曹慶杰 遲德富

(東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 哈爾濱150040)

感染楊干象幼蟲的高致病力蟲生真菌菌株篩選*

曹慶杰 遲德富

(東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 哈爾濱150040)

【目的】 篩選對(duì)楊干象幼蟲具有高致病力的真菌菌株，測(cè)定防治效果，為生物防治提供依據(jù)。【方法】 選用7株蟲生真菌菌株對(duì)楊干象幼蟲進(jìn)行室內(nèi)致病力測(cè)定，篩選出高致病力菌株并進(jìn)行林間生防試驗(yàn)，對(duì)受侵染的楊干象幼蟲的致病癥狀進(jìn)行研究?！窘Y(jié)果】 1) 用菌株CFCC87323以108conidia·mL-1分生孢子懸浮液處理?xiàng)罡上笥紫x，校正死亡率達(dá)93.38%，致死中時(shí)LT50為3.536天，致死中濃度LC50為7.0×103conidia·mL-1； 林間生防試驗(yàn)采用108conidia·mL-1孢子懸浮液涂干法，校正死亡率達(dá)77.62%。2)用菌株ACCC30830以108conidia·mL-1孢子懸浮液處理?xiàng)罡上笥紫x，校正死亡率達(dá)81.46%，致死中時(shí)LT50為4.248天，致死中濃度LC50為5.43×103conidia·mL-1； 林間生防試驗(yàn)采用108conidia·mL-1孢子懸浮液涂干法，校正死亡率達(dá)66.06%。3) 用菌株ACCC30831以108conidia·mL-1孢子懸浮液進(jìn)行室內(nèi)生物測(cè)定，校正死亡率達(dá)73.51%； 林間防治試驗(yàn)采用108conidia·mL-1孢子懸浮液涂干法，校正死亡率達(dá)58.48%。4) 用菌株CFCC87327以108conidia·mL-1孢子懸浮液進(jìn)行室內(nèi)生物測(cè)定，校正死亡率達(dá)72.85%； 林間防治試驗(yàn)采用108conidia·mL-1孢子懸浮液涂干法，校正死亡率達(dá)56.32%。5) 觀察楊干象幼蟲感染的致病癥狀發(fā)現(xiàn)，楊干象幼蟲被菌株CFCC87323侵染后，從出現(xiàn)明顯癥狀到死亡變成僵蟲需要(74.67±2.31) h，到蟲體布滿菌絲需要(93.67±3.21) h。【結(jié)論】 白僵菌菌株 CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲致病力最高，菌株ACCC30830次之。菌株ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲也表現(xiàn)出較好的致病效果。

楊干象； 致病力； 白僵菌； LT50； LC50

楊干象(Cryptorrhynchuslapathi)是楊樹的主要蛀干害蟲，生活隱蔽,主要危害3～6年生幼樹，曾在1984,1996和2005年3次被列為全國(guó)林業(yè)檢疫性有害生物(高瑞桐， 2003)。近年來，楊干象在全國(guó)范圍內(nèi)發(fā)生頻率明顯升高，對(duì)林木造成嚴(yán)重危害，但目前生產(chǎn)上仍然主要靠化學(xué)農(nóng)藥來控制楊干象的危害(李國(guó)偉等， 2011； 胡秀芝等， 2001； 蔡建文等， 2000)。化學(xué)防治楊干象雖然效果較好(孫向文等， 1999； 苗建才等， 1990； 1994； 蔡建文等， 2000)，但會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生很多不利影響，長(zhǎng)期施用也使楊干象產(chǎn)生了較強(qiáng)的抗藥性(Chung， 1982)。

