胡云峰

（浙江磐安巍峰植物原料廠，浙江金華322300）

萹蓄總黃酮提取工藝研究進(jìn)展

胡云峰

（浙江磐安巍峰植物原料廠，浙江金華322300）

萹蓄，早期記載可用于治療霍亂、五淋白濁、黃疸、熱淋、利小便、利尿驅(qū)蟲(chóng)和止瀉消炎等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，萹蓄具有利尿、抑菌和殺螨蟲(chóng)、抗纖維化、降血糖、降壓、抗血小板聚集和抑菌等藥理功效。目前，聚酰胺吸附法、葡聚糖凝膠層析法、大孔樹(shù)脂吸附法、活性碳吸附法、氧化鋁吸附層析法和硅膠吸附層析法等分離純化法已用于萹蓄總黃酮的提取。本文對(duì)萹蓄總黃酮提取工藝進(jìn)行簡(jiǎn)要概述，為萹蓄總黃酮提取方法的選擇及優(yōu)化提供參考。

萹蓄；總黃酮；提取工藝

萹蓄為蓼科蓼屬植物，早期記載，萹蓄歸膀胱經(jīng)、大腸經(jīng)，膀胱經(jīng)以“運(yùn)行大盛之陽(yáng)氣”來(lái)推動(dòng)和激發(fā)身體五臟六腑的運(yùn)動(dòng)，因此萹蓄可作用于整個(gè)人體循環(huán)。隨后中醫(yī)古籍對(duì)萹蓄的藥理及藥用作用記載較為詳細(xì)和通透：萹蓄可利小便、利尿驅(qū)蟲(chóng)、止瀉、消炎，對(duì)于霍亂、五淋白濁、黃疸和熱淋等疾病的治療效果較優(yōu)。隨著現(xiàn)代藥物分析學(xué)及藥理學(xué)的發(fā)展，萹蓄中多種化學(xué)成分得以鑒定出，如黃酮類、生物堿類、維生素、苯丙素類、酚酸類、多糖類、醌類、氨基酸及多種礦物質(zhì)元素等，萹蓄中主要化學(xué)成分為黃酮類化合物。現(xiàn)代藥理學(xué)及臨床研究表明，萹蓄具有利尿、抑菌和殺螨蟲(chóng)、抗纖維化、降血糖、降壓、抗血小板聚集和抑菌等藥理功效。目前，聚酰胺吸附法、葡聚糖凝膠層析法、大孔樹(shù)脂吸附法、活性碳吸附法、氧化鋁吸附層析法和硅膠吸附層析法等分離純化法已用于萹蓄總黃酮的提取。隨著儀器分析的發(fā)展，液-液色譜法、高效液相色譜法及結(jié)晶和重結(jié)晶等分離方法可對(duì)總黃酮進(jìn)行精細(xì)分離。本文對(duì)萹蓄總黃酮提取工藝進(jìn)行簡(jiǎn)要概述，為萹蓄總黃酮提取方法的選擇及優(yōu)化提供參考。

1 萹蓄簡(jiǎn)介

萹蓄為蓼科蓼屬植物，俗稱大萹蓄、鳥(niǎo)蓼、扁竹、竹節(jié)草、豬牙草、蓄辯、萹蔓、地萹蓄、粉節(jié)草、道生草、萹蓄蓼、百節(jié)草、鐵綿草、大蓄片、野鐵掃把、路柳、斑鳩臺(tái)、扁豬牙和烏要等。萹蓄質(zhì)地堅(jiān)硬，容易被折斷，斷面呈白色；莖呈現(xiàn)出扁圓柱形，干有分枝，一般高15～40cm，直徑0.2～0.3cm；節(jié)部節(jié)間長(zhǎng)約3cm，稍有突出，外包有淺棕色膜質(zhì)的托葉鞘。萹蓄葉互相交叉生長(zhǎng)，葉片接近無(wú)柄或者部分具有短柄，表面呈棕紅色或者灰綠色，縱紋細(xì)密且稍突起，葉片展開(kāi)后則呈現(xiàn)披針形，葉片邊緣完整；成熟的萹蓄葉片多數(shù)脫落或者皺縮、破碎；萹蓄花較小，常數(shù)朵簇生于葉腋；萹蓄氣微，且味微苦。

