徐玉玲， 徐騰達(dá)， 將天宇， 寇 強(qiáng)， 陳如雪， 鄧燕君

(成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106)

基于總皂苷臨床利用量的麥冬質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

徐玉玲， 徐騰達(dá)， 將天宇， 寇 強(qiáng)， 陳如雪， 鄧燕君

(成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106)

基于麥冬總皂苷的臨床利用量對(duì)麥冬的品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)研究.采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選麥冬中總皂苷的最佳提取工藝，根據(jù)最佳提取工藝采用UV法測(cè)定4批麥冬中總皂苷的含量，從而計(jì)算其臨床利用量.麥冬總皂苷最佳提取工藝為，8倍量60%乙醇提取3次，每次1.5 h；4批麥冬總皂苷臨床利用量(g/100 g)分別為，0.166 g，0.213 g，0.226 g，0.178 g.結(jié)果表明，建立的方法符合中藥材成分復(fù)雜的特點(diǎn)，并與臨床利用相關(guān)的評(píng)價(jià)方法，為麥冬中藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)研究提供了一種新的思路.

麥冬；總皂苷；臨床利用量；質(zhì)量評(píng)價(jià)

0 引 言

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬的肉質(zhì)塊莖[1]，主產(chǎn)于浙江、四川等地，為常用中藥品種，臨床上常用于治療冠心病、心絞痛等癥[2].麥冬所含總皂苷現(xiàn)已被《中國(guó)藥典》2015版第一部及相關(guān)文獻(xiàn)列為麥冬主要質(zhì)量控制指標(biāo)之一[3].中藥成分臨床利用量，是指藥材成分在臨床應(yīng)用時(shí)，藥材中的化學(xué)成分可被臨床使用時(shí)利用的量.基于中藥成分臨床利用量的中藥材藥用品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)，符合中醫(yī)藥臨床應(yīng)用特點(diǎn)，是體現(xiàn)中藥特色的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)方法,該方法可為豐富中藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)理論提供新的研究思路和方法，能保證藥材的臨床應(yīng)用療效[4].目前，未見(jiàn)對(duì)麥冬的品質(zhì)采用化學(xué)成分臨床利用量進(jìn)行評(píng)價(jià)的相關(guān)研究報(bào)道,對(duì)此，為了探索麥冬臨床利用量與現(xiàn)行指標(biāo)之間的差異，本研究進(jìn)行了相關(guān)工作.

1 試藥與儀器

1.1 試 藥

實(shí)驗(yàn)所用試藥包括：麥冬(產(chǎn)地四川，批號(hào)，20151210、20160407、20160407；產(chǎn)地湖北，批號(hào)，20160407)，購(gòu)自于四川成都市荷花池藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)成都大學(xué)劉濤研究員檢驗(yàn)為百合科沿階草屬植物麥冬的肉質(zhì)塊莖，共4個(gè)樣品；魯斯可皂苷元對(duì)照品(批號(hào)，151220，純度>98%)，購(gòu)自于四川維克奇生物科技有限公司，甲醇(批號(hào)，20160124)、正丁醇(批號(hào)，20160121)、氨水(批號(hào)，20151102)、高氯酸(批號(hào)，20151021)、95%乙醇(批號(hào)，20151002)，均購(gòu)自于成都市科龍化工試劑廠；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純.

1.2 儀 器

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：TU-1810型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)，BS-6KH型電子天平(上海友聲衡器有限公司) ，F(xiàn)A2004型電子分析天平(上海良平儀器儀表有限公司).

2 麥冬總皂苷最佳提取工藝研究

2.1 麥冬原藥材總皂苷測(cè)定方法

2.1.1 供試品溶液的制備.

