王愛民，焦海濤，吳建龍，王學(xué)文，李建輝

(1承德市中心醫(yī)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院)

胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)變化及其臨床意義

王愛民1，焦海濤2，吳建龍1，王學(xué)文1，李建輝1

(1承德市中心醫(yī)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院)

目的 探討表皮生長因子受體(EGFR)、c-Met、Ki-67在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選取胃癌組織88例份、正常胃黏膜組織46例份，采用免疫組化一步法檢測EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)，并分析三者表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織EGFR陽性表達(dá)率為86.36%(76/88)、c-Met陽性表達(dá)率為82.95%(73/88)、Ki-67高表達(dá)率為94.32%(83/88)，正常胃黏膜組織分別為19.57%(9/46)、17.39%(8/46)、21.74%(10/46)，二者比較P均<0.05。胃癌組織EGFR、c-Met陽性表達(dá)和Ki-67高表達(dá)兩兩互呈正相關(guān)關(guān)系(P均<0.05)。結(jié)論 胃癌組織EGFR、c-Met和Ki-67表達(dá)均升高，三者在促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用。

胃癌；表皮生長因子受體；c-Met；Ki-67；免疫組織化學(xué)

據(jù)2011年統(tǒng)計，我國胃癌的發(fā)病率為31.21/10萬、病死率為22.08/10萬[1]，分別居所有惡性腫瘤的第2、3位[2]。近年來，隨著診療手段的不斷進(jìn)步，早期胃癌患者預(yù)后有了較大改善，但晚期胃癌患者預(yù)后仍較差，5年生存率僅為15%左右[3]。故尋找預(yù)測胃癌發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)標(biāo)記物具有重要意義[4,5]。本研究觀察了表皮生長因子受體(EGFR)、c-Met和Ki-67在胃癌組織中的表達(dá)變化。現(xiàn)分析結(jié)果，并探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年10月～2012年7月承德市中心醫(yī)院手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本88例份。所有標(biāo)本經(jīng)組織病理檢查證實。根據(jù)2010年美國癌癥聯(lián)合會《惡性腫瘤TNM分期》(第7版)標(biāo)準(zhǔn)TNM分期為T2N1M0期，Lauren分型為腸型；患者男52例、女36例，年齡(58.0±4.8)歲。同期選擇正常胃黏膜組織標(biāo)本46例份，患者男26例、女20例，年齡(54.0±6.7)歲。胃癌患者及正常胃黏膜者性別、年齡具有可比性。所有病例臨床病理資料及隨訪記錄齊全。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 胃癌組織和正常胃黏膜組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)檢測 采用免疫組化一步法。取手術(shù)切除的胃癌組織、正常胃黏膜組織，10%中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。切片經(jīng)80 ℃烤箱烤片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫苯，雙蒸水沖洗；高壓抗原修復(fù)，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，鼠抗人多克隆一抗4 ℃孵育過夜，羊抗鼠/兔IgG聚合物二抗37 ℃孵育20 min，DAB顯色5～10 min，蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，隨機選取5個400倍視野，顯微鏡下觀察。結(jié)果判定：① EGFR、c-Met表達(dá)：采用Volm雙評分法[6]。陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。陽性細(xì)胞所占比例：≤10%為0分，>10%～≤25%為1分，>25%～≤50%為2分，>50%為3分；染色強度：未著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，褐色或棕黃色為3分。二者之和≥1分為陽性。②Ki-67表達(dá)：胃癌組織Ki-67陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀、灶狀或彌漫分布；正常胃黏膜組織Ki-67陽性表達(dá)局限于黏膜層的腺體頸部。根據(jù)Lee等[7]分類方法，以Ki-67指數(shù)(Ki-67 LI)20%作為截斷值，Ki-67 LI>20%為Ki-67高表達(dá)，Ki-67 LI≤20%為Ki-67低表達(dá)。Ki-67 LI=Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)/100個細(xì)胞。分析胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)比較 胃癌組織及正常胃黏膜組織EGFR陽性表達(dá)率分別為86.36%(76/88)、19.57%(9/46)，c-Met陽性表達(dá)率分別為82.95%(73/88)、17.39%(8/46)，Ki-67高表達(dá)率分別為94.32%(83/88)、21.74%(10/46)；二者比較P均<0.05。

2.2 胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織EGFR陽性表達(dá)與c-Met陽性表達(dá)、Ki-67高表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.463、0.524，P均<0.05)，c-Met陽性表達(dá)與Ki-67高表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.429，P<0.05)。

3 討論

近年來，隨著內(nèi)鏡等診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，大量早期胃癌得以發(fā)現(xiàn)并及時治療，明顯改善了患者的總體生存率及近期預(yù)后，但對于進(jìn)展期胃癌患者，即使積極、正規(guī)治療近期預(yù)后仍不理想。因此，尋找早期檢測胃癌的特異性分子生物學(xué)標(biāo)記物具有重要意義。

