朱傳坤潘正軍王 輝吳 楠常國亮丁懷宇周鳳建,

(1. 淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院, 江蘇省特色水產(chǎn)繁育工程實(shí)驗(yàn)室, 淮安 223300; 2. 淮陰師范學(xué)院江蘇省區(qū)域現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護(hù)協(xié)同創(chuàng)新中心, 淮安 223300; 3. 江蘇省淮安市水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站, 淮安 223001)

烏蘇里擬鲿微衛(wèi)星文庫的構(gòu)建及分析

朱傳坤1,2潘正軍1,2王 輝1,2吳 楠1,2常國亮1,2丁懷宇1,2周鳳建2,3

(1. 淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院, 江蘇省特色水產(chǎn)繁育工程實(shí)驗(yàn)室, 淮安 223300; 2. 淮陰師范學(xué)院江蘇省區(qū)域現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護(hù)協(xié)同創(chuàng)新中心, 淮安 223300; 3. 江蘇省淮安市水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站, 淮安 223001)

烏蘇里擬鲿(Pseudobagras ussuriensis)又名烏蘇里(Leiocassis ussuriensis), 隸屬于鯰形目, 鲿科, 擬鲿屬,主要分布于我國東北地區(qū), 但在我國其他各大水系也有分布[1]。烏蘇里擬鲿肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、風(fēng)味獨(dú)特、適口性好、市場(chǎng)價(jià)值高, 深受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶青睞。在20世紀(jì)80年代, 烏蘇里擬鲿的天然捕撈量曾僅次于同科的黃顙魚(Pelteobagrus fulvidsco), 然而由于捕撈強(qiáng)度的持續(xù)增長、環(huán)境污染及生境破壞等因素的影響,其野生資源量銳減, 目前在很多自然分布區(qū)已很難捕獲野生個(gè)體[2]。

目前已有較多針對(duì)烏蘇里擬鲿的研究報(bào)道, 其中大多數(shù)研究集中于其人工繁殖[3,4]、人工養(yǎng)殖[5]、營養(yǎng)及生理[6,7]等方面, 關(guān)于其遺傳學(xué)的相關(guān)研究則鮮有報(bào)道, 僅有少量利用同工酶、RAPD、線粒體DNA及SRAP等標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行群體遺傳多樣性分析的研究報(bào)道[8—11]。微衛(wèi)星標(biāo)記是由2—6堿基為重復(fù)單元的串聯(lián)重復(fù)序列, 根據(jù)串聯(lián)重復(fù)連續(xù)與否, 可分為完美型、非完美型及復(fù)合型微衛(wèi)星三類[12]。微衛(wèi)星標(biāo)記不僅在真核生物基因組中分布廣泛, 而且具有多態(tài)性高、可重復(fù)性強(qiáng)及共顯性遺傳等優(yōu)點(diǎn)[12], 在水產(chǎn)動(dòng)物遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用[13]。然而, 目前尚無利用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)烏蘇里擬鲿進(jìn)行種質(zhì)資源和遺傳結(jié)構(gòu)分析的相關(guān)報(bào)道, 原因可能主要是由于該物種微衛(wèi)星標(biāo)記的缺乏。因此, 本研究采用磁珠富集法構(gòu)建了烏蘇里擬鲿基因組微衛(wèi)星富集文庫,并對(duì)文庫的微衛(wèi)星富集效率及特征進(jìn)行了評(píng)估和分析,同時(shí), 從中開發(fā)了一批多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記。本研究結(jié)果將為今后烏蘇里擬鲿中基于微衛(wèi)星標(biāo)記的種質(zhì)資源保護(hù)、遺傳圖譜構(gòu)建及分子標(biāo)記輔助育種等研究工作的開展奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集及DNA抽提

本研究所用32尾烏蘇里擬鲿樣本均于2015年5月采自江蘇省淮安市水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站, 每尾個(gè)體剪取尾鰭組織并保存于無水乙醇中, 基因組DNA抽提采用傳統(tǒng)的苯酚-氯仿法進(jìn)行[14]。

