張 婷，左雪枝，徐 艷

(荊楚理工學(xué)院 生物工程學(xué)院，湖北 荊門 448000)

油茶內(nèi)生真菌多樣性與抑菌性研究

張 婷，左雪枝，徐 艷

(荊楚理工學(xué)院 生物工程學(xué)院，湖北 荊門 448000)

為弄清油茶內(nèi)生真菌的種類、分布特點(diǎn)及應(yīng)用潛能，采集湖北省5個(gè)地區(qū)不同季節(jié)的油茶樣品，分離其內(nèi)生真菌并進(jìn)行多樣性分析和抑菌性分析。結(jié)果表明，共分離得到內(nèi)生真菌1 612株，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定可歸于24屬，未產(chǎn)孢的菌株暫歸為無孢菌群(66株)。青霉屬(Pencillium)、鏈格孢屬(Alternaria)、刺盤孢屬(Colletotrichum)為優(yōu)勢(shì)類群，分別占總菌株數(shù)的21.09%、19.11%、14.70%。多樣性分析結(jié)果顯示，對(duì)于不同地區(qū)而言，黃岡地區(qū)油茶內(nèi)生真菌的Shannon-Wiener指數(shù)(H′)最高，為2.44 ；就不同組織部位來看，莖中內(nèi)生真菌的Shannon-Wiener指數(shù)(H′)最高，為2.52；就不同季節(jié)而言，秋季油茶內(nèi)生真菌的Shannon-Wiener指數(shù)(H′)最高，為2.58?？傮w而言，油茶中內(nèi)生真菌的菌群較為穩(wěn)定，地區(qū)間及組織部位間樣品內(nèi)生真菌組成有一定的相似性。抑菌性結(jié)果顯示，在挑選的24株內(nèi)生真菌中，有17株內(nèi)生真菌的發(fā)酵提取物具有抑菌活性，其中 3株表現(xiàn)出較好的抑菌效果，分別屬于青霉屬、鏈格孢屬、葉點(diǎn)霉屬(Phyllosticta)，這說明油茶內(nèi)生真菌的抑菌性較強(qiáng)，值得進(jìn)一步研究。

油茶； 內(nèi)生真菌； 分離率； 多樣性； 抑菌性

植物內(nèi)生真菌是一種潛在的、具有廣闊應(yīng)用前景的微生物資源，它們普遍存在于健康植物中，用特定的方法可以證明其存在。植物內(nèi)生真菌種類眾多、數(shù)量巨大，在不同植物，甚至是同一植物的不同部位，亦或是處于不同生長(zhǎng)季節(jié)的同一植物，其內(nèi)部的真菌種類和數(shù)量都有差異，形成了內(nèi)生真菌的多樣性。深入研究?jī)?nèi)生真菌的多樣性將有助于了解內(nèi)生真菌的分布特點(diǎn)，建立內(nèi)生真菌生物多樣性的信息庫，還有助于不斷發(fā)現(xiàn)新物種等[1-3]。

油茶(Camelliaoleifera)是我國(guó)南方特有的木本油料樹種，其主要產(chǎn)品茶油富含多種不飽和脂肪酸，享有“東方橄欖油”之美譽(yù)[4]。近年來，由于油茶產(chǎn)品市場(chǎng)的逐漸升溫，南方多地大力發(fā)展油茶產(chǎn)業(yè)，紛紛建起了油茶栽培種植基地。與油茶有關(guān)的科研工作也隨之開展起來，主要集中在油茶育種、油茶深加工和油茶病蟲害防治等方面，而對(duì)于油茶內(nèi)生真菌的研究相對(duì)較少。內(nèi)生真菌作為與宿主共生的資源而存在，有助于促進(jìn)宿主的生長(zhǎng)，提高宿主的抗逆性和抗病蟲害能力，也有助于提高宿主中某些次級(jí)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，因此有必要弄清楚油茶內(nèi)生真菌的種類、分布特點(diǎn)及其應(yīng)用潛能。鑒于此，對(duì)湖北省5個(gè)采集地的油茶樣品進(jìn)行菌株分離、鑒定、統(tǒng)計(jì)和抑菌性初探，比較了油茶內(nèi)生真菌在不同組織部位、不同季節(jié)和不同地理位置的分布差異，探討了油茶內(nèi)生真菌的分布特點(diǎn)，篩選了具有一定抑菌能力的菌株，并對(duì)抑菌能力較優(yōu)的菌株進(jìn)行了分子鑒定，為進(jìn)一步開發(fā)利用油茶內(nèi)生真菌資源奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 油茶樣品 分別于2013年的春季(4月)、夏季(7月)和秋季(10月)，在湖北省十堰、荊門、恩施、黃岡、武漢5個(gè)地區(qū)定點(diǎn)隨機(jī)采集若干健康的油茶樣品，裝入自封袋帶回實(shí)驗(yàn)室,于48 h內(nèi)分離內(nèi)生真菌。

