陸 珠 李 玉* 張 波 王 旭

（1 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，教育部食藥用菌工程研究中心，吉林長(zhǎng)春130118；2 延邊農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林延邊133000）

月夜菌（Lampteromyces japonicus）為擔(dān)子菌門(mén)（Basidiomycota）傘菌綱（Agariomycetes）傘菌目（Agaricales）小皮傘科（Marasmiaceae）臍菇屬（Lampteromyces）。新鮮子實(shí)體在黑暗條件下發(fā)熒光得名，因此特性又名發(fā)光菌[1]、月光菌[2]。因其毒性極強(qiáng)又被稱(chēng)為毒側(cè)耳[3]，食后1 h 即可發(fā)病，主要癥狀為吐瀉、腹痛、下痢頻繁，眩暈、沉悶、呼吸緩慢，脈弱，心音微弱，嗜睡，重者呼吸困難等，如不及時(shí)搶救，會(huì)導(dǎo)致死亡[4]。月夜菌夏秋季生長(zhǎng)于闊葉樹(shù)干或倒木上，主要分布于亞洲[5]。日本學(xué)者在月夜菌的子實(shí)體中提取出月夜菌素（illudin S），它是一類(lèi)倍半萜類(lèi)抗生素[6]，有研究表明月夜菌素具有抗菌和抗腫瘤效果，可醫(yī)治小白鼠的腹水癌[7～11]。月夜菌中提取的菌醇對(duì)霉菌具有明顯的抑制作用[12，13]，月夜菌菌絲體及其丙酮粗提物對(duì)線蟲(chóng)有毒殺作用，是一類(lèi)有應(yīng)用前景的食線蟲(chóng)真菌資源[14]。目前對(duì)月夜菌的藥理藥性研究較多，但尚未有人對(duì)夜月菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，導(dǎo)致月夜菌的人工栽培方面也進(jìn)展緩慢，后續(xù)研究進(jìn)展緩慢。筆者對(duì)月夜菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，以期為后續(xù)月夜菌人工栽培提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料供試月夜菌于2014年9月9日采于吉林省白山市撫松縣露水河，通過(guò)組織分離，PDA培養(yǎng)基純化獲得，菌種現(xiàn)存放于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同碳源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響 分別設(shè)置葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精、乳糖各20 g為碳源處理，每個(gè)處理重復(fù)3次，用打孔器打出直徑為7 mm 的菌種塊，接于內(nèi)徑為90 mm 的培養(yǎng)皿中央。利用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，每隔24 h 觀察一次，并對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)勢(shì)等菌落特征進(jìn)行詳細(xì)描述和記錄，直至菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿。采用WPS 表格對(duì)獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，用SPSS Statistics V17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.2 不同氮源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響 分別設(shè)置硝酸銨、酵母浸粉、蛋白胨、尿素、氯化銨各2 g為氮源處理。每個(gè)處理重復(fù)3 次。接種、記錄、測(cè)定、分析方法同1.2.1。

1.2.3 不同溫度對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響 分別設(shè)置10℃、15℃、20℃、25℃、30℃六個(gè)處理。每個(gè)處理重復(fù)3次。接種、記錄、測(cè)定、分析方法同1.2.1。

1.2.4 不同pH 對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響 分別設(shè)置pH 5、6、7、8、9。每個(gè)處理重復(fù)3次。接種、記錄、測(cè)定、分析方法同1.2.1。

1.2.5 正交試驗(yàn) 以碳源、氮源、pH和溫度為因素，根據(jù)四因素五水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)四因素五水平的正交試驗(yàn)，具體方案見(jiàn)表1。（除溫度試驗(yàn)外其他同1.2.1）通過(guò)極差分析獲得最佳組合。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響由圖1可以看出月夜菌在葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精和乳糖6 種碳源上均能生長(zhǎng)，在乳糖培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)勢(shì)明顯減弱。由表2可以看出菌絲生長(zhǎng)速度除果糖較慢以外，其他處理菌絲生長(zhǎng)速度雖有差別但相差并不大。綜合菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲生長(zhǎng)速度認(rèn)為葡萄糖、蔗糖和糊精是月夜菌可利用的較好碳源。

