鄺明，何家，張謹(jǐn)賢

（四川省瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川瀘州 646000）

氣相色譜法同時(shí)測(cè)定蒼芩鼻炎合劑中桉油精和薄荷腦含量

鄺明，何家，張謹(jǐn)賢

（四川省瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川瀘州 646000）

目的建立同時(shí)測(cè)定蒼芩鼻炎合劑中桉油精及薄荷腦含量的氣相色譜法。方法按揮發(fā)油測(cè)定法提取桉油精、薄荷腦。采用安捷倫DB－WAX毛細(xì)管柱（30 m×0.320 mm，0.25 m）分離，氮?dú)鉃檩d氣，F(xiàn)ID檢測(cè)器，柱溫為程序升溫，初始溫度為75℃，保持8 min，以4℃／min的速率升至150℃，再以20℃／min速率升至200℃，保持5 min，流速為1.5 mL／min，進(jìn)樣口溫度為200℃，分流比為20∶1，檢測(cè)器溫度為250℃。結(jié)果桉油精、薄荷腦質(zhì)量濃度分別在5.364～536.4 g／mL(r＝0.999 9，n＝6)和5.102～510.2 g／mL（r＝0.999 9，n＝6）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；桉油精平均回收率為94.75%，RSD為1.80%（n＝6），薄荷腦平均回收率為95.29%，RSD為1.01%（n＝6）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，滿足同時(shí)測(cè)定桉油精、薄荷腦含量的要求。

蒼芩鼻炎合劑；桉油精；薄荷腦；氣相色譜法

蒼芩鼻炎合劑由蒼耳子、辛夷、川芎、麻黃、黃芩、白芷、梔子、黃芪、防風(fēng)、甘草、薄荷油等11味中藥組方，具有清肺利濕、通竅止痛的功效，臨床主要用于急慢性鼻炎、鼻竇炎、過(guò)敏性鼻炎、鼻源性頭痛。方中辛夷與薄荷油所含的揮發(fā)油成分桉油精及薄荷腦均有抗菌抗炎作用[1－4]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有對(duì)黃芩及梔子的鑒別檢查，而未收載其他有效成分的含量測(cè)定方法。文獻(xiàn)[5－16]中采用氣相色譜法測(cè)定揮發(fā)油成分桉油精、薄荷腦含量，但尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道同時(shí)測(cè)定桉油精、薄荷腦成分含量的方法。本研究中對(duì)已有揮發(fā)油提取法進(jìn)行選擇，同時(shí)進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件，使其滿足能同時(shí)測(cè)定桉油精、薄荷腦的含量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1.2 試藥

桉油精對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110788－201506）；薄荷腦對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110728－200506）；蒼芩鼻炎合劑（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院自制，批號(hào)為20110617，20110711，20110822）；正己烷為分析純（西隴化工股份有限公司，批號(hào)為130105）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：AgilentDB－WAX毛細(xì)管柱（30m×0.320mm，0.25 μm）；載氣：氮?dú)?；流速?.5 mL／min；柱溫：程序升溫，初始溫度75℃，保持8 min，以4℃／min的速率升至150℃，再以20℃／min的速率升至200℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；分流比：20∶1；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣量：1 μL。理論板數(shù)按桉油精素計(jì)算應(yīng)不低于40 000。色譜圖見圖1，結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在桉油精素峰相應(yīng)位置無(wú)干擾。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

稱取桉油精對(duì)照品53.64 mg、薄荷腦對(duì)照品51.02 mg，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加入正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取10 mL對(duì)照品貯備液，置20 mL容量瓶中，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液[2]

從公式(4)可以看出，玻璃片質(zhì)量差越大、被測(cè)組分含量越高，校正前后的誤差越大。所以對(duì)高含量組分的校正有顯著的效果。事實(shí)上，對(duì)于玻璃片質(zhì)量差較小，或含量較低的組分也應(yīng)該進(jìn)行玻璃片質(zhì)量校正，因?yàn)閷?duì)于具體的樣品與校準(zhǔn)曲線玻璃片的質(zhì)量差導(dǎo)致的被測(cè)組分測(cè)量結(jié)果的誤差是一個(gè)系統(tǒng)誤差。

精密量取供試品250 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加玻璃珠數(shù)粒，照揮發(fā)油測(cè)定法試驗(yàn)，加正己烷3 mL，加熱至沸騰并保持微沸5 h，放冷，分取正己烷液，測(cè)定器用正己烷洗滌3次，每次5 mL，合并正己烷液，通過(guò)鋪有無(wú)水硫酸鈉的漏斗，轉(zhuǎn)移至20 mL容量瓶中，用正己烷洗滌漏斗，洗液并入同一容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液

按照處方制成蒼芩鼻炎合劑方中缺辛夷、薄荷油的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取桉油精對(duì)照品貯備液(1 072.8 μg／mL)、薄荷腦對(duì)照品貯備液（1 020.4 μg／mL）0.1，1，2，3，5，10 mL，置20 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，得系列質(zhì)量濃度溶液。精密吸取1 μL上述各質(zhì)量濃度溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果桉油精、薄荷腦峰面積的RSD分別為1.10%和0.68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，置室溫下，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果桉油精、薄荷腦峰面積的RSD分別為1.30%和0.74%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取同一批樣品，依法制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果桉油精平均含量為0.891 μg／mL，RSD為1.30%（n＝6），薄荷腦平均含量為38.6 μg／mL，RSD為0.57%（n＝6），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品（批號(hào)為20110711）6份，分別精密加入桉油精、薄荷腦不同質(zhì)量濃度混合溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按擬訂色譜條件，測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為20110617，20110711，20110822的3批樣品中桉油精含量分別為0.891，0.902，0.914 μg／mL，薄荷腦含量分別為38.6，39.2，40.1 μg／mL。