1.1.2 培養(yǎng)基 內(nèi)生真菌的分離和保藏均采用PDA培養(yǎng)基，臨用前加入一定濃度的抗生素。

1.1.3 供試病原菌 供試病原菌有7種，其中細(xì)菌2種，為大腸桿菌(Escherichiacoli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，由荊楚理工學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供；植物病原真菌有5種，分別是西瓜枯萎菌(Fusariumoxysporumvf.sp.niveum)、番茄早疫菌(Alternariasolani)、葡萄炭疽菌(Glomerellacingulata)、番茄灰霉菌(Botrytiscinerea)、小麥赤霉菌(FusariumgraminearumSchw)，由魯東大學(xué)楊潤(rùn)亞教授提供。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生真菌的分離純化 采用組織塊分離法分離內(nèi)生真菌[5]。取新鮮的油茶組織材料根、莖、葉適量(其中根、莖剪成適當(dāng)大小)，分別用自來水清洗干凈，置于75%乙醇中浸泡1～2 min，用無菌水沖洗3～4次；再用0.2%升汞浸泡1～2 min，用無菌水沖洗3～4次[6]；然后，置于已紫外線殺菌30 min的超凈工作臺(tái)上晾干，用無菌刀片分別將消毒后的葉片裁成2 mm×2 mm大小、將根和莖(枝條)截成長(zhǎng)度為2 mm的小段，接種到PDA培養(yǎng)基上。每次分離，每個(gè)地區(qū)每種材料均接種100個(gè)組織塊。

將接種了組織塊的培養(yǎng)皿置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中4～7 d，隔日觀察組織切口部位菌絲的生長(zhǎng)情況。待組織切口部位有菌絲長(zhǎng)出時(shí)，用接種針挑取邊緣菌絲以三點(diǎn)點(diǎn)植法接種到新的PDA平板上繼續(xù)培養(yǎng)，純化2～3次后得到單一菌種。

1.2.2 內(nèi)生真菌的鑒定與保藏 內(nèi)生真菌分類地位的確定采用形態(tài)學(xué)鑒定法，包括菌落形態(tài)和個(gè)體形態(tài)。通過平板培養(yǎng)觀察菌落形態(tài)，如菌落大小、顏色、紋飾、質(zhì)地、邊緣等；通過制片觀察個(gè)體形態(tài)，如菌絲的特征、孢子的形態(tài)等。根據(jù)這些形態(tài)特征依據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》[7]鑒定到屬。將已經(jīng)鑒定的菌種接入PDA試管斜面培養(yǎng)基，4 ℃冰箱中保藏備用。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 統(tǒng)計(jì)不同地區(qū)、不同組織部位、不同季節(jié)樣品分離出的各種內(nèi)生真菌數(shù)量[8]，并按表1進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。

1.2.4 抑菌能力測(cè)定 對(duì)待測(cè)內(nèi)生真菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，收集發(fā)酵產(chǎn)物[9]。將病原菌分別活化后，制成終濃度為106cfu/mL的指示菌菌液，分別涂布于相應(yīng)的培養(yǎng)基上。抑菌活性的測(cè)定采用濾紙片法。將無菌的、直徑為5 mm的濾紙片浸泡在待測(cè)菌的發(fā)酵液中約2 h，用浸泡了甲醇溶液的無菌濾紙片作對(duì)照，在超凈工作臺(tái)中將浸泡好的濾紙片放入剛制作好的指示菌平板的中央，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)。細(xì)菌置于37 ℃、真菌置于28 ℃培養(yǎng)，定期觀察并記錄結(jié)果。

1.2.5 具有抑菌活性的部分菌株的分子鑒定 采用CTAB法提取真菌的基因組DNA，擴(kuò)增反應(yīng)所用引物為ITS-1 (5’- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和ITS-4(5’-TCCTCCGCTTATTGTATGC-3’)[10]。擴(kuò)增、克隆后選取15個(gè)陽性克隆子的菌液送武漢伯爾生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)定序列用NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫中BLAST程序進(jìn)行比對(duì)分析，再用MEGA軟件進(jìn)行聚類分析，探討每個(gè)菌株的分類地位。