2 萹蓄古籍中藥學(xué)記載

萹蓄最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：萹蓄歸屬膀胱經(jīng)、大腸經(jīng)，而膀胱經(jīng)通過(guò)“運(yùn)行大盛之陽(yáng)氣”來(lái)推動(dòng)和激發(fā)身體五臟六腑的運(yùn)動(dòng)，因此萹蓄可作用于整個(gè)人體循環(huán)?！侗静菥V目》和《滇南本草》對(duì)萹蓄的藥理及藥用作用記載較為詳細(xì)，記載稱萹蓄具有清熱解毒、利尿、驅(qū)蟲(chóng)殺蟲(chóng)、消炎和止瀉等作用，可用于治療霍亂、五淋白濁、黃疸和熱淋等疾病。現(xiàn)代民間用藥顯示，萹蓄可用于治療結(jié)石、泌尿系統(tǒng)和腎炎等疾病。其中，多糖類物質(zhì)是萹蓄藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，其入血快，在人體體液和組織中可廣泛分布。此外，其可在腎臟組織、心、膀胱中分布，但在腎臟組織中分布最為廣泛。

3 萹蓄化學(xué)成分及藥理作用

萹蓄中含有的化學(xué)成分較為豐富，包括黃酮類、生物堿類、維生素、苯丙素類、酚酸類、多糖類、醌類、氨基酸及多種礦物質(zhì)元素等。迄今為止，研究者已從萹蓄中分離純化并鑒定出了70多種單體化合物[1-4]。其中，黃酮類化合物是萹蓄的主要化學(xué)成分，包括山奈酚、槲皮素、楊梅素、木犀草素、5，7-二羥基-6-甲氧基黃酮、白楊黃素、5，7-二甲氧基-4'-羥基黃酮、香橙素、楊梅樹(shù)皮苷、胡桃寧、萹蓄苷、槲皮苷、槲皮素-3-O-甘露糖苷、5-羥基-3'-甲氧基雙氫黃酮-7-O-蕓香糖甙、桑色素-7-O-β-D-葡萄糖甙和鼠李素-3-半乳糖苷等[5-8]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，萹蓄總黃酮具有利尿、抑菌和殺螨蟲(chóng)、抗纖維化、降血糖、降壓、抗血小板聚集和抑菌等藥理功效[9-12]。

4 萹蓄總黃酮提取及純化

4.1 乙醇提取法

4.1.1 直接乙醇提取法

張麗敏等[13]將干燥的萹蓄粉碎后過(guò)240μm的篩子，用烘箱于80℃烘至質(zhì)量不變，備用。準(zhǔn)確稱取1.0g萹蓄用濾紙包好，放入索氏提取器中，用石油醚脫脂40min后，揮干至無(wú)醚味后進(jìn)行萃取。隨后采用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，提取時(shí)間為1.5h，提取溫度85℃，m（萹蓄）∶V（乙醇）=1（g）∶40（L）時(shí)可作為最佳提取工藝。此種方法下萹蓄中總黃酮的萃取率為15.40%，總黃酮含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.308%，回收率在99.8%～102.4%，RSD=0.957%（n=5）。

4.1.2 乙醇提取、聚酰胺層析柱純化

代容春等[14]采用80℃下35%乙醇對(duì)扁蓄不同部位進(jìn)行浸提。稱取樣品干燥粉末10g后，加入100mL 35%乙醇溶液，80℃水浴下回流1h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)浸提2次，合并濾液，減壓濃縮，冰箱過(guò)夜。隨后將濃縮液過(guò)濾并定容至100mL。采用聚酰胺為層析介質(zhì)，乙醇梯度洗脫。35%乙醇（20mL）→55%乙醇（20mL）→75%乙醇（20mL）→95%乙醇（20mL）→無(wú)水乙醇（20mL）。收集各級(jí)洗脫液，合并濃縮。檢測(cè)結(jié)果表明，扁蓄不同部位總黃酮含量不一，植株粉末總黃酮含量為4.349%，根粉末總黃酮含量為7.115%，莖粉末總黃酮含量為5.454%，葉粉末總黃酮含量為3.544%。