1.2 基因組酶切及片段篩選

取50 ng/μL的基因組DNA 10 μL, 加入5 U限制性內(nèi)切酶Mse I (NEB), 于37℃水浴中消化3h, 酶切產(chǎn)物用1.0%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳, 并利用DNA純化試劑盒(康為世紀(jì))回收純化250—800 bp的DNA片段。之后, 將等體積的上、下游接頭引物Mse I-A: 5′-GACGATGAG TCCTGAG-3′和Mse I-B: 5′-TACTCAGGACTCAT-3′混合, 并于95℃變性5min, 緩慢冷卻至室溫后, 即制備成終濃度50 μmol/L的連接接頭。利用T4 DNA連接酶(Promega)將所回收的DNA片段和新制備的連接接頭于16℃生化培養(yǎng)箱中過夜連接。連接產(chǎn)物稀釋10倍后利用引物Mse I-N: 5′-GATGAGTCCTGAGTAAN-3′進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增, PCR反應(yīng)體系總體積為25 μL, 包含: MseI-N引物(10 μmol/L) 0.8 μL, 10×Taq Buffer (不含Mg2+) 2.5 μL, MgCl2(25 mmol/L) 1.6 μL, dNTPs (10 mmol/L) 0.4 μL, 模板DNA 1 μL, Taq DNA聚合酶(Promega) 0.2 μL (5 U/μL),滅菌超純水18.5 μL。PCR反應(yīng)條件為: 94℃預(yù)變性3min, 94℃變性1min, 53℃退火1min, 72℃延伸1min, 經(jīng)N (N=14、17、20、23、27、30)個(gè)循環(huán), 確定最佳循環(huán)次數(shù)為17; 72℃延伸5min, 通過1.0%瓊脂糖凝膠電泳后, 再次進(jìn)行切膠和純化, 從而獲得大量250—800 bp的DNA片段。

1.3 生物素探針雜交

取1.2中PCR預(yù)擴(kuò)增純化產(chǎn)物29 μL與1 μL生物素標(biāo)記的(GT)13探針(5′-bio-GTGTGTGTGTGTGTGTGTGT GTGTGT, 100 μmol/L)及70 μL雜交緩沖液(6×SSC+0.1% SDS)配制成總體積100 μL的雜交反應(yīng)體系, 于95℃變性5min, 65℃退火1h, 再緩慢冷卻至室溫, 從而使預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物中含微衛(wèi)星的片段和(GT)13探針充分雜交。

1.4 磁珠富集

取150 μL鏈霉親和素包被的磁珠(Promega), 用 300 μL TEN100溶液(10 mmol/L Tris-HCl, 1 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, pH 7.5)在室溫下洗滌3次, 每次5min,清洗后用300 μL的TEN100溶液懸浮磁珠。將1.3中獲得的雜交產(chǎn)物和預(yù)處理的磁珠在室溫下混勻, 放置30min進(jìn)行磁珠雜交反應(yīng)。磁珠雜交完成后利用磁力架固定磁珠, 移去雜交混合液。用400 μL TEN1000緩沖液(10 mmol/L Tris-HCl, 1 mmol/L EDTA, 1 mol/L NaCl, pH 7.5)在室溫下對(duì)磁珠進(jìn)行非嚴(yán)謹(jǐn)洗脫, 共洗脫3次, 每次5min。之后, 用洗滌液400 μL (0.2×SSC+0.1% SDS)于室溫下對(duì)磁珠進(jìn)行3次嚴(yán)謹(jǐn)洗脫, 每次5min。最后, 加入50 μL TE緩沖液(pH=8.0)于沸水中處理磁珠5min, 并迅速固定磁珠吸取上清液, 之后重復(fù)進(jìn)行一次洗脫, 最終獲得兩次洗脫的單鏈目的DNA片段。

1.5 目的片段的擴(kuò)增和回收

分別以兩次洗脫獲得的單鏈目的DNA片段為模板, MseI-N為引物, 對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增以獲得雙鏈目的DNA片段, PCR擴(kuò)增體系和程序同1.2。將兩次洗脫片段的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物通過1.0%的瓊脂糖凝膠電泳后, 切取250—800 bp的片段并利用DNA純化試劑盒進(jìn)行純化。