表1 數(shù)據(jù)處理所用指標(biāo)的計(jì)算方法及用途

2 結(jié)果與分析

2.1 油茶內(nèi)生真菌的組成

從湖北5個(gè)地區(qū)不同季節(jié)采集的油茶根、莖、葉樣品共4 500個(gè)組織塊中分離得到內(nèi)生真菌1 612株，其中有66株因不產(chǎn)孢而未鑒定出種屬，暫歸為一類——無孢菌群(sterile mycelia)，其他菌株經(jīng)鑒定后歸于24屬，分別屬于5個(gè)目，即從梗孢目(Moniliales)、球殼孢目(Sphaeropsidales)、黑盤孢目(Melanconiales)、盤菌目(Pezizales)、座囊菌目(Dothideales)(表2)。在目的分類水平上，從梗孢目為優(yōu)勢(shì)菌群，占總菌株數(shù)64.56%；在科的分類水平上，叢梗孢科為優(yōu)勢(shì)菌群，占總菌株數(shù)的40.62%；在屬的水平上，青霉屬(Pencillium)、鏈格孢屬(Alternaria)、刺盤孢屬(Colletotrichum)為優(yōu)勢(shì)類群，分別占總菌株數(shù)的21.09%、19.11%和14.70%。

表2 油茶內(nèi)生真菌的類群組成

2.2 油茶內(nèi)生真菌的差異分布

2.2.1 在不同組織部位的分布 油茶不同組織部位均有內(nèi)生真菌分布，已鑒定出種屬的1 546株內(nèi)生真菌中以葉分離的最多，共824株；其次是莖，有490株；根最少，僅232株。這些不同組織部位樣品的內(nèi)生真菌菌群在數(shù)量上存在差異，葉中有21個(gè)屬，莖中有22個(gè)屬，根中分布17個(gè)屬(表3)。此外，在葉和莖中還發(fā)現(xiàn)了內(nèi)生真菌特有屬，在葉中的特有屬為殼單孢屬(Amerosporium)，在莖中的特有屬為鮮殼孢屬(Zythia)。

表3 油茶內(nèi)生真菌菌群的的差異分布及多樣性指數(shù)

2.2.2 在不同地理位置的分布 油茶內(nèi)生真菌菌群因采樣地不同分離情況也有區(qū)別(表3)。從分離率上來看，依次為恩施(381株，分離率8.47%)、黃岡(365株，分離率8.11%)、荊門(328株，分離率7.29%)、武漢(327株，分離率7.27%)、十堰(145株，分離率3.22%)。由表4可見，除了共有的優(yōu)勢(shì)菌群外，各地區(qū)具有各自的優(yōu)勢(shì)菌群，其中，恩施為頭孢霉屬(Cephalosporium，2.98%)，黃岡為球座菌屬(Guignardia，2.36%)，荊門為瓶梗青霉屬(Paecilomyces，2.85%)，武漢為木霉屬(Trithoderma，2.17%)，十堰為枝孢霉屬(Cladosporium，1.36%)。此外，油茶內(nèi)生真菌也具有一定的地理分布特征，恩施為鮮殼孢屬，黃岡為殼單孢屬。

表4 不同地區(qū)油茶內(nèi)生真菌菌群的比較

2.2.3 在不同季節(jié)的分布 分離率在不同季節(jié)也不一樣。由表3可見，春季分離了16屬277株內(nèi)生真菌，分離率為6.16%；夏季分離了21屬480株內(nèi)生真菌，分離率為10.67%，秋季分離了22屬789株內(nèi)生真菌，分離率為17.53%。

