王妍　姜忠元　董錫文

摘要：為了研究光質(zhì)、營養(yǎng)因素對黑木耳[Aurieuzaria auricular （L. ex Hook.）Uzderw.]菌絲鎖狀聯(lián)合形成的影響，以5個(gè)黑木耳品種為研究對象，通過平板插片培養(yǎng)法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，紅光、藍(lán)光和紫光對黑木耳品種H29和SL15鎖狀聯(lián)合形成有顯著的促進(jìn)作用；H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時(shí)間4、4、5、3 min后有利于鎖狀聯(lián)合形成；供試的4種碳源中，可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖對5個(gè)黑木耳品種鎖狀聯(lián)合的形成有促進(jìn)作用；5個(gè)黑木耳品種在以牛肉膏為氮源時(shí)，鎖狀聯(lián)合顯著高于其他氮源；5個(gè)黑木耳品種在加入丙氨酸和谷氨酸的培養(yǎng)基中鎖狀聯(lián)合有顯著的提高。

關(guān)鍵詞：黑木耳[Aurieuzaria auricular （L. ex Hook.）Uzderw.]；鎖狀聯(lián)合；光質(zhì)；營養(yǎng)因素

中圖分類號：S646.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）04-0682-04

黑木耳[Aurieuzaria auricular（L. ex Hook.）Uzderw.]是世界上最早實(shí)現(xiàn)人工栽培的食用菌，其食用和藥用價(jià)值極高，受到消費(fèi)者的普遍歡迎[1]；目前中國已成為世界上黑木耳的主產(chǎn)國[2]。隨著黑木耳栽培方式的日漸改進(jìn)，在黑木耳菌絲生長過程中發(fā)現(xiàn)很多環(huán)境因素會對其產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響黑木耳的產(chǎn)量。光質(zhì)、紫外光照射、碳源、氮源和氨基酸等外在因素在黑木耳菌絲生長過程中起著重要作用，會影響黑木耳菌絲鎖狀聯(lián)合結(jié)構(gòu)的形成[3，4]。形成鎖狀聯(lián)合的菌絲再形成耳基的比例為100%，而不形成鎖狀聯(lián)合的菌絲形成耳基的比例僅為20%左右；并且形成鎖狀聯(lián)合的菌絲形成耳基的時(shí)間比不形成鎖狀聯(lián)合的菌絲形成耳基的時(shí)間提前30 d左右[5-7]。關(guān)于黑木耳生長研究的成果已有很多[8-12]，但關(guān)于不同黑木耳品種鎖狀聯(lián)合形成的差異性比較還鮮有報(bào)道。因此，試驗(yàn)對此進(jìn)行了探討，以期揭示不同外在因素對黑木耳菌絲鎖狀聯(lián)合形成的影響，進(jìn)而為黑木耳生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 供試黑木耳品種的菌株購于黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，分別是黑微15（H15）、黑微29（H29）、新科1號（XK1）、新科10號（XK10）、神龍15號（SL15）。

1.1.2 培養(yǎng)基 ①PDA固體培養(yǎng)基[13，14]組成為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g、VB1 10 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL，pH 5.5。②基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成為KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g、VB1 10 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL，pH 5.5。③碳源培養(yǎng)基組成是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.5%的蛋白胨組成無碳培養(yǎng)基，再在無碳培養(yǎng)基中分別添加2%的葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、蔗糖組成不同的碳源培養(yǎng)基。④氮源培養(yǎng)基組成是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加2%的葡萄糖組成不同的無氮培養(yǎng)基，再在無氮培養(yǎng)基中分別添加0.5%的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4組成不同的氮源培養(yǎng)基。⑤氨基酸培養(yǎng)基組成是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2%的葡萄糖和0.5%的蛋白胨，再分別添加0.4%的丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、蘇氨酸（Thr）、酪氨酸（Try）組成不同的氨基酸培養(yǎng)基[15]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化與培養(yǎng) 在無菌條件下，將供試黑木耳各品種菌株轉(zhuǎn)接在經(jīng)過滅菌的PDA固體斜面培養(yǎng)基中央，置于恒溫培養(yǎng)箱里，于25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)。

