柯珍勇

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400000）

骨肉瘤（osteosarcoma）是目前臨床已知的侵襲能力強(qiáng)、惡性程度高的腫瘤類型，多發(fā)于青少年人群且預(yù)后極差、遠(yuǎn)期生存率偏低，盡管隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，使得惡性腫瘤治療手段日益豐富，但是時至今日骨肉瘤的治療仍然為困擾臨床的棘手問題之一[1]。近些年來低氧狀態(tài)與腫瘤生物活性功能、細(xì)胞增殖活性之間的關(guān)聯(lián)性逐漸被醫(yī)學(xué)界所熟知。對于骨肉瘤而言，細(xì)胞侵襲能力是決定其預(yù)后的關(guān)鍵性因素，低氧狀態(tài)下骨肉瘤細(xì)胞生物活性功能的研究成為研究的熱門議題之一。鑒于此，本次研究圍繞低氧狀態(tài)下骨肉瘤細(xì)胞侵襲能力展開研究，現(xiàn)內(nèi)容報道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本次研究使用的人成骨肉瘤細(xì)胞（MG-63）均為2015年8月～2016年8月由上海信然生物技術(shù)有限公司購自。

1.2 方法

1.2.1 人成骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)

采用紫外線對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒處理，隨后將人成骨肉瘤細(xì)胞取出后置入恒溫水浴箱中在37℃條件下快速復(fù)溫后利用移液器將其加入含有2.5 mL細(xì)胞培養(yǎng)液的試管之中。以10000 r/min離心5 min，分離上清液后分離細(xì)胞懸液并將其置于包含有青霉素100 U/L以及鏈霉素100 U/L的培養(yǎng)液中以37℃恒溫孵育，二氧化碳體積分?jǐn)?shù)控制在5%，每日及時清除死亡細(xì)胞并更換培養(yǎng)液。

1.2.2 人成骨肉瘤細(xì)胞分組

在人成骨肉瘤細(xì)胞步入對數(shù)生長期，并在細(xì)胞培養(yǎng)液已經(jīng)更換24 h后置于二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱之中密閉培養(yǎng)，氧氣濃度分別設(shè)置為1%和21%，孵育24 h后進(jìn)行分組[3]。

1.3 觀察指標(biāo)

將HIF-1αmRNA表達(dá)、E-cad mRNA表達(dá)、細(xì)胞克隆率、細(xì)胞遷移率、細(xì)胞侵襲率、細(xì)胞黏附率作為觀察指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料以“x± s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組HIF-1αmRNA和E-cad mRNA表達(dá)水平比較

觀察組HIF-1αmRNA表達(dá)高于對照組，E-cad mRNA表達(dá)低于對照組，二者相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組細(xì)胞侵襲能力比較

觀察組細(xì)胞克隆率、細(xì)胞遷移率、細(xì)胞侵襲率高于對照組，細(xì)胞黏附率低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展以及對正常細(xì)胞侵襲過程中腫瘤細(xì)胞始終處于永生化狀態(tài)，其增至火星明顯增加，并且伴有原發(fā)灶以及轉(zhuǎn)移灶的生長[4]。高代謝狀態(tài)下腫瘤內(nèi)普遍存在著不同程度的缺氧情形，而對于正常細(xì)胞來講，充足的氧氣供給是維持細(xì)胞功能正常運(yùn)轉(zhuǎn)的必備條件之一[5-6]。

本次研究證實(shí)，觀察組H I F-1 α m R N A表達(dá)（0.52±0.07），高于對照組的（0.14±0.04），而E-cad mRNA表達(dá)（0.46±0.12）則低于對照組（1.09±0.16），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較上，觀察組細(xì)胞克隆率、細(xì)胞遷移率、細(xì)胞侵襲率高于對照組，細(xì)胞黏附率低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由此可見，低氧狀態(tài)下骨肉瘤細(xì)胞的HIF-1αmRNA表達(dá)被激活，使得其表達(dá)水平顯著提高。而隨著HIF-1αmRNA表達(dá)水平的提高，細(xì)胞克隆率、細(xì)胞遷移率、細(xì)胞侵襲率亦隨之提高，二者之間呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)性?，F(xiàn)有醫(yī)學(xué)研究指出，上皮鈣黏素（E-cadherin，Ecad）表達(dá)則是全程參與惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的鈣黏附素（Cadherin）家族成員之一，為維持上皮細(xì)胞極性與細(xì)胞-細(xì)胞間緊密相連的關(guān)鍵性細(xì)胞黏附因子，當(dāng)其表達(dá)水平下調(diào)時，惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲以及轉(zhuǎn)移能力隨之增強(qiáng)，呈現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)性[8]。本次研究中觀察組E-cad mRNA表達(dá)明顯更低，細(xì)胞黏附率同樣處于較低水平，與上述論斷相吻合。

綜上所述，低氧環(huán)境下骨肉瘤HIF-1αmRNA表達(dá)被誘導(dǎo)激活，而E-cad mRNA表達(dá)受抑制，使得其侵襲轉(zhuǎn)移能力大幅提升。

[1] 王一凡,許永濤.構(gòu)建瘤細(xì)胞模型:NS-398對低氧狀態(tài)下MG-63細(xì)胞侵襲能力的影響[J].中國組織工程研究,2015,35(40):6408-6412.

[2] 孫 微,師永紅.去泛素化酶影響低氧誘導(dǎo)因子-1α泛素化過程的研究進(jìn)展[J].臨床與病理雜志,2015,10(11):2018-2022.