2.3 油茶內(nèi)生真菌的多樣性

2.3.1 菌群的多樣性指數(shù) 由表3可見，5個(gè)采樣地點(diǎn)間油茶內(nèi)生真菌的多樣性指數(shù)存在差異。從屬的水平看，恩施采樣地點(diǎn)的內(nèi)生真菌種類最多，有20個(gè)屬，黃岡和武漢次之，有18個(gè)屬，十堰最少，僅10個(gè)屬；從Shannon-Wiener指數(shù)(H′)來看，黃岡最高，為2.44 ，恩施次之，為2.37，十堰最低，為1.74；從Simpson指數(shù)(D)來看，黃岡為0.89，恩施為0.86，十堰為0.79，其表現(xiàn)趨勢(shì)與Shannon-Wiener指數(shù)(H′)基本保持一致。不同組織部位油茶樣品內(nèi)生真菌的多樣性指數(shù)也存在差異。從屬的水平看，莖中內(nèi)生真菌的種類最多，有22個(gè)屬，葉中有21個(gè)屬，根為17個(gè)屬；從Shannon-Wiener指數(shù)(H′)和Simpson指數(shù)(D)來看，均體現(xiàn)出多樣性的大小關(guān)系為莖>葉>根。由不同季節(jié)油茶樣品內(nèi)生真菌的Shannon-Wiener指數(shù)(H′)和Simpson指數(shù)(D)表現(xiàn)為秋季>夏季>春季。

均勻度可以反映群落中不同物種個(gè)體數(shù)目分配的均勻程度。通過各內(nèi)生真菌種群均勻度指數(shù)(J)發(fā)現(xiàn)，分離得到的內(nèi)生真菌種群均勻度各不相同，以黃岡地區(qū)最高(0.77)，十堰地區(qū)最低(0.55)。

2.3.2 菌群的相似性指數(shù) 由表5、6可見， 5個(gè)采樣地點(diǎn)分離獲得的內(nèi)生真菌菌群的相似性指數(shù)均≥0.50，這說明各地油茶內(nèi)生真菌菌群之間有一定的相似度，其中以黃岡和武漢的相似性指數(shù)最高，為0.89，十堰與其他各地的相似度均偏低。從不同組織部位油茶樣品中分離的內(nèi)生真菌菌群相似性指數(shù)表現(xiàn)為葉與莖的內(nèi)生真菌相似性指數(shù)最高(0.88)，葉與根的內(nèi)生真菌相似性指數(shù)最低(0.79)。

表5 不同地理位置油茶樣品內(nèi)生真菌菌群組成的 相似性指數(shù)(CS)

表6 不同組織部位油茶樣品內(nèi)生真菌菌群組成的 相似性指數(shù)(CS)

2.4 油茶內(nèi)生真菌的抑菌能力

從每個(gè)屬中隨機(jī)挑取1株菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，共獲得24組發(fā)酵液(編號(hào)分別為OUT-1、OUT-2…OUT-24)。由表7可見，總共有17株菌株的發(fā)酵液對(duì)至少1種指示菌有一定的抑菌能力，占全部?jī)?nèi)生真菌種類的70.83%。其中對(duì)西瓜枯萎菌有抑制作用的有6株；對(duì)番茄早疫菌有抑制作用的有6株；對(duì)葡萄炭疽菌有抑制作用的有4株；對(duì)番茄灰霉菌有抑制作用的有6株；對(duì)小麥赤霉菌有抑制作用的有2株；對(duì)大腸桿菌有抑制作用的有6株；對(duì)金黃色葡萄球菌有抑制作用的有3株。

在這17株具有抑菌能力的內(nèi)生真菌中，僅對(duì)植物病原真菌有抑菌能力的有9株，僅對(duì)細(xì)菌有抑菌能力的有2株，既對(duì)植物病原真菌有抑菌能力又對(duì)細(xì)菌有抑菌能力的有6株；其中，OUT-1、OUT-11和OUT-15分別對(duì)4、5、4種供試菌有較強(qiáng)的抑制作用且抑菌效果較好，其中以O(shè)UT-11的抑菌效果最佳，它的抑菌范圍較廣且抑菌程度較強(qiáng)。

表7 油茶內(nèi)生真菌的抑菌能力

2.5 3株具有抑菌活性的油茶內(nèi)生真菌的聚類分析

對(duì)OUT-1、OUT-11和OUT-15 3株抑菌活性較好的內(nèi)生真菌進(jìn)行序列測(cè)定，以釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)為外群，按照NJ(neighbor-joining)法所構(gòu)的聚類分析圖見圖1。OUT-1與青霉屬的菌株聚為一支，OUT-11與鏈格孢屬菌株聚為一支，OUT-15與葉點(diǎn)霉屬菌株聚為一支，故判斷OUT-1屬于青霉屬(Penicillum)，OUT-11屬于鏈格孢屬(Alternaria)，OUT-15屬于葉點(diǎn)霉屬(Phyllosticta)，這與形態(tài)學(xué)鑒定的分類結(jié)果一致。