1.2.2 不同光質(zhì)處理 光質(zhì)有LED光源的紅光、藍(lán)光、白光、綠光、紫光。將LED光源固定于恒溫培養(yǎng)箱頂部，培養(yǎng)溫度為25 ℃。取活化好的黑木耳各品種菌株，用打孔器在菌落邊緣打取相同菌齡的菌種塊5 mm，轉(zhuǎn)接在PDA固體平板培養(yǎng)基上，并在菌種塊一定距離處以45°傾斜角插入蓋玻片（插片法）[16]，待蓋玻片上長滿菌絲后用于顯微觀察。光照組實(shí)施24 h照射處理，對照組實(shí)施24 h黑暗處理[17]，每個(gè)處理設(shè)置6個(gè)重復(fù)。

1.2.3 紫外光照射處理 依次將接種3 d后的PDA固體平板培養(yǎng)基（插片）放在超凈工作臺的30 W紫外燈垂直下方約30 cm處，打開培養(yǎng)皿蓋，按照設(shè)定的時(shí)間1、2、3、4、5 min分別照射紫外光。照射后遮光，防止光復(fù)活。不進(jìn)行紫外光照射的為對照組，都置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)25 ℃培養(yǎng)。隔3 d再進(jìn)行一次上述處理；每處理設(shè)置6個(gè)重復(fù)。

1.2.4 不同營養(yǎng)因素處理 將活化后的菌種分別轉(zhuǎn)接在含有不同碳源、氮源、氨基酸的固體平板培養(yǎng)基中央（插片），都以基礎(chǔ)培養(yǎng)基（插片）為對照，25 ℃恒溫培養(yǎng)；每處理設(shè)置6個(gè)重復(fù)。

1.2.5 計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì) 每處理培養(yǎng)12 d后隨機(jī)選取5個(gè)平板，將插片取出，置于顯微鏡下觀察，記錄鎖狀聯(lián)合的個(gè)數(shù)、菌絲數(shù)，并計(jì)算出鎖狀聯(lián)合菌絲比率，其計(jì)算公式為：

鎖狀聯(lián)合菌絲比率=鎖狀聯(lián)合個(gè)數(shù)/菌絲數(shù)，

處理組鎖狀聯(lián)合菌絲比率=處理組鎖狀聯(lián)合菌絲比率-對照組鎖狀聯(lián)合菌絲比率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Microsoft Office Excel 2007程序處理，并用其制表和繪圖；運(yùn)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 光質(zhì)對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響

光質(zhì)是一種重要的環(huán)境因素，能影響生物的生存、生長和發(fā)育；光質(zhì)對黑木耳品種各菌株鎖狀聯(lián)合形成的影響情況見圖1。由圖1可知，黑木耳品種H29在紅光和藍(lán)光處理下，鎖狀聯(lián)合菌絲比率顯著高于其他4個(gè)品種（P<0.05）；5個(gè)黑木耳品種在白光處理下鎖狀聯(lián)合菌絲比率均較低，相互之間的差異不顯著（P>0.05）；H15和H29在綠光處理下鎖狀聯(lián)合菌絲比率明顯高于其他3個(gè)品種，其中顯著高于XK1、XK10品種（P<0.05）；SL15在紫光處理下鎖狀聯(lián)合菌絲比率達(dá)到最高值，明顯高于其他4個(gè)品種，其中顯著高于XK1、XK10品種（P<0.05）?？梢?，不同光質(zhì)，尤其是紅光、藍(lán)光和紫光分別對H29和SL15鎖狀聯(lián)合的形成影響顯著。

2.2 紫外光照射對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響

紫外線是一種不可見光，其照射菌絲體后可引起其發(fā)生諸如生長發(fā)育、物質(zhì)轉(zhuǎn)換、能量代謝等方面的變化，從而影響菌絲體生長，而且不同長短的照射時(shí)間對菌絲體產(chǎn)生的影響也不同[18-21]。試驗(yàn)里紫外光照射對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響情況見圖2。由圖2可知，H15在紫外光照射4 min后鎖狀聯(lián)合菌絲比率達(dá)到最高，且明顯高于其他品種；H29隨著照射時(shí)間的增長，鎖狀聯(lián)合菌絲比率呈現(xiàn)減-增-減的動態(tài)變化，在紫外光照射4 min后鎖狀聯(lián)合菌絲比率達(dá)到最高值；XK1隨著照射時(shí)間的增長，鎖狀聯(lián)合菌絲比率呈現(xiàn)增-減-增的動態(tài)變化，當(dāng)紫外光照射時(shí)間為5 min時(shí)，鎖狀聯(lián)合菌絲比率達(dá)到最高值，且顯著高于其他品種（P<0.05）；XK10鎖狀聯(lián)合菌絲比率隨著紫外光照射時(shí)間的增長呈現(xiàn)緩慢遞減的變化，其鎖狀聯(lián)合的形成受紫外光照射時(shí)間的影響并不明顯；SL15在紫外光照射時(shí)間為3 min時(shí)，鎖狀聯(lián)合菌絲的比率達(dá)到最高值。因此，H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時(shí)間為4、4、5、3 min后有利于鎖狀聯(lián)合的形成。

