鄧艷芹　吳國順　倪楊帆　劉銘　劉斌　李紅萍

摘 要：本試驗對沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺3種β-興奮劑在飼料中的提取方法及其檢測的色譜條件、質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。樣品經(jīng)乙酸-甲醇提取，混合型陽離子交換SPE小柱凈化后，采用HPLC-MS/MS檢測分析。3種目標(biāo)化合物的檢出限為0.005 mg/kg，定量限為0.02 mg/kg。加標(biāo)回收率為70.2%～118.1%，5次測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.6%～8.1%。本試驗所建立的前處理方法和儀器分析方法，不僅節(jié)省了檢測時間，同時獲得較好的回收率和精密度，可用于飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅殘留的測定。

關(guān)鍵詞：沙丁胺醇；萊克多巴胺；鹽酸克倫特羅；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；飼料

中圖分類號：S816.17 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20161132090

鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺屬于β-興奮劑，常被非法用于肉用動物的養(yǎng)殖以提高瘦肉率，通過聚集在動物可食用組織中而對人的組織器官產(chǎn)生毒副作用。開展飼料及飼料添加劑的檢測是從食品安全源頭進(jìn)行控制的有效手段，對相關(guān)檢測方法的研究具有重要意義。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器為賽默飛TSQ quantum Access MAX液質(zhì)聯(lián)用；固相萃取柱（Agela公司，Cleanert PCX-SPE）。萊克多巴胺、沙丁胺醇和鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所（100ug/ml），根據(jù)需要用2%（v/v）冰乙酸稀釋至合適濃度。HPLC級甲醇和乙腈（J.T.Baker）。甲酸銨、氨水為分析純，冰乙酸為優(yōu)級純，甲酸為色譜純。用水符合GB/T6682-2008《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》的規(guī)定。

1.2 樣品前處理

按GB/T14699.1規(guī)定方法采樣約1.5kg，以四分法縮減至200g。用橡皮錘對樣品進(jìn)行粉碎，過40目篩后充分混勻，裝入磨口瓶中備用。稱取配合飼料5g（濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料1g），精確至0.0001g，置于250mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇- 0.1M冰乙酸（80：20，v/v）的提取液，蓋緊塞子，振蕩提取30 min，定性濾紙過濾。

取1mL提取液濾液于5mL試管中，置50℃水浴中以氮氣吹至近干。同時將SPE柱固定于SPE減壓凈化系統(tǒng)上，依次用1mL甲醇和1mL去離子水對SPE柱活化平衡。向樣品試管中加入1mL2%（v/v）冰乙酸，漩渦振蕩后全部加到小柱上，控制過柱速度低于1mL/min（每分鐘不超過20滴）。上樣結(jié)束后，分別用1mL0.9%（v/v）鹽酸和1mL甲醇淋洗SPE柱。加入1mL氨化甲醇（25%氨水：甲醇，1：10，v/v）對柱上的目標(biāo)化合物進(jìn)行洗脫，洗脫速度不超過1 mL/min。收集洗脫液后，氮氣吹干，用1.00mL2%（v/v）冰乙酸充分溶解混勻，0.22um濾膜過濾后待分析。

1.3 儀器分析條件

1.3.1 液相色譜條件

色譜柱：HaloTM C18 3.0×100mm，2.7um；柱溫：20℃；流速：200uL/min；進(jìn)樣量：10uL；流動相：0.73%甲酸銨+0.1%甲酸水溶液（A），甲醇（B），梯度洗脫條件為：0.5min 98%A +2%B；1.5min 70%A +30%B；3min 60%A +40%B；3.5min 30%A +70%B；平衡7.5min。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧正離子模式，噴霧電壓3500V，毛細(xì)管溫度400℃，鞘氣35 arb，輔助氣5 arb，選擇反應(yīng)監(jiān)測掃描模式（SRM）。3種化合物的選擇反應(yīng)監(jiān)測母離子、子離子（碰撞能量）為：沙丁胺醇240、166（12）、222（7）；鹽酸克倫特羅277、132（26）、203（15）、259（7）；萊克多巴胺302、121（24）、164（16）、284（12）。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件的優(yōu)化

本試驗先后比較了50mL離心管和250mL三角瓶振蕩提取的效果，后者提取的效率較高，費時較少，不需要多次抽提、離心和定容，直接過濾后即可進(jìn)行下步凈化操作。這是因為在振蕩時，三角瓶中提取溶劑和樣品的接觸面積較大，從而提高了提取效率，可以避免多次離心的操作，使整個提取過程節(jié)省了較多時間。

本試驗對文獻(xiàn)報道的2種提取液即磷酸-甲醇溶液和乙腈進(jìn)行了比較（牛晉陽等，2010；劉彩云，2008；李擁軍等，2011）。試驗發(fā)現(xiàn)乙腈提取的雜質(zhì)較少，但是回收率較低。采用磷酸-甲醇提取液時回收率較好，但是磷酸在提取過程中的殘留不僅會對儀器的檢測系統(tǒng)產(chǎn)生污染，同時還可能通過基質(zhì)效應(yīng)來影響檢測方法的靈敏度和選擇性。本試驗采用乙酸代替磷酸，發(fā)現(xiàn)其提取效率較高，且避免了磷酸殘留對儀器的不良影響，最終確定采用甲醇- 0.1M冰乙酸（80：20，v/v）作為提取液。

2.2 液相色譜及質(zhì)譜條件優(yōu)化

比較了乙腈和甲醇2種不同的有機相，經(jīng)過反復(fù)實驗確定采用甲醇-甲酸銨水溶液體系對檢測響應(yīng)值和效果沒有不良影響，同時基于乙腈毒性較大且價格昂貴，綜合考慮后選擇甲醇-甲酸銨水溶液體系作為流動相。通過優(yōu)化梯度洗脫條件，使3種化合物的出峰時間從7.55～13.77min縮短至5.04～8.30min，每個樣品分析時間從25min縮短至15min，且峰型更佳（圖略）。利用質(zhì)譜掃描收集3種化合物的母離子和子離子信息，確定適合定量分析的特征離子對，并對離子源參數(shù)和碰撞、傳輸參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，響應(yīng)值較好。

2.3 方法靈敏度、精密度及回收率

在空白飼料中添加3種目標(biāo)化合物，以各物質(zhì)的特征離子色譜峰信噪比S/N>3為方法檢出限，S/N>10為定量限。飼料樣品中3種目標(biāo)化合物的檢出限為0.005mg/kg，定量限為0.02 mg/kg。在空白飼料中添加0.1mg/kg的3種目標(biāo)化合物進(jìn)行5次重復(fù)回收率試驗，3種化合物的加標(biāo)回收率在70.2%～118.1%之間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在7.6%～8.1%之間。

3 小結(jié)

本文對沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺3種β-興奮劑在飼料中的提取方法及其檢測的色譜條件、質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。所建立的前處理方法節(jié)省了大量的樣品前處理時間，且操作更為簡便，回收率較高。通過色譜條件優(yōu)化，不僅節(jié)省了檢測時間，同時用廉價且毒性相對較小的甲醇流動相代替乙腈，對檢測的結(jié)果影響不大。根據(jù)儀器的型號和性能對化合物的質(zhì)譜分析條件進(jìn)行優(yōu)化，提高了3種化合物的檢測靈敏度和精密度。

參考文獻(xiàn)

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