4.1.3 乙醇提取、硅膠柱層析純化

于兆海等[15]對(duì)河南蓄全草用95%乙醇滲漉，減壓濃縮，反復(fù)上硅膠柱層析，分得槲皮素（Ⅰ），槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅱ），咖啡酸（Ⅲ）、沒(méi)食子酸（Ⅳ）、綠原酸（Ⅴ）、色氨酸（Ⅵ），ta-chioside（Ⅶ），isotachioside（Ⅷ），其中化合物Ⅵ與Ⅶ為首次從蓄中分離。

4.2 超聲提取法

4.2.1 超聲直接提取

王群立等[16]取扁蓄全草采用乙醇浸泡超聲直接提取法，提取總黃酮，其取樣品50g，在80℃下烘干，后粉碎。稱取6g粉末，加入80mL 95%乙醇溶液，浸泡12h，超聲波提取2.5h后，抽濾，得到濾液。以此重復(fù)提取2次，合并濾液。減壓蒸餾濾液至5～7mL，采用60%乙醇定容于容量瓶中，至100mL，得到供試品溶液，并測(cè)得樣品中總黃酮的平均含量為1.88%。袁春玲等[17]采用超聲功率800W，超聲時(shí)間105min（35×3），提取溫度40℃，溶劑體積分?jǐn)?shù)65%?？傻每傸S酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.908%。

4.2.2 超聲提取、大孔吸附樹(shù)脂柱純化

周鑫等[18]在超聲功率800W，超聲時(shí)間105min（35×3），提取溫度40℃，溶劑體積分?jǐn)?shù)為65%乙醇的為最佳提取條件，提取扁蓄中的總黃酮。在用D101大孔樹(shù)脂，40%乙醇以1mL/min的洗脫速度，最終達(dá)到純化扁蓄中總黃酮的目的。

4.3 水提法

代容春等[19]稱取樣品干燥粉末10g，加入100mL（料液比為W∶V=1∶10）蒸餾水，水?。囟确謩e為60℃和80℃）回流1h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)浸提2次。合并濾液，減壓濃縮至適量，放冷后過(guò)濾并定容至100mL，得總黃酮提取液。另一組在自然溫度（20℃）下浸提12h，隨后采用采用聚酰胺為層析介質(zhì)，乙醇梯度洗脫。結(jié)果顯示，與乙醇提取相比，用水浸提法提取扁蓄總黃酮，提取率較低，且提取液在存放過(guò)程中易腐敗變質(zhì)，后續(xù)的過(guò)濾、濃縮和純化等操作困難費(fèi)時(shí)。

4.4 微波提取法

黃文波等[20]為探討萹蓄總黃酮的最佳提取方法，分別采用乙醇回流、超聲波法和微波法對(duì)萹蓄總黃酮進(jìn)行提取。結(jié)果顯示，在不同溫度、固液比、提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)總黃酮的提取率均有影響，其中在100℃，功率700W，固液比1∶20，提取2次，每次10min，提取率為1.98%。

5 結(jié)語(yǔ)

萹蓄是我國(guó)的一種傳統(tǒng)中藥，具有多年的藥用歷史。其生長(zhǎng)范圍廣，能適應(yīng)多種地區(qū)氣候環(huán)境，因此其可獲取資源較為豐富?，F(xiàn)代藥物分析及藥理學(xué)研究表明，萹蓄含有多種化學(xué)成分，并且藥理作用較為廣泛。盡管如此，萹蓄的化學(xué)成分及藥理作用仍需進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。

[1]陳曉虎,陳道峰.萹蓄的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,2004,29(9):918-919.

[2]NA Yunuskhodzhaeva,KA Eshbakova,VN Abdullabekova.Flavonoid composition of the herb Polygonum aviculare[J].Chemistry of Natural Compounds,2010,46(5):803.

[3]趙愛(ài)華,趙勤實(shí),林中文,等.萹蓄的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2002,14(5):29-32.

