陳 紅 方 英 徐春志 袁翠霞 景書灝

（貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽(yáng) 550000）

豬瘟診斷技術(shù)研究進(jìn)展

陳 紅 方 英 徐春志 袁翠霞 景書灝

（貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽(yáng) 550000）

豬瘟是傳染病流行的豬瘟病毒感染引起的一種急性、熱性、接觸豬，也被稱為“爛腸瘟”。目前尚無(wú)有效的豬瘟藥物，因此早期診斷豬瘟是減少該病造成的損失的有效措施。本文綜述了豬瘟診斷技術(shù)的研究進(jìn)展，為豬瘟的及時(shí)診斷提供參考。

豬瘟；診斷技術(shù)；進(jìn)展

1 前言

豬瘟是由豬瘟病毒引起的具有高度傳染性和致命性的病毒性疾病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將被列為甲型傳染病。中國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)和巨大的危害，近年來(lái)，疫情已經(jīng)發(fā)生了很大的變化和臨床癥狀，通過(guò)大規(guī)模流行的波浪型散發(fā)性傳染病，臨床癥狀不典型、非典型豬瘟持續(xù)時(shí)間變長(zhǎng)（或慢性腦豬瘟）已成為該病的主要形式，廣泛的亞臨床感染、持續(xù)性感染和豬瘟的預(yù)防免疫耐受的診斷帶來(lái)了一定的困難。

2 豬瘟診斷技術(shù)研究進(jìn)展

2.1 實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷可以及時(shí)準(zhǔn)確地識(shí)別和診斷動(dòng)物傳染病。是控制豬瘟暴發(fā)流行的有效手段。豬瘟的病理變化和臨床癥狀是豬瘟病毒數(shù)量密切相關(guān)，該菌株的毒力和免疫、感染動(dòng)物的年齡和種類。除了豬瘟以外，其他類型的豬瘟也難以通過(guò)臨床癥狀進(jìn)行診斷。因此，有必要對(duì)疑似豬瘟病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。21世紀(jì)以來(lái)，免疫學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，豐富了實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，提高了實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)水平。有豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷方法很多，如直接免疫熒光法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和用于冰凍組織切片的抗原直接免疫熒光法快速檢測(cè)ELISA技術(shù)檢測(cè)結(jié)果，最快可在2h內(nèi)獲得，但這種方法的應(yīng)用也有一定局限性，只有豬出血熱病毒單克隆抗體的使用，可以得到準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果，否則無(wú)法鑒別豬瘟病毒和瘟病毒病毒。除了檢測(cè)豬瘟病毒的表面抗原，RT PCR方法可用于檢測(cè)豬瘟病毒的快速診斷和完整的遺傳物質(zhì)。RT-PCR技術(shù)可以識(shí)別相對(duì)相似的病毒種類。

2.2 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

首先是反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)在豬瘟病毒核酸診斷有針對(duì)性，根據(jù)豬瘟病毒特異性基因序列，合成一對(duì)引物，在引物逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA介導(dǎo)的催化轉(zhuǎn)化，成RNA的互補(bǔ)鏈c DNA，加熱后c DNA與RNA鏈解離，并由DNA聚合酶催化引物延伸產(chǎn)生的雙鏈DNA的目標(biāo)，最后目標(biāo)DNA擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，溴化乙錠染色后，在紫外光下（254nm）可以看到特異擴(kuò)增帶。該方法適用于各種有毒物質(zhì)的檢測(cè)，可用于臨床診斷。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，特異性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好，可快速檢測(cè)。此外，逆轉(zhuǎn)錄巢式聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）也是一種常見(jiàn)的診斷技術(shù)，使用2對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)引物擴(kuò)增完整片段。豬瘟病毒擴(kuò)增的組織材料的含量低，細(xì)胞液，該方法可以在中國(guó)不同基因亞群病毒強(qiáng)毒株和疫苗病毒可以完全分離的流行，而不是與其他豬流感病毒、牛病毒性腹瀉病毒有非特異性反應(yīng)?？梢钥焖贉?zhǔn)確地診斷豬瘟，并從接種過(guò)的豬身上迅速篩選出致命的病毒，并減少未感染的免疫豬被殺死的可能性。

2.3 DNA芯片診斷技術(shù)

DNA芯片診斷技術(shù)是近年來(lái)分子生物學(xué)與微電子學(xué)等多學(xué)科交叉融合而成的一項(xiàng)高新技術(shù)，其原型是20世紀(jì)80年代中期提出的?；蛐酒臏y(cè)序原理是雜交測(cè)序方法，即通過(guò)與一組已知序列的核酸探針雜交進(jìn)行核酸序列測(cè)定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當(dāng)溶液中帶有熒光標(biāo)記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對(duì)應(yīng)位置的核酸探針產(chǎn)生互補(bǔ)匹配時(shí)，通過(guò)確定熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的探針位置，獲得一組序列完全互補(bǔ)的探針序列。據(jù)此可重組出靶核酸的序列。該技術(shù)為基因芯片技術(shù)為豬瘟診斷技術(shù)提供了新的技術(shù)理念，目前已經(jīng)正進(jìn)行這方面的研究，其研究成果將對(duì)我國(guó)豬瘟的防控具有深遠(yuǎn)意義。

3 豬瘟防控方式

豬瘟發(fā)生后，有必要采取相應(yīng)的防控措施，有效控制豬瘟疫情的蔓延，徹底清除疫情。在防治豬瘟的防控措施，多種選擇，包括受感染的豬和豬殺，豬接觸限制交通，急救免疫預(yù)防設(shè)置隔離區(qū)，不同層次建立監(jiān)測(cè)和疫情期間跟蹤系統(tǒng)。多種防治措施和方案在防治效果上各有優(yōu)勢(shì)，但在各項(xiàng)防治措施的實(shí)施中都存在一些問(wèn)題。這次捕殺是最有效和最有效的預(yù)防和控制豬瘟、豬瘟的方法，通過(guò)殺死受感染的豬和可能接觸過(guò)的豬，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)疫情的有效控制。隨著動(dòng)物福利意識(shí)的提高，實(shí)施狩獵政策具有成本巨大、靈活性差的特點(diǎn)，因此對(duì)這一有效的防控措施的實(shí)施也存在一定的爭(zhēng)議。盡管在豬瘟大范圍爆發(fā)的時(shí)間是非常有效的，但與動(dòng)物保護(hù)和動(dòng)物保護(hù)的人士，在實(shí)施捕殺工作的過(guò)程中，也存在一些爭(zhēng)議的防治措施，疫情發(fā)生，造成運(yùn)行平穩(wěn)，速度補(bǔ)償起著非常重要的作用。如果不能及時(shí)給予補(bǔ)償，農(nóng)民將不會(huì)全力配合捕殺，也不能完全消除傳染源，從而導(dǎo)致疫情的蔓延。

4 結(jié)語(yǔ)

豬瘟對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)的威脅越來(lái)越受到人們的重視，如何有效地防治豬瘟已成為研究的熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了多方面的研究，試圖從多個(gè)層面提高豬瘟的綜合防治水平。在疫苗領(lǐng)域，一種有效的豬瘟亞單位疫苗被設(shè)計(jì)用來(lái)區(qū)分免疫和自然感染產(chǎn)生的抗體，同時(shí)確保亞單位疫苗刺激免疫應(yīng)答。

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