zhǔn)品的賦值[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2015, 33(3): 226-229.

CorrectingbiasofcreatininetestingusingJaffeassaybydouble-levelscalibration

NIUChang-chun,WANYa-fang,LITian,LIAOPu

(DepartmentofLaboratoryMedicine,ChongqingGeneralHospital/TheClinicalLaboratoryCentreofChongqingCity,Chongqing400014,China)

R446

A

2017-04-12)

(本文編輯王海燕)

重慶市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)重點(diǎn)項(xiàng)目(2015ZDXM023)；重慶市科學(xué)委員會(huì)項(xiàng)目(cstc2016jcyja0177)。

牛長(zhǎng)春，1982年生，男，副主任技師，博士，主要從事臨床生化檢驗(yàn)工作。

廖璞，主任技師，E-mail：liaopu2015@163.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.09.04