1.6 目的片段的克隆及陽性克隆篩選

將1.5中獲得的純化PCR產(chǎn)物連接入pMD18-T載體中(TaKaRa), 并轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)大腸桿菌菌株中, 于含氨芐青霉素的固體LB培養(yǎng)基上進(jìn)行過夜培養(yǎng), 從而獲得烏蘇里擬鲿的微衛(wèi)星富集文庫。

挑取單克隆于150 μL含氨芐青霉素的液體LB培養(yǎng)基中, 并于37℃搖床中以200 r/min速度振蕩培養(yǎng)24h?？寺∨囵B(yǎng)結(jié)束后, 利用M13通用引物(-47與-48)對(duì)每個(gè)克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增和1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè), 挑選擴(kuò)增片段大小在250—800 bp的克隆送測(cè)序公司測(cè)序。

1.7 微衛(wèi)星引物設(shè)計(jì)及多態(tài)性篩選

克隆測(cè)序結(jié)果獲得后, 利用SSRhunter軟件中的默認(rèn)參數(shù)對(duì)每條序列進(jìn)行微衛(wèi)星搜尋, 并輔以人工查找和校正。對(duì)含有微衛(wèi)星序列的片段, 采用Primer Premier 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì), 并送上海生工合成。合成好的引物在32尾烏蘇里擬鲿樣本中進(jìn)行PCR擴(kuò)增效果檢測(cè)及多態(tài)性篩選, PCR反應(yīng)體系總體積為12.5 μL, 包含10×Taq Buffer (含Mg2+)1.3 μL, dNTP 0.4 μL(2.5 mmol/L), 上、下游混合引物0.4 μL(2.5 μmol/L), 模版DNA 1 μL (50 ng /μL), Taq DNA聚合酶(5 U/μL) 0.1 μL, 滅菌超純水9.3 μL。PCR產(chǎn)物利用10%聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分型, 以PBR322/MspI(天根生物)作為標(biāo)準(zhǔn)DNA, 凝膠通過溴化乙錠(EB)染色及凝膠成像系統(tǒng)拍照后進(jìn)行多態(tài)性判斷和分析。

2 結(jié)果

2.1 微衛(wèi)星富集文庫克隆陽性率檢測(cè)

利用菌落計(jì)數(shù)器估算, 所構(gòu)建微衛(wèi)星富集文庫中共獲得克隆約3000個(gè), 隨機(jī)挑選其中233個(gè)進(jìn)行了陽性檢測(cè)。通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 其中有224個(gè)為陽性單克隆, 7個(gè)為陽性雙克隆, 2個(gè)為假陽性克隆, 因此, 本文庫的陽性率達(dá)到99.1%。

2.2 文庫微衛(wèi)星富集效率

將隨機(jī)挑選的208個(gè)陽性單克隆進(jìn)行了測(cè)序, 其中16個(gè)由于抽提質(zhì)粒失敗而未獲得測(cè)序結(jié)果, 最終共獲得序列192條。通過微衛(wèi)星序列查找后, 發(fā)現(xiàn)在192條序列中, 含有微衛(wèi)星的序列共有162條, 占序列總數(shù)的84.4%,即該文庫的微衛(wèi)星富集陽性率為84.4%。

2.3 微衛(wèi)星序列分析

本研究獲得的162條含微衛(wèi)星序列中, 有91條(56.2%)為完美型微衛(wèi)星序列, 39條(24.1%)為非完美型, 32條(19.8%)為復(fù)合型序列。這些序列中共有微衛(wèi)星位點(diǎn)271個(gè), 平均每條序列含微衛(wèi)星1.68個(gè), 大部分序列(64.8%)含有一個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn), 也有少量序列微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)較多(6.2%), 其中最多的含有10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(圖1A)。重復(fù)單元以GT/TG和CA/AC類型為主(75.0%), 但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了其他兩堿基及三、四堿基重復(fù)類型(圖1B), 甚至還發(fā)現(xiàn)了重復(fù)單元為12—40堿基的6條小衛(wèi)星DNA序列。微衛(wèi)星的重復(fù)次數(shù)介于5—81, 其中重復(fù)次數(shù)大于10次的有171個(gè)(62.9%), 重復(fù)次數(shù)大于30的有33個(gè)(12.2%)(圖 1C),