病原真菌是環(huán)境友好型殺蟲劑(Goetteletal．， 1992)，其中白僵菌(Beauveriabassiana)與綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)已成為廣泛使用的農(nóng)林害蟲病原真菌(蒲蜇龍等， 1996； Robertsetal．， 2004)。國(guó)內(nèi)外用白僵菌(Shimazu， 2004； 王素英等， 2000； Duboisetal．， 2004； 李林青等， 2005； 王四寶等， 2004； Shimazuetal．， 2003； Dubois， 2003)與綠僵菌(童應(yīng)華等， 2010； 何學(xué)友等， 2005； 李建慶等， 2006)來防治天牛、蕭氏松莖象(Hylobitelusxiaoi)等蛀干類害蟲，均取得了良好效果；但用病原真菌防治楊干象的報(bào)道還較少，且防治效果不理想(Cavalcaselle， 1975)。為了高效安全地控制楊干象危害，本研究選用7株蟲生真菌菌株對(duì)楊干象幼蟲進(jìn)行室內(nèi)致病力測(cè)定和林間防治試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株與供試?yán)ハx 楊干象幼蟲人工飼養(yǎng)采用雙層玻璃板飼養(yǎng)法，上層玻璃板為9 cm×9 cm，下層玻璃板為15 cm×15 cm，2層玻璃板中間夾厚度約1 cm的人工飼料。人工飼料配方質(zhì)量比為玉米面∶黃豆粉∶水=5∶1∶5。經(jīng)高壓滅菌鍋蒸熟滅菌冷卻后，在上層玻璃板下的飼料上用鑷子戳小洞，以便將楊干象幼蟲放入飼料中。

供試楊干象幼蟲采自遼寧省北票市遼楊(Populusmaximowiczii)林。采伐帶有楊干象幼蟲的楊樹, 將其鋸成50～80 cm長(zhǎng)的木段。木段頂端封以石蠟，下端放入水深1 cm的水槽中進(jìn)行保濕，置于自然條件下，待楊干象幼蟲長(zhǎng)到4～5齡時(shí)集中采集。為了使楊干象幼蟲適應(yīng)室內(nèi)飼養(yǎng)環(huán)境，利用上述人工飼料飼養(yǎng)楊干象幼蟲約1周后，挑取健康楊干象幼蟲用于試驗(yàn)。

供試白僵菌菌株ACCC30821、ACCC30830、ACCC30831、CFCC87323、CFCC87327、ACCC30749與綠僵菌菌株GIM3346 均來源于北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，各菌株基本情況見表1。

表1 試驗(yàn)所用菌株的基本概況

1.2 試驗(yàn)方法 1) 孢子懸浮液的制備 將PDA斜面培養(yǎng)基上各菌株產(chǎn)的孢子接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，250 mL錐形瓶?jī)?nèi)加入150 mL培養(yǎng)液，培養(yǎng)溫度為28 ℃，搖床搖速為140 r·min-1，待液體培養(yǎng)基中各菌株充分產(chǎn)孢后,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),配制成濃度為108conidia·mL-1的孢子懸液備用。

2) 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的致病力測(cè)定 采用浸漬法將楊干象幼蟲浸入配制好的108conidia·mL-1孢子懸浮液中，10 s后,接入到提前準(zhǔn)備好的人工飼料中飼養(yǎng)，2天更換1次飼料。以0.05%吐溫-80無菌水為對(duì)照， 每天觀察記錄楊干象幼蟲死亡情況，并將蟲尸置于恒溫培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)(濕度為80%，溫度為26 ℃)，以蟲體表面長(zhǎng)出菌絲為有效致死。統(tǒng)計(jì)各處理的死亡蟲數(shù)，篩選出對(duì)楊干象幼蟲致病力強(qiáng)的菌株。每處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)測(cè)定18頭幼蟲，共測(cè)定54頭幼蟲。

3) 高致病力菌株對(duì)楊干象幼蟲致死中濃度LC50測(cè)定 以0.05%吐溫-80無菌水為對(duì)照組，以致病力最強(qiáng)的菌株為試驗(yàn)組，分別以1.57×103，1.57×104，1.57×105，1.57×106，1.57×107和1.57×108conidia·mL-16個(gè)梯度濃度的孢子懸浮液接菌，接菌及接菌后的幼蟲飼養(yǎng)和觀察方法同上。每處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)測(cè)定18頭幼蟲，共測(cè)定54頭幼蟲。

圖1 不同菌株處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化Fig.1 Dynamic changes of cumulative mortality of C. lapathi larvae treated by different fungal strains大寫字母差異極顯著(P<0.01)，小寫字母差異顯著(P<0.05),下同。Capital letters indicate a very significant difference (P<0.01), lowercase letters indicate a significant difference (P<0.05), the same below.

