王金柱+徐瑩瑩

摘 要：目的：采用高效液相色譜法（HPLC法）測定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)含量。方法：應(yīng)用C18色譜柱，流動相選磷酸二氫鉀-乙腈（PH調(diào)節(jié)采用磷酸，并將PH控制在3.2），最佳流速為1.0mL·min-1，柱溫控制在30攝氏度左右；檢測波長260nm，進樣量10μL；以此測定注射用腺苷鈷胺中有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果：實驗中精密度及準(zhǔn)確度等全部符合樣品分析的要求。其中，腺苷鈷胺、氰鈷胺與相鄰峰的分離度佳，其線性范圍分別是100～0.2μg·mL-1（R=0.9999）、10～0.1μg·mL-1（R=10000）。結(jié)論：HPLC法操作過程簡單、快速，精密度及準(zhǔn)確率高，專屬性強，能夠良好的測定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)含量，值得推廣。

關(guān)鍵詞：注射用腺苷鈷胺；HPLC法；有關(guān)物質(zhì)；氰鈷胺

注射用腺苷鈷胺為抗貧血藥，可用于貧血（巨幼紅細(xì)胞性、營養(yǎng)不良性、妊娠期）、神經(jīng)根炎、三叉神經(jīng)炎、坐骨神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹、多發(fā)性神經(jīng)炎等疾病的輔助治療，也可以用于營養(yǎng)性神經(jīng)疾患及由于放射線或藥物所引起的白細(xì)胞減少癥等[1]。腺苷鈷胺是維生素B12在人體內(nèi)的活性輔酶之一，是細(xì)胞生長及繁殖、維持神經(jīng)髓鞘完整性的必需物質(zhì)之一[2]。然而，腺苷鈷胺缺點在于對酸、堿、光的不穩(wěn)定性，且在制備過程中多產(chǎn)生雜質(zhì)氰化鈷胺[3]。氰化鈷胺在結(jié)構(gòu)上含有氰根這種劇毒性結(jié)構(gòu)，其不能作為注射藥物。注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)的測定利用吸光度法對藥品中氰化鈷胺一類已知雜質(zhì)加以控制，因此， 運用恰當(dāng)?shù)姆椒y定注射用腺苷鈷胺內(nèi)有關(guān)物質(zhì)含量，來更加嚴(yán)格的控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全是十分重要的。

1 儀器與試劑、藥品

1.1儀器

電子天平，高效液相色譜儀。

1.2 試劑與藥品

腺甘鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品；氰鈷胺對照品；注射用腺甘鈷胺樣品；色譜純：乙腈；分析純：磷酸二氫鉀、磷酸。

2方法

2.1.溶液的制備[4]

取腺甘鈷胺加水分別稀釋成含腺甘鈷胺1.0mg/mL和25μg/mL對照溶液，取氰鈷胺藥品，加水制備成含氰鈷胺2μg/mL的溶液作對照品溶液。

2.2色譜條件[5]

色譜柱為C18色譜柱；檢測波長260nm；柱溫大概控制在30攝氏度左右；流動相選磷酸二氫鉀-乙腈，選用磷酸來調(diào)節(jié)PH值，并將PH值大約控制在3.2。最佳流速設(shè)置為1.0mL·min-1；每次注入藥量為10μL。

2.3方法

取用10μL對照溶液注入高效液相色譜儀中，并調(diào)節(jié)好靈敏度，令主成份的峰高可以達(dá)到總量程的20%-25%之間。精密測量并取用供試品溶液，對照用溶液及氰化鈷胺對照品溶液，每種各為10μL，且將其分別注進高效液相色譜儀中，觀察并記錄色譜圖，并記下色譜圖達(dá)到主成分峰的保留時間的2.5倍。如果供試品溶液色譜中出現(xiàn)了與氰鈷胺相對應(yīng)的峰，則要求含量小于1.0%，而供試品溶液中各種雜質(zhì)的峰的面積的和必須小于等于主峰面積的兩倍。

2.4最低檢測限與定量限試驗

2.4.1腺苷鈷胺的檢測限及定量限

利用電子天平精確稱取腺苷鈷胺對照品，并對其加水進行稀釋，在已選定好的色譜條件下進行檢測。當(dāng)腺苷鈷胺的信噪比達(dá)到10：1時，可計算出腺苷鈷胺的定量限約為0.915ng，而在信噪比為3：1的時候，計算出的腺苷鈷胺的定量限大概是0.57。

2.4.2氰鈷胺的檢測限和定量限

利用電子天平精確稱取氰鈷胺對照品，并對其加水進行稀釋，在已選定好的色譜條件下進行檢測。當(dāng)氰鈷胺的信噪比達(dá)到10：1時，可計算出腺苷鈷胺的定量限約為0.915ng，而在信噪比為3：1的時候，計算出的氰鈷胺的定量限大概是0.57。

3 結(jié)果

實驗中精密度及準(zhǔn)確度等全部符合樣品分析的要求。其中，腺苷鈷胺、氰鈷胺與相鄰峰的分離度佳，其線性范圍分別是100～0.2μg·mL-1（R=0.9999）、10～0.1μg·mL-1（R=10000）。

4 討論

腺苷鈷胺是維生素B12在人體內(nèi)的活性輔酶之一，是細(xì)胞生長及繁殖、維持神經(jīng)髓鞘完整性的必需物質(zhì)之一，腺甘鈷胺常被用來治療巨幼細(xì)胞性貧血、妊娠期貧血等，還被用來輔助治療各類神經(jīng)炎等神經(jīng)性疾病[6-9]。但是，其成分內(nèi)的有關(guān)物質(zhì)的相關(guān)研究文獻(xiàn)較少。而其中，氰鈷胺及羥鈷胺是現(xiàn)階段已知的注射用腺甘鈷胺成分中的雜質(zhì)[10-12]。由于藥物的生產(chǎn)工藝的改變，其中的雜質(zhì)物質(zhì)不能夠有效的分離出去[13]。因此，為達(dá)到提高腺甘鈷胺主成分峰與雜質(zhì)峰的分離度的目的，本文設(shè)計的實驗則是選用適合于HPLC法條件的樣品，改善有關(guān)物質(zhì)和待測成分的分離的效果，并控制總的雜質(zhì)與氰鈷胺。

HPLC法方法簡單，操作便利、快捷，且具有很高的靈敏度，準(zhǔn)確度、檢測限與定量限全部附合相關(guān)要求，適合用于控制注射用腺甘鈷胺有關(guān)物質(zhì)，值得推廣[14-15]。

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作者簡介：王金柱，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司，工程師，150025，本科，1989年03月03日，藥品質(zhì)量方向。