2.3 不同碳源對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響

碳源是真菌菌絲生長發(fā)育過程中所需的一種主要營養(yǎng)物[22]。試驗(yàn)里不同碳源對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響情況見表1。由表1可知，黑木耳品種H15在以可溶性淀粉為碳源時(shí)，鎖狀聯(lián)合菌絲比率最高；H29在以蔗糖為碳源時(shí)，鎖狀聯(lián)合菌絲比率最高，達(dá)到0.996，且顯著高于其他品種（P<0.05）；XK1、XK10、SL15均在以麥芽糖為碳源時(shí)鎖狀聯(lián)合菌絲比率最高，且顯著高于H15（P<0.05），其中XK1、XK10顯著高于H29（P<0.05）。說明黑木耳菌絲對雙糖和多糖的利用較好，以可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖作為碳源對黑木耳鎖狀聯(lián)合的形成有促進(jìn)作用。

2.4 不同氮源對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響

黑木耳菌絲生長發(fā)育過程中能利用的氮源有尿素、氨、銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等，試驗(yàn)里4種不同氮源對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響情況見圖3。由圖3可知，5個(gè)黑木耳品種在以牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基中，鎖狀聯(lián)合菌絲比率的形成明顯高于其他氮源，其中H15和H29的鎖狀聯(lián)合菌絲比率最突出，對氮源的利用率最高；以牛肉膏為氮源的XK1、XK10和SL15鎖狀聯(lián)合菌絲比率也要高于同品種其他氮源?？梢?，以牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基有利于5個(gè)黑木耳品種鎖狀聯(lián)合的形成。

2.5 不同氨基酸對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響

氨基酸作為一種營養(yǎng)物，對黑木耳菌絲體生長和子實(shí)體形成具有一定的影響[23]；因此，在黑木耳菌絲體生長發(fā)育階段添加不同種類氨基酸，可以比較其對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響。不同氨基酸對黑木耳鎖狀聯(lián)合形成的影響情況見圖4。由圖4可知，H29在丙氨酸培養(yǎng)基中鎖狀聯(lián)合菌絲比率最高，且顯著高于其他品種（P<0.05）；其次為谷氨酸培養(yǎng)基。在4種不同氨基酸培養(yǎng)基中，丙氨酸和谷氨酸培養(yǎng)基對5個(gè)黑木耳品種鎖狀聯(lián)合的形成有較明顯的促進(jìn)作用。

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，紅光、藍(lán)光和紫光對黑木耳品種H29和SL15鎖狀聯(lián)合的形成有顯著促進(jìn)作用，白光對5個(gè)黑木耳品種鎖狀聯(lián)合的形成作用不大，因此生產(chǎn)中應(yīng)盡量避免白光的使用。紫外光不同照射時(shí)間處理后，H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時(shí)間為4、4、5、3 min后促進(jìn)了鎖狀聯(lián)合菌絲比率的提高，因此生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)品種選擇不同的紫外光照射時(shí)間。參試的4種碳源中，可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖對5個(gè)黑木耳品種鎖狀聯(lián)合菌絲比率的提高有促進(jìn)作用，葡萄糖的促進(jìn)作用不明顯。以牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基有利于鎖狀聯(lián)合菌絲比率的提高。培養(yǎng)基中添加丙氨酸和谷氨酸有利于鎖狀聯(lián)合菌絲比率的提高，因此，生產(chǎn)上可考慮適當(dāng)加入這2種氨基酸。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，相同外在因素對不同黑木耳品種鎖狀聯(lián)合的形成影響有所不同。生產(chǎn)實(shí)踐中，可根據(jù)不同黑木耳品種選擇不同的培養(yǎng)條件，進(jìn)而縮短生產(chǎn)周期、增加產(chǎn)量、節(jié)本增效。不過試驗(yàn)僅進(jìn)行了單因素比較，各因素、各水平的優(yōu)化組合綜合效果比較還有待下一步探究。

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