3 討論

3.1 提取方法選擇

蒼芩鼻炎合劑采用11味中藥材浸泡煎煮，同時(shí)收集揮發(fā)油，煎液濃縮濾過(guò)后，濾液加入上述揮發(fā)油及薄荷腦的工藝，制劑中揮發(fā)油的成分經(jīng)過(guò)提取后已較單一。根據(jù)現(xiàn)有揮發(fā)油的提取方法[17]，選用蒸餾法提取蒼芩鼻炎合劑中揮發(fā)油成分，能有效提取目標(biāo)物，可去除大部分雜質(zhì)干擾。通過(guò)試驗(yàn)表明，提取時(shí)間與提取物濃度成線性關(guān)系。提取1，2，3 h的含量均有升高趨勢(shì)，提取5 h后揮發(fā)油成分含量結(jié)果穩(wěn)定。故本方法確定提取時(shí)間為5 h。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果(n＝6)

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

3.2 色譜條件優(yōu)化

據(jù)資料顯示，桉油精（1，3，3－三甲基－2－氧雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷）為單萜類化合物，其沸點(diǎn)為176～178℃，與薄荷腦（L－1－甲基－4－異丙基環(huán)己醇－3）沸點(diǎn)216℃都具有極性基團(tuán)。如進(jìn)樣口溫度過(guò)低，樣品會(huì)氣化不充分，測(cè)定結(jié)果RSD偏高，而進(jìn)樣口溫度過(guò)高，樣品會(huì)分解。本次試驗(yàn)進(jìn)樣口選用200℃氣化溫度，襯管帶有脫活玻璃棉起到增加樣品表面積、加速樣品氣化的同時(shí)過(guò)濾不揮發(fā)物質(zhì)的作用。根據(jù)此次試驗(yàn)樣品的質(zhì)量濃度與柱容量綜合考慮，過(guò)高分流比會(huì)使峰響應(yīng)值降低，而過(guò)低分流比使分流氣路的比例閥無(wú)法精確控制，會(huì)影響分析的精度，色譜柱也有超載可能，最終分流比設(shè)定為20∶1。試驗(yàn)中還分別選擇高、中、低3種不同極性色譜柱DB－WAX，DB－1701，HP－1對(duì)樣品進(jìn)行分離，結(jié)果后二者對(duì)目標(biāo)物保留效果不明顯，峰形與分離度與使用極性柱DB－WAX比較有較大差距。而使用DB－WAX毛細(xì)管柱對(duì)目標(biāo)物分離，桉油精與薄荷腦理論板數(shù)分別達(dá)到46 000與490 000，分離度為100，同時(shí)與未知成分分離完全，能滿足試驗(yàn)的需要。柱溫起始溫度低于沸點(diǎn)溫度，使目標(biāo)成分富集于色譜柱頭，桉油精與薄荷腦沸點(diǎn)相差明顯，選擇程序升溫，提高了不同沸點(diǎn)樣品的分離度，減少樣品分析時(shí)間。桉油精與薄荷腦含有較多的低氧化碳數(shù)目，選擇FID檢測(cè)器目標(biāo)分析物也會(huì)響應(yīng)充分。為減少對(duì)檢測(cè)器的污染，溫度應(yīng)高于進(jìn)樣口溫度，此次試驗(yàn)采用FID檢測(cè)器，溫度設(shè)置為250℃。

本試驗(yàn)中建立了氣相色譜同時(shí)測(cè)定蒼芩鼻炎合劑中桉油精、薄荷腦含量的方法，并對(duì)方法進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，提高了分析效率，為該制劑的質(zhì)量控制研究提供了參考資料。

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Simultaneous Content Determination of Eucalyptol and M enthol in Cangqin Biyan M ixture by GC

Kuang Ming,He Qijia,Zhang Jinxian
(Luzhou Institute for Drug and Food Contorl,Luzhou,Sichuan,China646000)

Objective Toestablish a method forsimultaneous determination of eucalyptol and menthol inCangqinBiyanMixture.M ethodsEucalyptol and menthol was extracted by steam distillation.The capillary column was Agilent Db－Wax(30 m×0.320 mm, 0.25 μm).The carrier gas was nitrogen and FID as detector.The initial column temperature was kept at 75℃for 8 min with an increase of 4℃／min to 150℃,then 20℃／min to 200℃(sustained for 5 min).The flow rate was 1.5 mL／min,the injector temperature was 200℃,20∶1 of split ratio and the detector temperature was 250℃.ResultsThe mass concentration of eucalyptol and menthol were linear in the range of 5.364－536.4 μg／mL(r＝0.999 9,n＝6)and 5.102－510.2 μg／mL(r＝0.999 9,n＝6).The average recovery rate of eucalyptol was 94.75%,RSD was 1.80%(n＝6).The average recovery rate of menthol was 95.29%,RSD was 1.01%(n＝6).ConclusionThe method is simple,accurate and well reproducible,which is suitable for the simultaneous content determination of eucalyptol and menthol.

Cangqin Biyan Mixture;eucalyptol;menthol;GC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)01－0025－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.008

2016－09－23；

2016－10－07)

鄺明（1982－），大學(xué)本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作，（電話）0830－2599102（電子信箱）18126018＠qq.com。