取麥冬細(xì)粉約3 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，加熱回流2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò).精密量取續(xù)濾液25 mL，回收溶劑至干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，再用水飽和正丁醇振搖，提取5次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨液洗滌2次，每次5 mL，棄去氨液.正丁醇液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加80%甲醇至刻度線，搖勻，精密量取供試品溶液2～5 mL，置10 mL具塞試管中，水浴揮干溶劑，精密加高氯酸10 mL，搖勻，置熱水中保溫15 min，取出，冷水冷卻，在397 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度.

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備.

取魯斯可皂苷元對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液.

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備.

精密量取對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL，分別置具塞試管中，于水浴中揮干溶劑，精密加人高氯酸10 mL，搖勻，置熱水中保溫15 min，取出，冰水冷卻，以相應(yīng)的試劑為空白，按照紫外—可見(jiàn)分光光度法，在397 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為，

Y=0.0183X+0.01135，r=0.9995.

2.2 麥冬提取液總皂苷測(cè)定方法

2.2.1 單因素實(shí)驗(yàn).

取麥冬4份，每份50 g，置于燒瓶中，分別加10倍水，40%、60%、80%乙醇，加熱回流2 h，提取后濾過(guò)，待濾液冷卻至室溫，測(cè)定體積，搖勻，精密量取濾液25 mL，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解.用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次10 mL，合并正丁醇液，再用氨試液洗滌2次，每次5 mL，棄去氨液，蒸干正丁醇，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，精密量取供試品3 mL，置10 mL具塞試管中，于水浴中揮干溶劑，精密加入高氯酸10 mL，搖勻，置70～80 ℃水中保溫15 min取出，冰水冷卻，作為供試品，采用UV法測(cè)定麥冬總皂苷含量，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麥冬總皂苷提取方法采用60%乙醇提取為佳.

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn).

1)提取條件選擇.為考察麥冬總皂苷制備條件，取每份50 g麥冬以總皂苷含量為指標(biāo)做L9(34)正交實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)因素分別為，60%乙醇溶媒量(A)、提取次數(shù)(B)、提取時(shí)間(C)，因素水平如表2所示.

表2 實(shí)驗(yàn)因素水平

2)正交實(shí)驗(yàn)與結(jié)果.按照正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，以總皂苷為指標(biāo)進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4.

表3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果L9(34)

表4 方差分析表

注：F0.05(2，2)=19，F(xiàn)0.01(2，2)=99.

由表3可知，溶媒量、提取次數(shù)及提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)麥冬總皂苷的提取影響程度不同，R值大小依次為RC>RA>RB，提取次數(shù)對(duì)于含量的影響最大.由表4方差分析可知，提取次數(shù)(C)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性差異，提取時(shí)間(B)和溶媒量(A)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著性差異.根據(jù)此分析結(jié)果，本研究選擇最佳提取工藝為，A2B2C3，即用8倍量60%乙醇提取3次，每次1.5 h.

2.2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)所得最佳提取工藝，以每份50 g麥冬對(duì)其進(jìn)行3組平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所得麥冬總皂苷的含量分別為，80.56 mg、81.72 mg及85.12 mg(RSD=3.5%).結(jié)果表明，正交實(shí)驗(yàn)所得最佳工藝穩(wěn)定可行.

2.3 總皂苷含量、提取轉(zhuǎn)移率及臨床利用量測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2015版第一部麥冬項(xiàng)下相關(guān)方法測(cè)定4批樣品的總皂苷含量、提取轉(zhuǎn)移率及臨床利用量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5.

表5 4批麥冬總皂苷測(cè)定結(jié)果

注：臨床利用量=100 g×藥材含量×含量轉(zhuǎn)移率.

由表5可知，20151210批次麥冬總皂苷含量最高，為0.315%.20160407批次麥冬總皂苷含量最低，為0.266%.20151210批麥冬總皂苷臨床利用量最高，為0.226 g/100 g，20160407批次麥冬總皂苷臨床利用量最低，為0.166 g/100 g.