4) 真菌對(duì)楊干象幼蟲致病特點(diǎn)觀察 選用高致病力菌株，以108conidia·mL-1的孢子懸浮液浸漬法處理?xiàng)罡上笥紫x后，接入到準(zhǔn)備好的人工飼料中，每處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)測(cè)定3頭幼蟲，每12 h觀察楊干象幼蟲感染后的變化。

5) 林間防治試驗(yàn) 試驗(yàn)地設(shè)在遼寧省北票市青山林場(chǎng)，屬于半濕潤(rùn)大陸性季風(fēng)氣候區(qū)，該林分占地面積66.7 hm2。試驗(yàn)林為2011年?duì)I造的楊樹人工林，楊樹受楊干象危害株率為100%，每株蟲口密度在10頭以上。

本試驗(yàn)于2014年5月上旬進(jìn)行，選取室內(nèi)測(cè)定對(duì)楊干象幼蟲校正死亡率超過50%的菌株作為林間生防使用的菌株，以濃度為106，107，108conidia·mL-1孢子懸浮液，采用涂干法處理受楊干象幼蟲危害較嚴(yán)重的楊樹。設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)選取5～7株樹(共約100頭幼蟲)，以0.05%吐溫-80無菌水為對(duì)照。處理后根據(jù)室內(nèi)試驗(yàn)幼蟲死亡時(shí)間和長(zhǎng)出菌絲時(shí)間，10天后將楊樹分段劈開檢查楊干象幼蟲存活情況，并將蟲尸帶回室內(nèi)保濕培養(yǎng)，以蟲尸體表面長(zhǎng)出菌絲為有效致死，統(tǒng)計(jì)死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的致病力 1) 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的累積死亡率 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的累積死亡率動(dòng)態(tài)變化見圖1。楊干象幼蟲接種108conidia·mL-1的孢子懸浮液后，7株供試菌株對(duì)楊干象幼蟲均表現(xiàn)出一定的致病力。菌株CFCC87323處理后，楊干象幼蟲的累積死亡率上升比較快，第3至第7天均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于其他菌株； 菌株ACCC30830處理后，在第4，6，7天楊干象幼蟲的累積死亡率均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于菌株ACCC30831、CFCC87327、GIM3346、ACCC30749和ACCC30821； 菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327處理后，第3至第7天楊干象幼蟲的累積死亡率均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于菌株GIM3346、ACCC30749和ACCC30821。其他3株菌株處理后，楊干象幼蟲的累積死亡率上升比較緩，7天內(nèi)均低于35%。由此可見，對(duì)楊干象幼蟲致病效果最好的是菌株CFCC87323，菌株ACCC30830次之。

2) 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的致死中時(shí)LT50如表2所示，楊干象幼蟲用108conidia·mL-1孢子懸浮液處理后，LT50小于4天的只有菌株CFCC87323，致死中時(shí)LT50為3.536天，說明該菌株對(duì)楊干象幼蟲的致病速度最快。菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲致死中時(shí)LT50依次為4.248，4.393，4.482天。

經(jīng)菌株CFCC87323處理后，楊干象幼蟲的校正死亡率達(dá)93.38%； 菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲的校正死亡率依次為81.46%，73.51%，72.85%； 菌株GIM3346、ACCC30749和ACCC30821對(duì)楊干象幼蟲的校正死亡率均低于35%。

綜合不同菌株處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率動(dòng)態(tài)變化、校正死亡率與致死中時(shí)LT50，說明在本研究的菌株中，菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲的致病效果最好，其次是菌株ACCC30830。

表2 不同菌株對(duì)楊干象幼蟲的LT50

2.2 不同濃度高致病力菌株對(duì)楊干象幼蟲致病力與致死中濃度LC50上述試驗(yàn)表明，菌株CFCC87323、ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲的校正死亡率均高于70%，因此，應(yīng)用這4株白僵菌不同濃度孢子懸浮液處理?xiàng)罡上笥紫x。

1) 不同濃度菌株CFCC87323處理?xiàng)罡上笥紫x的累積死亡率及致死中濃度LC50不同濃度菌株CFCC87323處理?xiàng)罡上笥紫x,累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化見圖2。除在處理后第7天1.57×107與1.57×108conidia·mL-1、1.57×106與1.57×107conidia·mL-1處理間的累積死亡率差異不顯著外，其他不同時(shí)間段、不同濃度處理間其累積死亡率均達(dá)到了差異顯著性水平(P<0.05)或極顯著性水平(P<0.01)。