圖1 抑菌活性較好的菌株的聚類分析

3 結(jié)論與討論

隨著內(nèi)生真菌研究的逐步升溫，越來越多的植物內(nèi)生真菌被篩選、分離和鑒定?？傮w上看，內(nèi)生真菌的研究方法通常有2種，一種是傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)分離法，另一種是免培養(yǎng)法。組織培養(yǎng)分離法是將組織塊進(jìn)行表面消毒后，接種于固體培養(yǎng)基，經(jīng)反復(fù)純化終得到純菌株的方法，該方法耗時(shí)長(zhǎng)，處理較為繁瑣，但是可以獲得數(shù)量眾多的純菌株。而免培養(yǎng)法則是跳過了培養(yǎng)階段，在PCR擴(kuò)增時(shí)既會(huì)擴(kuò)增出植物的ITS序列，也會(huì)有內(nèi)生真菌的ITS序列，但這2種序列大小上通常存在差異，因此，通過切膠純化的方式可將二者分開，測(cè)序后通過序列比對(duì)獲得植物內(nèi)生真菌的相關(guān)信息，這種方法簡(jiǎn)便易行，但缺點(diǎn)是沒有相應(yīng)的內(nèi)生真菌培養(yǎng)物，不利于后續(xù)研究。本試驗(yàn)主要采用組織培養(yǎng)分離法，從油茶4 500個(gè)組織塊中共篩選出1 612株內(nèi)生真菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為24個(gè)屬，屬于子囊菌，其中青霉屬、鏈格孢屬、刺盤孢屬為優(yōu)勢(shì)類群，這些菌屬在他人研究中也存在[11-12]。Zhou等[13]采用免培養(yǎng)法分析了油茶葉片中內(nèi)生真菌的組成。通過PCR和序列比對(duì)分析，證實(shí)擴(kuò)增出的序列全部來自于子囊菌，其中曲霉屬(Aspergillus)為優(yōu)勢(shì)菌株。 張林平等[14]同樣采用傳統(tǒng)方法從江西省林業(yè)科學(xué)院油茶園中選取了9株油茶健康植物進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離。結(jié)果顯示，芒果球座菌(Guignardiamangiferae)為油茶內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)種，青霉屬、鏈格孢屬、鐮孢屬(Fusarium)在油茶不同組織部位也廣泛出現(xiàn)。

除了篩選油茶中的內(nèi)生真菌外，本研究還探討了油茶內(nèi)生真菌在不同組織部位、不同季節(jié)和不同地區(qū)間分布的差異。結(jié)果顯示，油茶葉、莖和根中內(nèi)生真菌的分離率依次降低，表明內(nèi)生真菌在不同組織部位的定殖率存在差異，葉片受內(nèi)生真菌侵染的概率最高，該結(jié)果與張林平等[14]和周希等[15]的研究結(jié)果基本一致；秋季、夏季和春季的分離率呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，這可能是由于季節(jié)不同，受氣候的影響，春季氣溫較低，不易于孢子萌發(fā)，而夏季降雨量豐富以及秋季合適的氣溫，為內(nèi)生真菌的生長(zhǎng)提供了適宜的條件，所以夏、秋季節(jié)的內(nèi)生真菌數(shù)量高于春季；不同地區(qū)間內(nèi)生真菌的分離率顯示，恩施和黃岡高于荊門和武漢，更高于十堰，可能是因?yàn)槎魇┖忘S岡的環(huán)境條件較為相似，都是物種豐富的山區(qū)，氣候宜人，濕度大，利于內(nèi)生真菌的定殖和生長(zhǎng)，而分離率最低的十堰，可能是因?yàn)椴杉臉悠飞L(zhǎng)年限較短，基本上都是油茶苗，所以內(nèi)生真菌數(shù)量偏少。由此可見，分離出的內(nèi)生真菌的種類和數(shù)量在一定程度上受到取樣地點(diǎn)、取樣部位和取樣時(shí)間的影響。