2.4 微衛(wèi)星引物設(shè)計(jì)與多態(tài)性篩選

在162條含微衛(wèi)星的序列中, 有15條側(cè)翼序列太短,無法設(shè)計(jì)引物。在147條含有足夠側(cè)翼長度的序列中, 隨機(jī)挑選了20條進(jìn)行引物設(shè)計(jì), 并將這20對(duì)引物在32尾烏蘇里擬鲿個(gè)體中進(jìn)行了PCR及電泳檢測(cè)。結(jié)果表明, 20對(duì)引物中有17對(duì)能擴(kuò)增出穩(wěn)定條帶, 其中有8對(duì)呈現(xiàn)出良好的多態(tài)性(表 1、圖 2), 多態(tài)性比例為40.0%。

3 討論

3.1 微衛(wèi)星文庫富集效率

微衛(wèi)星標(biāo)記具有分布廣泛、穩(wěn)定性好、多態(tài)性高、可重復(fù)性強(qiáng)、共顯性遺傳等諸多優(yōu)點(diǎn), 在群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳背景分析、種質(zhì)資源評(píng)估、基因鑒定、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、數(shù)量性狀位點(diǎn)定位及分子標(biāo)記輔助育種等方面具有廣泛應(yīng)用。因此, 微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)是其應(yīng)用研究的基礎(chǔ)環(huán)節(jié), 目前主要可通過4種途徑獲得微衛(wèi)星標(biāo)記。(1)磁珠富集法。該方法是目前微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)的主流方法, 通過構(gòu)建微衛(wèi)星磁珠富集文庫, 進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記篩選。其微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)效率高, 目的性強(qiáng), 因此被廣大研究者廣泛采用, 已在鳙(Aristichthys nobilis)[15]、胭脂魚(Myxocyprinus asiaticus)[16]、蘭州鲇(Silurus lanzhouensis)[17]等多種魚類中成功應(yīng)用。(2)數(shù)據(jù)庫篩選法。在公共數(shù)據(jù)庫中下載目的物種已發(fā)表的EST或DNA序列,從中進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記的篩選。雖然該方法具有成本低、耗時(shí)短及工作量較小的優(yōu)點(diǎn), 但對(duì)于公共數(shù)據(jù)庫中序列資源貧乏的物種來說, 該方法并不適用。(3)跨種擴(kuò)增法。通過近緣物種已發(fā)表的微衛(wèi)星標(biāo)記的跨種擴(kuò)增來篩選目的物種的微衛(wèi)星標(biāo)記。該方法具有和公共數(shù)據(jù)庫篩選法相同的優(yōu)點(diǎn), 但該方法的應(yīng)用前提是近緣物種中已有微衛(wèi)星標(biāo)記的報(bào)道, 若親緣關(guān)系太遠(yuǎn), 則該方法的效率較低。(4)高通量測(cè)序法。該方法主要是通過基因組和轉(zhuǎn)錄組的高通量測(cè)序, 從測(cè)序序列中篩選微衛(wèi)星標(biāo)記, 該方法成本相對(duì)較高。由于目前公共數(shù)據(jù)庫中烏蘇里擬鲿的核苷酸序列極少, 同時(shí), 擬鲿屬的近緣物種中也鮮有微衛(wèi)星的相關(guān)報(bào)道, 因此, 采用主流的磁珠富集法構(gòu)建微衛(wèi)星文庫, 是在烏蘇里擬鲿中開發(fā)微衛(wèi)星標(biāo)記經(jīng)濟(jì)、有效的手段。