該菌株對(duì)楊干象幼蟲的致死中濃度LC50在第7，6，5，4天分別為7.0×103,5.5×104,6.7×105,1.0×107conidia·mL-1(表3)。

圖2 不同濃度菌株CFCC87323處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化Fig.2 Dynamic changes of cumulative mortality of C. lapathi larvae treated by different concentrations of strain CFCC87323

時(shí)間Time/d回歸方程RegressionequationLC50(conidia·mL-1)95%置信區(qū)95%CIχ2P相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient7y=-1304+0399x70×10359×102～31×1042886057709296y=-1728+0364x55×10411×104～17×1051189088009845y=-1775+0305x67×10518×105～20×1060693095209864y=-1938+0277x10×10731×106～41×107107808980975

2) 不同濃度菌株ACCC30830處理?xiàng)罡上笥紫x的累積死亡率及致死中濃度LC50不同濃度菌株ACCC30830處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化見圖3。除了在處理后第6天1.57×103與1.57×104conidia·mL-1、第7天1.57×107與1.57×108conidia·mL-1處理間累計(jì)死亡率差異不顯著外，其他不同時(shí)間段、不同濃度處理間其累積死亡率均達(dá)到了差異顯著性水平(P<0.05)或極顯著性水平(P<0.01)。

該菌株對(duì)楊干象幼蟲的致死中濃度LC50在第7，6，5天分別為5.43×103，4.71×105，4.3×107conidia·mL-1(表4)。

圖3 不同濃度菌株ACCC30830處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化Fig.3 Dynamic changes of cumulative mortality of C. lapathi larvae treated by different concentrations of strain ACCC30830

時(shí)間Time/d回歸方程RegressionequationLC50/(conidia·mL-1)95%置信區(qū)95%CIχ2P相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient7y=-0729+0159x543×10328×10～56×1041035090409486y=-1436+0253x471×10584×104～17×1062430065709395y=-1252+0164x430×10759×106～16×109036109860978

3) 不同濃度菌株ACCC30831處理?xiàng)罡上笥紫x的累積死亡率及致死中濃度LC50不同濃度菌株ACCC30831處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化見圖4。除了在處理后第3天1.57×104與1.57×103conidia·mL-1處理間累積死亡率差異不顯著外，其他不同時(shí)間段、不同濃度處理間其累積死亡率均達(dá)到了差異顯著性水平(P<0.05)或極顯著性水平(P<0.01)。

該菌株對(duì)楊干象幼蟲的致死中濃度LC50d 第7,6,5天分別為9.1×104,4.4×105,1.0×107conidia·mL-1(表5)。

圖4 不同濃度菌株ACCC30831處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化Fig.4 Dynamic changes of cumulative mortality of C. lapathi larvae treated by different concentrations of strains ACCC30831

時(shí)間Time/d回歸方程RegressionequationLC50/(conidia·mL-1)95%置信區(qū)95%CIχ2P相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient7y=-0819+0165x91×10412×103～71×1050162099709906y=-1014+018x44×10527×104～26×1060514092709735y=-1355+0193x10×10719×106～88×107034809870984

4) 不同濃度菌株CFCC87327處理?xiàng)罡上笥紫x的累積死亡率及致死中濃度LC50不同濃度菌株CFCC87327處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化見圖5。除了處理后第5天1.57×103和1.57×104conidia·mL-1處理間的累積死亡率差異顯著(P<0.05)外，其他不同時(shí)間段、不同濃度處理間其累積死亡率均達(dá)到了差異極顯著性水平(P<0.01)。

該菌株對(duì)楊干象幼蟲的致死中濃度LC50在第7，6，5天別為1.0×106,8.0×106,1.5×108conidia·mL-1(表6)。

圖5 不同濃度菌株CFCC87327處理?xiàng)罡上笥紫x累積死亡率的動(dòng)態(tài)變化Fig.5 Dynamic changes of cumulative mortality of C. lapathi larvae treated by different concentrations of strains CFCC87327

表6 不同時(shí)間段CFCC87327菌株對(duì)楊干象幼蟲的LC50

綜合上述結(jié)果可知，菌株CFCC87323、ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲累積死亡率均隨著孢子懸浮液濃度的增大而上升，說明這些菌株對(duì)楊干象幼蟲的致病力與懸浮液濃度呈正相關(guān)。