EGFR是一種分子量約為180 kDa的跨膜糖蛋白，具有配體誘導(dǎo)的酪氨酸蛋白激酶活性，一旦與表皮生長因子(EGF)結(jié)合，即可啟動細(xì)胞核內(nèi)的相關(guān)基因，促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖、抑制細(xì)胞凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多種腫瘤組織中EGFR高表達(dá)[8～10]，其高表達(dá)者預(yù)后差、腫瘤轉(zhuǎn)移可能性大[11]。c-Met是一種由c-Met原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物，亦具有酪氨酸激酶活性，與多種癌基因產(chǎn)物和調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)，參與細(xì)胞信息傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架重排的調(diào)控，是細(xì)胞增殖、分化的重要調(diào)節(jié)因子。目前認(rèn)為，c-Met與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在胃癌組織中c-Met高表達(dá)，其高表達(dá)與胃癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12，13]。Peng等[14]經(jīng)Meta分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織c-Met表達(dá)越高，患者生存時間越短。表明c-Met高表達(dá)參與胃癌的發(fā)展與侵襲，可導(dǎo)致患者病情惡化，預(yù)后不良。Ki-67是一種具有非組蛋白特點的核蛋白，存在于具有增殖活性的細(xì)胞核中，由第10號染色體長臂所屬基因轉(zhuǎn)錄、翻譯而成。該蛋白與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)，是目前評估腫瘤細(xì)胞增殖的蛋白之一。有研究證實，胃癌組織Ki-67陽性表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織[15]，表明Ki-67高表達(dá)可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織EGFR、c-Met陽性表達(dá)率及Ki-67高表達(dá)率均高于正常胃黏膜組織，表明EGFR、c-Met和Ki-67可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程。目前，對EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系尚未明確。本研究發(fā)現(xiàn)，隨EGFR表達(dá)增加，c-Met表達(dá)亦呈增加趨勢，二者呈正相關(guān)關(guān)系，由此推測EGFR、c-Met在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能具有協(xié)同作用；EGFR與Ki-67、c-Met與Ki-67表達(dá)同樣呈正相關(guān)關(guān)系，說明三者對胃癌的發(fā)展具有協(xié)同作用，但目前關(guān)于三者相互影響的具體機制尚不明確。

綜上所述，胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)升高，三者在促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用。

[1] Chen W, Zheng R, Zeng H, et al. Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Chin J Cancer Res, 2015,27(1):2-12.

[2] 陳萬青，張思維，曾紅梅，等.中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014，23(1)：1-10.

[3] Ajani JA. Gastroesophageal cancers: progress and problems[J]. J Natl Compr Canc Netw, 2008,6(9):813-814.

[4] Blumenschein GR Jr, Mills GB, Gonzalez-Angulo AM. Targeting the hepatocyte growth factor-cMET axis in cancer therapy[J]. J Clin Oncol, 2012,30(26):3287-3296.

[5] 紀(jì)長偉，鄒繼化，杜金榮，等.胃腸間質(zhì)瘤中Ki-67、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子表達(dá)及其與微血管密度和細(xì)胞增殖的關(guān)系[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(19)：3001-3003.

[6] 劉文峰，猶東，郭鑫，等.胃癌EGFR與C-erbB-2基因表達(dá)的臨床意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32(9)：774-776.

[7] Lee HE, Kim MA, Lee BL, et al. Low Ki-67 proliferation index is an indicator of poor prognosis in gastric cancer[J]. J Surg Oncol, 2010,102(3):201-206.

[8] 于觀貞，陳穎，潘軍，等.ANXA1和EGFR在胃癌中的表達(dá)及與預(yù)后關(guān)系的研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2008，13(8)：691-694.

[9] Abdel-Aziz A, Amin MM. EGFR, CD10 and proliferation marker Ki-67 expression in ameloblastoma: possible role in local recurrence[J]. Diagn Pathol, 2012(7):14.

[10] Rousselet E, Traver S, Monnet Y, et al. Turmor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis induces astrocyte proliferation through the activation of transforming-growth factor-α/epidermal growth factor receptor signaling pathway[J]. Mol Pharmacol, 2012,82(5):948-957.

[11] Tampellini M, Longo M, Cappia S, et al. Co-expression of EGF receptor, TGFalpha and S6 kinase is significantly associated withcolorectal carcinomas with distant metastases at diagnosis[J]. Virchows Arch, 2007,450(3):321-328.

[12] Taniguchi K, Yonemura Y, Nojima N, et al. The relation between the growth patterns of gastric carcinoma and the expression of hepatocyte growth factor receptor(c-met), autocrine motility factor receptor, and urokinase-type plasminogen activator receptor[J]. Cancer, 1998,82(11):2112-2122.

[13] Webb CP, Taylor GA, Jeffers M, et al. Evidence for a role of Met-HCF/SF during Ras-mediated tumorigenesis/metastasis[J]. Oncogene, 1998,17(16):2019-2025.

[14] Peng Z, Zhu Y, Wang Q, et al. Prognostic significance of MET amplification and expression in gastric cancer: a systematic review with meta-analysis[J]. PLoS One, 2014,9(1):e84502.

[15] 王彩霞，王曉，吳慶田，等.MMP-26和Ki67在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012，35(4)：83-84.

(稿件編號：2016-09-22)

承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃(201601A018)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.08.024

R735.2

B

1002-266X(2017)08-0075-02