圖 1 烏蘇里擬鲿微衛(wèi)星文庫中微衛(wèi)星位點(diǎn)特征分析Fig. 1 Characterization of microsatellites in the enriched library of Pseudobagrus ussuriensisA. 每條序列中含微衛(wèi)星數(shù)目的比例分布; B. 各重復(fù)類型微衛(wèi)星的比例分布; C. 微衛(wèi)星重復(fù)次數(shù)頻率分布A. Proportion of microsatellite numbers in each sequence; B. Proportional distribution of microsatellites with different repeat motifs; C. Frequencies of microsatellites with different core motif

已有研究表明, 在真核生物基因組中, (CA)n或(GT)n重復(fù)類型的微衛(wèi)星含量最為豐富[18], 因此, 為獲得更高的微衛(wèi)星富集效率, 本研究選用(GT)n重復(fù)探針類型, 同時(shí)為了防止探針長度過長影響雜交效率, 采用長度適中的(GT)13作為雜交探針進(jìn)行富集文庫構(gòu)建。本研究構(gòu)建的微衛(wèi)星富集文庫的微衛(wèi)星富集效率達(dá)到了84.4%,與合浦珠母貝(Pinctada fucata)(83.2%)[19]類似, 低于銀鯽(Carassius auratus gibelio)(95.3%)[20], 但高于大多數(shù)已報(bào)道水產(chǎn)動(dòng)物中的富集效率, 如胭脂魚(40.0%)[16]、蘭州鲇(63.0%)[17]、鱖(Siniperca chuatsi)(66.7%)[21]、刀鱭(Coilia ectenes)(69.4%)[22]等。影響陽性率的因素有很多, 如實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作者的熟練程度及洗脫溫度和時(shí)間等差異都可能影響最終的陽性率; 另外, 探針的類型也是影響陽性率的重要因素, 若所用探針的微衛(wèi)星重復(fù)類型在目的物種基因組中的豐度太低或重復(fù)次數(shù)不合理, 都會(huì)影響雜交效率, 進(jìn)而影響微衛(wèi)星富集效率。因此, 為提高富集效率, 有學(xué)者提倡采用多種探針進(jìn)行微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建[23], 該方法已在多種水產(chǎn)中得到應(yīng)用[17,24,25]。本研究雖然以GT重復(fù)類型作為探針, 但獲得的微衛(wèi)星中除GT/CA重復(fù)類型外, 也發(fā)現(xiàn)了其他重復(fù)類型, 如CT/AG及三、四堿基重復(fù)類型, 類似結(jié)果在其他水產(chǎn)動(dòng)物中均有報(bào)道[16, 22, 26]。

表 1 20個(gè)烏蘇里擬鲿微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物信息Tab. 1 Information for 20 microsatellite loci of Pseudobagras ussuriensis

圖 2 微衛(wèi)星文庫中3個(gè)多態(tài)性標(biāo)記在32尾烏蘇里擬鲿中的電泳檢測(cè)圖譜Fig. 2 Electrophoretic results of 3 polymorphic microsatellites in 32 individuals of Pseudobagrus ussuriensisA. PuGT04電泳圖; B. PuGT05電泳圖; C. PuGT32電泳圖A. Electrophoretogram of PuGT04; B. Electrophoretogram of

3.2 微衛(wèi)星組成特點(diǎn)

本研究獲得的162條含微衛(wèi)星序列中, 完美型、非完美型和復(fù)合型所占比例分別為56.2%、24.1%和19.8%,可見完美型微衛(wèi)星為主要類型, 該結(jié)果也與蘭州鲇[17]、黑斑原鰷(Glyptosternum maculatum)[26]、中國鱟(Tachypleus tridentatus)[27]及合浦珠母貝[19]等水產(chǎn)動(dòng)物具有相似的微衛(wèi)星組成特點(diǎn)。由于微衛(wèi)星本身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn), 其復(fù)制滑動(dòng)及點(diǎn)突變頻率均較高[28,29], 完美型微衛(wèi)星可能主要由核心重復(fù)區(qū)的復(fù)制滑動(dòng)產(chǎn)生, 而非完美型則可能是由核心重復(fù)區(qū)的點(diǎn)突變導(dǎo)致, 相對(duì)于點(diǎn)突變, 復(fù)制滑動(dòng)的概率可能更大些, 因此完美型微衛(wèi)星的比例在已報(bào)道物種中總是最高的。