從致死中濃度LC50結(jié)果可知，隨著處理時(shí)間的延續(xù),致死中濃度LC50逐漸減小，劑量效應(yīng)增強(qiáng)。

2.3 高致病力菌株感染楊干象幼蟲的致病癥狀 選用高致病力菌株CFCC87323接種楊干象幼蟲并觀察其致病特點(diǎn)，結(jié)果見圖6。楊干象幼蟲接菌(24.33±0.58) h后，蟲體表面與正常幼蟲相比沒有明顯變化(圖6A)； 接菌(47.67±1.53) h后，開始出現(xiàn)停止取食、反應(yīng)遲鈍等癥狀； 接菌(74.67±2.31) h后，幼蟲開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，剛死亡時(shí)蟲尸柔軟并有黑色斑點(diǎn)，蟲體表面出現(xiàn)淡紫紅色變色現(xiàn)象，隨后蟲尸變僵硬(圖6B)； 接菌(86.33±2.52) h后，體表開始長(zhǎng)出白色菌絲(圖6C)； 接菌(93.67±3.21) h后，蟲體長(zhǎng)滿菌絲(圖6D)。從侵染到幼蟲死亡變成僵蟲再到蟲體布滿菌絲，這一侵染過程需4天時(shí)間，進(jìn)一步驗(yàn)證了菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲有很強(qiáng)的致病力。

圖6 楊干象幼蟲感染CFCC87323菌株外部形態(tài)變化Fig.6 External morphological changes of C. lapathi larvae infected by CFCC87323 strainsA.幼蟲染病初期Early stage of infection; B.已變僵蟲A dead worm； C.長(zhǎng)出少量菌絲Small amount of hyphae grown from the body of C. lapathi； D.蟲體長(zhǎng)滿菌絲Hyphae cover the whole body of C. lapathi.

2.4 林間生防試驗(yàn) 經(jīng)過上述室內(nèi)致病力測(cè)定試驗(yàn)，篩選出校正死亡率高于50%的白僵菌為菌株CFCC87323、ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327，將這4株白僵菌分別以濃度為106，107，108conidia·mL-1孢子懸浮液進(jìn)行林間生防試驗(yàn)，結(jié)果見表3。孢子懸浮液濃度為108conidia·mL-1時(shí)，菌株CFCC87323致死率達(dá)79.33%，校正死亡率達(dá)77.62%，極顯著高于其他菌株及對(duì)照(P<0.01)； 菌株ACCC30830致死率達(dá)68.67%，校正死亡率達(dá)66.06%，極顯著高于菌株ACCC30831、CFCC87327及對(duì)照(P<0.01)； 菌株ACCC30831與CFCC87327致死率分別達(dá)61.67%，59.67%，校正死亡率分別達(dá)58.48%，56.32%，也極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。

孢子懸浮液濃度為107conidia·mL-1時(shí)，菌株CFCC87323致死率達(dá)70.67%，校正死亡率達(dá)68.23%，極顯著高于其他菌株及對(duì)照(P<0.01)； 菌株ACCC30830、ACCC30831與CFCC87327致死率分別達(dá)53.33%，50.67%，49.33%，校正死亡率達(dá)49.46%，46.57%，45.13%，也均極顯著高于對(duì)照(P<0.01)。

孢子懸浮液濃度為106conidia·mL-1時(shí)，菌株CFCC87323致死率達(dá)57.33%，校正死亡率達(dá)53.79%，極顯著高于其他菌株及對(duì)照(P<0.01)； 菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327致死率分別達(dá)41.67%，43%，38.67%，校正死亡率分別達(dá)36.82%，38.27%，33.57%，極顯著高于對(duì)照(P<0.01)。

這說明菌株CFCC87323在林間對(duì)楊干象幼蟲具有很強(qiáng)的致病力，并且致死率與孢子濃度呈正相關(guān)。菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327在林間對(duì)楊干象幼蟲也有一定的致病力。

表3 4菌株林間生防試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

楊干象對(duì)我國(guó)森林資源構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。為有效控制其危害，本研究選用6株白僵菌與1株綠僵菌菌株，分別在室內(nèi)對(duì)楊干象幼蟲進(jìn)行致病力試驗(yàn)，綜合比較這7株真菌菌株對(duì)楊干象幼蟲的校正死亡率、致死中時(shí)LT50以及致病特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲的致病力最高。將菌株CFCC87323應(yīng)用到林間進(jìn)行生防試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲也有良好的致病效果。

