食品中真菌毒素檢測(cè)方法研究

有害真菌在糧油食品中生長(zhǎng)所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物中含有真菌毒素。糧油食品在收獲時(shí)未被充分干燥或貯運(yùn)過程中溫度、濕度過高，沾染的有害真菌就會(huì)迅速生長(zhǎng)，同時(shí)產(chǎn)生毒素。糧油食品中極低含量的真菌毒素會(huì)對(duì)人類和動(dòng)物帶來巨大的危害，表現(xiàn)出致癌性、遺傳毒性、致畸性，還會(huì)引起腎中毒、肝中毒、生殖異常以及抑制免疫反應(yīng)等。因此，迫切需要開發(fā)快速靈敏檢測(cè)食品中真菌毒素分析方法。

李蓉等（2017）建立了超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜(UPLC-HRMS)測(cè)定焙烤食品及其原料中11種真菌毒素的檢測(cè)分析方法。樣品經(jīng)20 mL含1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸的乙腈-水溶液提取，經(jīng)2.0 g無水硫酸、0.5 g氯化鈉和300 mg C18鹽析、凈化后進(jìn)行檢測(cè)。采用CORTECS C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.6 μm)，以含0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸的2 mmol/L乙酸銨溶液和含0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸的2 mmol/L乙酸銨甲醇溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。結(jié)果顯示，11種真菌毒素在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。史娜（2014）建立了QuEChERS-高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)食品中14種真菌毒素的方法。均質(zhì)樣品用乙酸-乙腈溶液提取,經(jīng)分散固相萃取凈化后，采用ACQUITU UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)分離。采用電噴霧電離、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式，可同時(shí)對(duì)食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、青霉酸、黃曲霉毒素M1、黃曲霉毒素G2、桔青霉毒素、黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、雜色曲霉毒素、HT-2毒素、T-2毒素、鬼臼毒素14種真菌毒素進(jìn)行定性和定量分析，最低檢出限為0.5～1 μg/kg。.該方法簡(jiǎn)便快速、選擇性佳、靈敏度高。朱閏月（2015）采用基質(zhì)固相分散技術(shù)，結(jié)合高效液相色譜-電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-ESI-MS/MS)分析，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式下建立了雞蛋中嘔吐毒素、黃曲霉素、玉米赤霉烯酮等15種真菌毒素生物標(biāo)志物的同時(shí)定量分析的方法。樣品與吸附劑C18顆粒直接混合裝柱，并用20 mL 1 mmol/L甲酸銨的乙腈-甲醇溶液洗脫、吹干，萃取液經(jīng)復(fù)溶、過濾后即可進(jìn)行檢測(cè)，整個(gè)分析過程無需復(fù)雜的凈化、離心等步驟。曹德康等（2017）應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)開發(fā)一種快速檢測(cè)谷物中黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和嘔吐毒素(DON)的三聯(lián)檢測(cè)卡。方法：優(yōu)化膠體金溶液pH值、金標(biāo)抗體量及抗原包被量制備3種膠體金試紙條，將試紙條組裝成檢測(cè)卡,研究該卡的檢測(cè)限、準(zhǔn)確度、特異性和穩(wěn)定性。結(jié)果AFB1、ZEN和DON 3種試紙條的膠體金溶液最適pH值分別為7.5、7.5和 7.0，金標(biāo)抗體量分別為 4.2、7.2和 9.6 μg/mL，抗原包被量分別為 1.0、1.4和 0.8 mg/mL。檢測(cè)卡的檢測(cè)結(jié)果與儀器檢測(cè)結(jié)果基本一致，重復(fù)性較好，與結(jié)構(gòu)類似物及其他霉菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)，在室溫條件下可以保存12個(gè)月。CN201010570082.5公開了一種用于快速檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品、食品中真菌毒素的蛋白芯片及其制備方法，該蛋白芯片包括芯片體、真菌毒素人工抗原、抗真菌毒素單克隆抗體、熒光標(biāo)記二抗，真菌毒素人工抗原按照微陣列點(diǎn)在固相載體上。其采用微陣列技術(shù)，將預(yù)先制備的幾種待檢測(cè)目的真菌毒素抗原以矩陣形式固定于固相載體上，采用競(jìng)爭(zhēng)法原理檢測(cè)樣品中真菌毒素含量，通過熒光掃面顯微鏡識(shí)別、閱讀和判定結(jié)果，具有檢測(cè)分析過程連續(xù)化、集成化、微型化、高通量和快速檢測(cè)等功能。CN201410553237.2提供一種檢測(cè)雞蛋中多種真菌毒素的方法，包括以下步驟：步驟一，取攪拌均勻的生鮮雞蛋樣品，依次加入水及有機(jī)提取劑，渦旋，然后機(jī)械振蕩一定時(shí)間；步驟二，振蕩提取后加入一定量的鹽，渦旋、離心后取上清液，將該上清液進(jìn)行干燥；步驟三，將干燥后的樣品用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜所用的流動(dòng)相復(fù)溶，然后過濾，在液質(zhì)聯(lián)用儀上對(duì)真菌毒素進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。CN201210350192.X涉及一種免疫膠體金速測(cè)卡，應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理同時(shí)檢測(cè)食品及飼料中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和黃曲霉毒素B1(AFB1)。檢測(cè)時(shí)，首先向加樣孔中加入待檢樣本，如果樣本中含有待檢測(cè)真菌毒素，則樣本中的真菌毒素在側(cè)向移動(dòng)的過程中與位于金標(biāo)墊上的膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，從而抑制了金標(biāo)抗體和NC膜檢測(cè)線上相應(yīng)的抗原-BSA偶聯(lián)物的結(jié)合，則該檢測(cè)線(T線)不顯色，多余的金標(biāo)單克隆抗體則與多余的酶標(biāo)記抗體結(jié)合，控制線(C線)顯色；反之，檢測(cè)線(T線)為酒紅色，控制線(C線)顯色。

總之，隨著納米技術(shù)、傳感技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)等的發(fā)展、相互滲透和結(jié)合，開發(fā)食品中真菌毒素的快速靈敏檢測(cè)新方法，對(duì)保障食品安全及農(nóng)產(chǎn)品加工等方面具有重要意義。

（江南大學(xué)圖書館 張群）