一般來說, 重復(fù)次數(shù)低于5 的微衛(wèi)星很少會(huì)檢測(cè)出多態(tài)性[30], 因此, 微衛(wèi)星位點(diǎn)的核心重復(fù)次數(shù)至少為5次,重復(fù)次數(shù)越多, 該位點(diǎn)的多態(tài)性也就越高[12], 但在真核生物中微衛(wèi)星核心重復(fù)大多小于30次, 如本研究中重復(fù)次數(shù)小于30次的微衛(wèi)星所占比例為87.8%。因此, 微衛(wèi)星核心重復(fù)次數(shù)可反映相應(yīng)位點(diǎn)的多態(tài)性信息, 然而, 重復(fù)次數(shù)過多會(huì)導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果側(cè)翼序列過短, 造成引物設(shè)計(jì)困難, 本研究中15條無法設(shè)計(jì)引物的序列多數(shù)屬于此類情況。在隨機(jī)合成的20對(duì)引物中, 有17對(duì)可擴(kuò)增出穩(wěn)定清晰的目的條帶, 其中8對(duì)在32尾烏蘇里擬鲿中表現(xiàn)為多態(tài)性, 引物擴(kuò)增成功率高于刀鱭[22]、蘭州鲇[17]及太湖新銀魚(Neosalanx taihuensis)[24]等物種, 多態(tài)性比例與蘭州鲇[17]相當(dāng), 高于刀鱭[22]、寬口光唇魚(Acrossocheilus monticola)[25]等物種, 低于太湖新銀魚[24]等。影響擴(kuò)增成功率的主要原因可能在于引物設(shè)計(jì)的成功與否, 而引物多態(tài)性比例則和物種本身的多樣性及用于多態(tài)性檢測(cè)的樣本的遺傳背景相關(guān)。

4 結(jié)論

本研究首次構(gòu)建了烏蘇里擬鲿微衛(wèi)星富集文庫, 該文庫不僅克隆陽性率高, 而且微衛(wèi)星陽性率也處于較高水平, 因此, 利用該文庫可以達(dá)到高效開發(fā)微衛(wèi)星標(biāo)記的目的。本研究結(jié)果將有助于推動(dòng)烏蘇里擬鲿的遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、數(shù)量性狀位點(diǎn)定位及分子標(biāo)記輔助育種等研究工作的進(jìn)程。

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CONSTRUCTION AND ANALYSIS OF AN ENRICHED MICROSATELLITE LIBRARY IN PSEUDOBAGRAS USSURIENSIS

ZHU Chuan-Kun1,2, PAN Zheng-Jun1,2, WANG Hui1,2, WU Nan1,2, CHANG Guo-Liang1,2, DING Huai-Yu1,2and ZHOU Feng-Jian2,3
(1. Jiangsu Engineering Laboratory for Breeding of Special Aquatic Organisms, School of Life Science, Huaiyin Normal University, Huai’an 223300, China; 2. Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture & Environmental Protection, Huaiyin Normal University, Huai’an 223300, China; 3. Huai’an Fisheries Technical Guidance Station, Huai’an 223001, China)

烏蘇里擬鲿; 磁珠富集文庫; 微衛(wèi)星

Pseudobagras ussuriensis; Magnetic beads-enriched library; Microsatellite

Q781

A

1000-3207(2017)02-0473-06

10.7541/2017.59

2016-06-15;

2016-10-24

江蘇省區(qū)域現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護(hù)協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(HSXT307); 淮陰師范學(xué)院博士科研啟動(dòng)項(xiàng)目(31ZCK00); 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31602146)資助 [Supported by Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture & Environmental Protection (HSXT307), the Start-up Funds of Scientific Research for Dr. C. Zhu from Huaiyin Normal University (31ZCK00) and the National Natural Science Foundation of China (31602146)]

朱傳坤(1984—), 男, 山東臨沂人; 講師; 主要從事魚類基因組學(xué)與分子標(biāo)記輔助育種研究。E-mail: zhuchuankun@hytc.edu.cn