本研究選用濃度為108conidia·mL-1的菌株CFCC87323進(jìn)行室內(nèi)生物防治中，楊干象感染白僵菌第7天，校正死亡率達(dá)到93.38%，致死中時(shí)LT50為3.536天，致死中濃度LC50為7.0×103conidia·mL-1； 選用濃度為108conidia·mL-1的菌株進(jìn)行林間防治試驗(yàn)，幼蟲致死率達(dá)79.33%，校正死亡率達(dá)77.62%。李亞杰等(1980)采用噴干法，選用濃度為109conidia·mL-1的白僵菌在林間防治楊干象幼蟲，感染死亡率為72.94%；本試驗(yàn)篩選出的菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲的致病力要優(yōu)于上述研究的白僵菌菌株的致病力。邵國(guó)祥等(1979)采用涂干法，選用濃度為50×108conidia·g-1的白僵菌在林間防治楊干象幼蟲，感染死亡率為88%，比本試驗(yàn)中CFCC87323菌株對(duì)楊干象幼蟲的致病效果好，這可能是由于該研究應(yīng)用的孢子濃度是本研究所用孢子濃度的50倍所致。Cavalcaselle(1975)研究表明，單獨(dú)使用白僵菌懸浮液防治楊干象，死亡率僅為50%，而加入敵敵畏后，死亡率升至90%，此研究對(duì)楊干象的高致病力很大一部分原因來源于化學(xué)農(nóng)藥。與本試驗(yàn)使用的白僵菌懸浮液對(duì)楊干象的防治效果相比，Cavalcaselle使用的白僵菌對(duì)楊干象的防治效果相差很多。

從菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲的致病特點(diǎn)上看，楊干象幼蟲被該菌株侵染從出現(xiàn)明顯癥狀到死亡變成僵蟲需要(74.67±2.31) h，到蟲體布滿菌絲需要(93.67±3.21) h。這與菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲的致死中時(shí)LT50基本一致，均表現(xiàn)出致死速度較快的特點(diǎn)，進(jìn)一步驗(yàn)證了菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲具有很好的致病效果。

選用濃度為108conidia·mL-1的菌株ACCC30830、ACCC30831和CFCC87327進(jìn)行室內(nèi)致病力測(cè)定，校正死亡率分別為81.46%，73.51%，72.85%，致死中時(shí)LT50為4.248，4.393，4.482天；選用濃度為108conidia·mL-1的菌株進(jìn)行林間防治試驗(yàn)，校正死亡率分別為66.06%，58.48%，56.32%，說明菌株ACCC30830對(duì)楊干象幼蟲的致病力僅次于菌株CFCC87323，菌株ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲也表現(xiàn)出較好的致病效果，因此，可以進(jìn)一步挖掘這3株菌株的應(yīng)用潛力，在控制楊干象幼蟲中發(fā)揮應(yīng)有的作用。

菌株毒力受多種因素影響，如濕度、溫度等(何學(xué)友等， 2011； Zhangetal．， 2011)。對(duì)于控制蛀干害蟲來說，另一個(gè)關(guān)鍵問題就是一定要確保分生孢子能與害蟲接觸。本研究測(cè)定的菌株CFCC87323在室內(nèi)對(duì)楊干象幼蟲的致病效果高于林間，這是由于林間環(huán)境比室內(nèi)環(huán)境復(fù)雜，特別是環(huán)境的濕度小，不利于白僵菌分生孢子萌發(fā)；另外室內(nèi)試驗(yàn)幼蟲直接浸在分生孢子懸浮液中，而野外防治時(shí)是將白僵菌分生孢子懸浮液點(diǎn)涂到楊干象幼蟲的排糞孔及坑道的外面，幼蟲接觸到分生孢子的概率遠(yuǎn)低于室內(nèi)試驗(yàn)，導(dǎo)致菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲林間與室內(nèi)的侵染效果出現(xiàn)了一定差距。因此，在濕度較大的天氣或降雨后使用白僵菌分生孢子懸浮液，并且盡可能將白僵菌分生孢子懸浮液涂入楊干象幼蟲排糞孔中是提高白僵菌殺蟲效果的關(guān)鍵。由于白天陽光足蒸發(fā)快，可選擇在傍晚進(jìn)行涂菌，以防止剛涂入的菌液蒸發(fā)變干，也可以通過增大孢子濃度和防治次數(shù)來提高對(duì)楊干象的控制效果。當(dāng)然，對(duì)提高分生孢子在低濕度條件下的萌發(fā)能力與其他不利環(huán)境條件的適應(yīng)能力尚需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究篩選出的白僵菌菌株CFCC87323對(duì)楊干象幼蟲致病力最高，ACCC30830次之，菌株ACCC30831和CFCC87327對(duì)楊干象幼蟲也表現(xiàn)出較好的致病效果。本研究為安全有效地控制楊干象種群及其危害探索出了一條新途徑，相關(guān)菌株在開發(fā)生物殺蟲劑與楊干象生物防治方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