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究表明，麥冬總皂苷含量和臨床利用量具有一致性，所以對(duì)于麥冬品質(zhì)評(píng)價(jià)可通過(guò)麥冬總皂苷含量或麥冬總皂苷臨床利用量這2個(gè)指標(biāo)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià).基于麥冬中藥材用于臨床用藥，建議以臨床利用量進(jìn)行考察麥冬品質(zhì).總體來(lái)看，中藥成分臨床利用量不僅可以反映藥材含量和轉(zhuǎn)移率的高低，同時(shí)對(duì)該成分在臨床上實(shí)際被利用的情況具有重要參考價(jià)值.此外，現(xiàn)行藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多以化學(xué)成分含量高低來(lái)對(duì)藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，此評(píng)價(jià)與其是否在臨床中被應(yīng)用之間相關(guān)性不強(qiáng).例如，劉濤等[5]在評(píng)價(jià)黃芩質(zhì)量時(shí)發(fā)現(xiàn)，黃芩苷的含量與臨床利用量差異明顯，徐玉玲等[6]測(cè)定黃柏中鹽酸小檗堿的藥材含量較高，而臨床利用量卻較低，含量與臨床利用量不具一致性.中藥成分臨床利用量是聯(lián)系藥材成分的含量和提取利用率的一種量化指標(biāo)，在一定程度上能夠表征藥材的臨床實(shí)際效用.因此，該方法對(duì)藥材某一臨床功效進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)有一定的意義，但對(duì)藥材整體進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，涉及權(quán)重系數(shù)的比重問(wèn)題，有待結(jié)合藥效進(jìn)行綜合討論.另外，本實(shí)驗(yàn)中樣品批次較少，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能有一定影響，有待進(jìn)一步驗(yàn)證.

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]袁春麗,孫立,袁勝濤.等.麥冬有效成分的藥理活性及作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].2013(22)：212-214.

[3]曹原湘,張興國(guó)一,楊言探.麥冬質(zhì)量控制技術(shù)的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009(37):33-36.

[4]劉濤,茍小軍,萬(wàn)德光.等.基于“中藥成分臨床利用率"的中藥材藥用品質(zhì)評(píng)價(jià)模式的商建[J].中草藥,2015(13):1863-1866.

[5]劉濤,張蕾,劉婷.等.不同產(chǎn)地黃芩中的黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率研究[J].成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2014,33(1):8-10.

[6]徐玉玲,吳南軒,李鵬程.等.基于化學(xué)成分臨床利用量的不同產(chǎn)地黃柏質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中國(guó)測(cè)試，2016(12):45-48.

Evaluation Research on Ophiopogon Japonicus Quality Based on Clinical Utilization Amount of Total Saponins

XUYuling,XUTengda，JIANGTianyu，KOUQiang，CHENRuxue，DENGYanjun

(School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The paper is going to evaluate the quality of ophiopogonin japonicus based on the clinical utilization amount of saponins.The optimum extraction process of total saponins in ophiopogon japonicus are optimized by orthogonal experiments.Based on the optimum extraction process,UV method is used to measure the content of total saponins in the 4 batches of ophiopogon japonicus in order to calculate the accurate amount for clinical use.The results show that the optimum extraction process of total saponins of ophiopogon japonicus is 8 times the amount of 60% ethano,extract 3 times,each time 1.5 h.The clinical utilization amount of the total saponins of ophiopogonin japonicus from those 4 batches e(g/100 g) are 0.166,0.213,0.226,0.178 g respectively.The conclusion drawn from the study is that the method established in this paper conforms to the characteristics of Chinese herbal medicine with complex composition.The method is also related to clinical use.It provides a new way to evaluate the quality of medicinal materials in ophiopogon japonicus.

ophiopogon japonicus;clinic utilization amount;quality evaluation

1004-5422(2017)01-0012-03

2016-12-28.

徐玉玲(1975 — )， 女， 碩士， 副教授， 從事中成藥新藥開(kāi)發(fā)與中藥質(zhì)量再評(píng)價(jià)研究.

R284.2；R286.07

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