內(nèi)生真菌的豐富度指數(shù)和均勻度指數(shù)可反映其多樣性的高低和菌群是否穩(wěn)定。本研究中Shannon-Wiener 多樣性指數(shù)和Simpson指數(shù)結(jié)果基本一致，不同地區(qū)中以黃岡地區(qū)內(nèi)生真菌的多樣性指數(shù)最高；就組織部位而言，莖中內(nèi)生真菌的多樣性最高；就季節(jié)而言，秋季內(nèi)生真菌的多樣性指數(shù)最高，種類最多。其中，莖中分離出的內(nèi)生真菌數(shù)量雖然少于葉片，但其種類更多一些。Evenness指數(shù)反映均勻度狀況。本研究結(jié)果顯示，各地區(qū)、各組織和不同季節(jié)內(nèi)生真菌菌群相對(duì)比較穩(wěn)定，說明油茶在長(zhǎng)期生長(zhǎng)過程中與其環(huán)境中的內(nèi)生真菌菌群可能形成了良好的共生關(guān)系，只是因?yàn)槭叩貐^(qū)的樣品是油茶苗，所以均勻度偏低。相似性系數(shù)結(jié)果顯示，黃岡與武漢地區(qū)的油菜內(nèi)生真菌相似性系數(shù)最高，而十堰與其他地區(qū)的油菜內(nèi)生真菌相似性系數(shù)普遍偏低。根與莖的內(nèi)生真菌相似性系數(shù)小于莖與葉的內(nèi)生真菌相似性系數(shù)，這可能反映出內(nèi)生真菌的一種侵染機(jī)制，還有待于進(jìn)一步的研究。

24株內(nèi)生真菌的抑菌性結(jié)果顯示，17株內(nèi)生真菌具有一定的抑菌活性，其中，有8株內(nèi)生真菌的抑菌作用并不顯著，僅表現(xiàn)出較弱的抗菌效果(Φ﹤10 mm)；有6株內(nèi)生真菌的抗菌效果中等(10 mm≤Φ﹤20 mm)；有3株內(nèi)生真菌顯示出較好的抑菌效果(Φ≥20 mm)，且這3種內(nèi)生真菌經(jīng)分子鑒定，其結(jié)果與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果保持一致，分屬于青霉屬、鏈格孢屬和葉點(diǎn)霉屬。內(nèi)生真菌具有抑菌性，源于內(nèi)生真菌能產(chǎn)生具有抑菌性的物質(zhì)[16-17]。雖然其產(chǎn)量通常比植物宿主低，但與植物宿主相比，內(nèi)生真菌具有生長(zhǎng)速度快、不受季節(jié)影響、易誘變等優(yōu)勢(shì)，可以作為新型天然農(nóng)藥或藥物的重要生物來源，彌補(bǔ)天然植物開發(fā)因受資源限制不能無限制開采的缺點(diǎn)，因此備受研究者的青睞。在后續(xù)試驗(yàn)中，將把這3種內(nèi)生真菌作為重點(diǎn)菌種對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步分析，確定其抑菌成分和抑菌濃度，期望從油茶內(nèi)生真菌中分離得到具有較高抑菌效果的新化合物。

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Diversity，Antimicrobial Activity of Endophytic Fungi fromCamelliaoleifera

ZHANG Ting，ZUO Xuezhi，XU Yan

(College of Bioengineering，Jingchu University of Technology,Jingmen 448000,China)

To understand the classification,distribution feature and applied potential of endophytic fungi fromC.oleifera,we collected samples from five plantingregions in Hubei province in different seasons.Endophytic fungi were separated from theseC.oleiferafor the diversity and antimicrobial activity analysis.In this study,1 612 stains of ebdophytic fungi were isolated,which were categorized into 24 genera by morphological analysis.Sixty-six strains with no reproductive features were classified as sterile mycelia.The dominant groups werePencillium,AlternariaandColletotrichum,accounting for 21.09%,19.11% and 14.70% of isolated strains respectively.Diversity analysis of isolated strains in different regions indicates that endophytic fungi from Huanggang showed highest Shannon-wiener diversity index (2.44);the highest indexes were in stem(2.52) and in autumn(2.58) in different tissues and different seasons respectively.In general, the populations of endophytic fungi fromC.oleiferawere stable,the composition of endophytic fungi in the samples from different regions or different tissues was similar.Antimicrobial assay indicated that fermented extract in 17 of 24 chosen strains had antimicrobial activity,3 strains exhibited greater activity than the others,which belonged toPencillium,AlternariaandPhyllosticta,respectively.Our results demonstrated that endophytic fungi fromC.oleiferahad great antimicrobial activity,and were worth further studying.

Camelliaoleifera； endophytic fungi; isolation rate； diversity； antimicrobial activity

2016-08-13

湖北省教育廳科研項(xiàng)目(Q20134301)

張 婷(1980-)，女，湖北襄陽人，講師，碩士，主要從事微生物資源利用研究。E-mail:ztxianyun@126.com

Q938.1；Q939.9

A

1004-3268(2017)04-0068-07