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(責(zé)任編輯 朱乾坤)

Screening of High Virulent Entomopathogenic Fungal Strains to Infect Larvae ofCryptorrhynchuslapathi(Coleoptera: Curculionidae)

Cao Qingjie Chi Defu

(CollegeofForestry，NortheastForestryUniversityHarbin150040)

【Objective】 Because larvae ofCryptorrhynchuslapathibore and feed in tree trunk, it is very difficult to control this pest with chemical pesticides. In this study, we screened fungal strains with high pathogenicity to larvae ofC.lapathi, and determined the control effect to provide the basis for biological control the pest. 【Method】 In this study, 7 entomopathogenic fungal strains were tested for pathogenicity toC.lapathilarvae in laboratory. The strong virulent strains were selected and used for infecting trials in the field. The pathogenic symptoms of infection were observed. 【Result】1)The CFCC8732 conidiospore suspension at the concentration of l08conidia·mL-1was used to infect larvae ofC.lapathi. in lab, and the results showed that the adjusted mortality rate ofC.lapathilarvae was 93.38%, the quickest median lethal times (LT50) was 3.536 d, and the median lethal concentration (LC50) was 7.0×103conidia·mL-1. In the field experiments, the conidiospore suspension with l08conidia·mL-1was smeared on the tree trunk infested byC.lapathilarvae, and the results showed that the adjusted death rate ofC.lapathilarvae caused by infection of strains CFCC87323 was 77.62%. 2) The strain of ACCC30830 at the of concentration of l08conidia·mL-1was used to infect larvae ofC.lapathi, and the adjusted death rate of larvae was 81.46%, the LT50was 4.248 d and the LC50was 5.43×103conidia·mL-1. In the field experiments, the conidiospore suspension with l08conidia·mL-1was smeared on the infested trunk ofC.lapathilarvae, and the adjusted death rate ofC.lapathilarvae caused by infection of strains ACCC30830 was 66.06%. 3)The strain of ACCC30830 conidiospore suspension at the concentration of l08conidia·mL-1was used to infect larvae ofC.lapathiin lab, and the results showed that the adjusted mortality rate of larvae was 73.51%. In the field experiments, the adjusted mortality rate of larvae was 58.48%. 4)The CFCC87327 conidiospore suspension at the concentration of l08conidia·mL-1was used to infect larvae ofC.lapathiin lab, the results showed that the adjusted mortality rate of larvae was 72.85%, In the field experiments, the adjusted mortality rate of larvae was 56.32%. 5)As for the pathogenic symptoms, the time from the appearance of symptoms with infection of the strains CFCC87323 to dead body ofC.lapathilarvae took (74.67±2.31) h. From the beginning of infection byC.lapathilarvae to the hypha of strains CFCC87323 covering the whole body took (93.67±3.21) h. 【Conclusion】 The results indicated that strain CFCC87323 ofBeauveriabassianahad strongest pathogenicity toC.lapathilarva and the strain ACCC30830 took the second place. The strains ACCC30830 and CFCC87327 also showed pathogenic effect toC.lapathilarva. This study provided a new way to safely and effectively control the population ofC.lapathiand their damages to the plants. Key words：Cryptorrhynchuslapathi； pathogenicity；Beauveriabassiana； the quickest median lethal times (LT50)； the median lethal concentration (LC50)

10.11707/j.1001-7488.20170115

2015-01-27；

2015-03-28。

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD19B07-04)。

S763.306.4

A

1001-7488(2017)01-0119-09

*遲德富為通訊作者。