2.2 不同氮源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響由圖2和表3 可以看出酵母浸粉是比較優(yōu)良的氮源，氯化銨雖然菌絲生長(zhǎng)速度較快但菌絲長(zhǎng)勢(shì)偏弱。蛋白胨、尿素、硝酸銨菌絲生長(zhǎng)速度較慢，菌絲長(zhǎng)勢(shì)偏弱均不適宜作為夜月菌培養(yǎng)基的氮源。

表1 L25（54）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

表2 不同碳源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響

表3 不同氮源對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3 不同溫度對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響由圖3和表4可以看出月夜菌在10～30℃均能生長(zhǎng)，但不宜在10～20℃溫度培養(yǎng)。最適溫度為30℃，此溫度培養(yǎng)菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)。由此可見(jiàn)，溫度對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)影響較大。

圖1 不同碳源培養(yǎng)基上月夜菌菌絲生長(zhǎng)情況

圖2 不同氮源培養(yǎng)基上月夜菌菌絲生長(zhǎng)情況

圖3 不同培養(yǎng)溫度月夜菌菌絲生長(zhǎng)情況

表4 不同培養(yǎng)溫度對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響

表5 不同pH對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響

2.4 不同pH 對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)的影響由圖4 和表5 可以看出月夜菌在pH5.0～9.0 均能生長(zhǎng)，pH 對(duì)夜月菌菌絲的生長(zhǎng)影響較小，但月夜菌喜歡堿性環(huán)境，隨著pH 上升菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲生長(zhǎng)速度都有加強(qiáng)、加快，在pH 9.0 時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)。

2.5 正交試驗(yàn)單因素試驗(yàn)不能考慮到交互作用的影響作用，需要進(jìn)行正交試驗(yàn)，才能得出最終結(jié)果。試驗(yàn)以碳源、氮源、溫度、pH組建四因素五水平的正交試驗(yàn)，各試驗(yàn)菌絲生長(zhǎng)情況見(jiàn)圖5。由圖5可見(jiàn)第9 和第16 組菌絲均沒(méi)有生長(zhǎng)，試驗(yàn)結(jié)果直觀分析見(jiàn)表6。由表6 可以看出，溫度的極差最大為1.61，溫度是影響月夜菌菌絲生長(zhǎng)速度的最主要因素，月夜菌菌絲生長(zhǎng)的最佳組合為溫度25℃、pH5、糊精、蛋白胨。

表6 菌絲生長(zhǎng)的正交試驗(yàn)結(jié)果的直觀分析

圖4 不同pH月夜菌菌絲生長(zhǎng)情況

圖5 不同組合菌絲生長(zhǎng)情況

由表7 可以看出，溫度的F 值最大，然后依次為pH、碳源、氮源。四因素的顯著性差異大小為:溫度＞pH＞碳源＞氮源，這與直觀分析結(jié)果一致。

表7 菌絲生長(zhǎng)的正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析

3 小 結(jié)

通過(guò)對(duì)月夜菌菌絲生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、溫度和pH 的單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得出月夜菌最佳生長(zhǎng)條件是溫度25℃、pH5、碳源為糊精、氮源為蛋白胨。

月夜菌作為一種毒菌和藥用菌，研究者對(duì)其藥理藥性方面研究較多，藥理作用方面對(duì)抗腫瘤和抑菌活性、殺蟲(chóng)作用研究較多[15]。但在其生物學(xué)特性、栽培配方、栽培方式等方面研究較少。對(duì)月夜菌生物學(xué)特性進(jìn)行研究為更深入的研究及開(kāi)發(fā)利用月夜菌提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。