[4]LP Sun,SZ Zheng,JX Wang,et al.The flavonoids from Polygonum aviculare[J].Indian Journal of Chemistry,Section B: Organic Chemistry Including Medicinal Chemistry,2002,41B(6):319-320.

[5]AG Panosyan,ML Barikyan,RT Grigoryan,et al.The effect of Polygonum aviculare L.flavonoids on platelet aggregation[J].Khimiko-Farmatsevticheskii Zhurnal,1986,20(2):190-194.

[6]HMA Al-Hazimi,SN Haque.A new naphthoquinone from Polygonum aviculare[J].Natural Product Letters,2002,16(2):115-118.

[7]鄭旭東,蘇躍增,沈序維,等.慶陽(yáng)烏蓼中黃酮類化合物的研究[J].西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),1999,35(2):47-49.

[8]李曼曼,劉增輝,王海燕,等.萹蓄抑菌活性及化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2014,26(4):526-530.

[9]JX Nan,EJ Park,HJ Kim,et al.Antifibrotic effects of the methanol extract of Polygonum aviculare in fibrotic rats induced by bile duct ligation and scission[J].Bio-logical &Pharmaceutical Bulletin,2000,23(2):240-243.

[10]CY Hsu.Antioxidant activity of extract from Polygonum aviculare L.[J].Biological Research,2006,39(2):281-288.

[11]HJ Choi,NJ Kim,JW Kim,et al.Anti-lipid peroxidation and liver protective effects of Polygonum aviculare L.[J].Saengyak Hakhoechi,1997,28(3):117-123.

[12]毛雪石.黃酮類化合物的抗腫瘤活性[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,1995,38(2):92-96.

[13]張麗敏,李麗華,張金生,等.正交試驗(yàn)優(yōu)化中藥萹蓄中總黃酮的提取工藝[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,28(7):553-556.

[14]代容春,何文錦,陳培泉,等.扁蓄總黃酮含量的測(cè)定[J].中國(guó)野生植物資源,2003,22(6):66-68.

[15]于兆海,孫潔.蓄的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2002,33(6):498-498.

[16]王群立,張力,包玉敏,等.超聲波提取扁蓄總黃酮及測(cè)定[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2007,22(1):30-32.

[17]袁春玲,郭偉英.超聲循環(huán)法提取扁蓄總黃酮[J].中草藥,2006,37(9):1336-1338.

[18]周鑫,郭偉英.扁蓄總黃酮片的處方優(yōu)化[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,29(6):492-495.

[19]代容春,何文錦,劉萍,等.扁蓄總黃酮提取方法的比較[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào),2003,12(3):53-54.

[20]黃文波,蔡元菊,饒光福.萹蓄總黃酮提取方法的比較研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,8(6):1078-1080.

Research on Extraction Technology of Total Flavones of Polygonum aviculare L.

Hu Yun-feng
(Zhejiang Panan Weifeng Plant Material Factory,Zhejiang Jinhua 322300)

Early records showed that Polygonum aviculare L.could be used for the treatment of cholera,five Neisseria gonorrhea,jaundice,infection,diuresis,anti-inflammatory and diuretic anthelmintic diarrhea.Modern pharmacological studies showed that Polygonum aviculare L.had diuretic,antibacterial and acaricidal,anti fibrosis,blood glucose,blood pressure,platelet aggregation and antibacterial and other pharmacological effects.With the continuous development and in-depth study of natural active plants,the extraction,separation and purification of natural compounds with a certain effect has become increasingly mature.At present,polyamide adsorption method,gel chromatography,macroporous resin adsorption,activated carbon adsorption,alumina adsorption chromatography and silica gel adsorption chromatography separation and purification method has been used for the extraction of total flavonoids from Polygonum aviculare.In this paper,the extraction technology of total flavones of Polygonum aviculare L.research status were briefly summarized,to provide a reference for the extraction of total flavones of Polygonum aviculare L.selection and optimization method.

Polygonum aviculare;Total flavonoids;Extraction technology

TQ461

A

2096-0387（2017）03-0098-04

胡云峰（1963-），男，浙江磐安人，碩士，研究方向：生物工程。