鮑方名

（蘇州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇蘇州 215104）

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室高壓蒸汽滅菌鍋的規(guī)范化使用

鮑方名

（蘇州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇蘇州 215104）

高壓蒸汽滅菌鍋是藥品微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器具、陽性廢棄物最常用的、有效的滅菌設(shè)備。高壓蒸汽滅菌鍋從驗(yàn)證到滅菌狀態(tài)的維護(hù)應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)范。為了確保高壓蒸汽滅菌鍋的有效使用，必須從安裝確認(rèn)、操作確認(rèn)、工藝確認(rèn)等方面進(jìn)行好驗(yàn)證工作，在使用過程中要用參數(shù)監(jiān)測、化學(xué)監(jiān)測、生物監(jiān)測等手段對滅菌質(zhì)量有效評價(jià)。

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室；高壓蒸汽滅菌；規(guī)范化

高壓蒸汽滅菌技術(shù)廣泛應(yīng)用于藥品微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器具、陽性廢棄物的日常滅菌，是藥品無菌檢驗(yàn)質(zhì)量的基礎(chǔ)保障。根據(jù)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局的要求，操作人員需經(jīng)過一定課時(shí)的培訓(xùn)經(jīng)考試后獲得壓力容器操作證才可操作高壓蒸汽滅菌鍋[1]。但是，這項(xiàng)培訓(xùn)僅僅針對高壓蒸汽滅菌鍋的安全使用，對如何規(guī)范化使用保障藥品檢驗(yàn)質(zhì)量沒有涉及。本文通過介紹高壓蒸汽滅菌鍋的驗(yàn)證、日常使用及監(jiān)測，為高壓蒸汽滅菌鍋在藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化使用提出一些建設(shè)性的建議。

1 高壓蒸汽滅菌鍋的驗(yàn)證

1.1 安裝確認(rèn)

1.1.1 公共設(shè)施的確認(rèn)

（1）供電要求。根據(jù)滅菌鍋的要求設(shè)置符合要求的工作電流電壓。如果有多臺滅菌鍋同時(shí)放在滅菌間，必須考慮總負(fù)荷能否承受，最好留有余量。

（2）空間要求。培養(yǎng)基滅菌鍋應(yīng)設(shè)置在工作流程的前端，如果使用雙扉滅菌鍋應(yīng)與潔凈區(qū)一起設(shè)計(jì)。處理陽性垃圾的滅菌鍋應(yīng)該設(shè)置在工作流程的末端。若有二級生物安全水平要求時(shí)，應(yīng)在靠近實(shí)驗(yàn)室的位置配備高壓滅菌器或其他清除污染的工具[2]。

（3）消防安全。煙霧報(bào)警器位置不能設(shè)置在滅菌鍋開門或開口的正上方，否則在滅菌鍋打開時(shí)產(chǎn)生的蒸汽容易引起誤報(bào)警甚至灑水。

（4）其他要求。純化水水源、排水、壓縮空氣等也應(yīng)在設(shè)備要求范圍之內(nèi)。

1.1.2 滅菌鍋本身儀表確認(rèn)

（1）安全閥按照國家強(qiáng)制檢查要求校準(zhǔn)。

（2）壓力表校準(zhǔn)。

1.1.3 儀器附帶文件是否齊全，按照滅菌鍋?zhàn)詭募夸浐藢?/p>

1.1.4 滅菌鍋操作及維護(hù)文件是否齊全，防燙手套是否配備，操作人員是否具備使用壓力容器上崗證

1.2 操作確認(rèn)

1.2.1 溫度分布

核查滅菌鍋腔室內(nèi)的溫度分布均勻性，確定腔室內(nèi)可能存在的“冷點(diǎn)”位置及溫度差應(yīng)≤1℃。由表1可知，在2015版藥典中對培養(yǎng)基的滅菌條件多集中在121℃和115℃。可根據(jù)滅菌鍋的具體使用對象選擇相應(yīng)的溫度進(jìn)行溫度分布確認(rèn)?？刹捎米銐虻臏囟葔毫μ筋^固定在腔室內(nèi)不同位置，其中蒸汽進(jìn)口，冷凝水出口，滅菌鍋?zhàn)詭筋^處需各固定一個探頭，其他探頭在腔體內(nèi)部平均分布?？蛰d情況下連續(xù)滅菌三次，看設(shè)備本身性能是否能達(dá)到溫度差應(yīng)≤1℃。滿載的情況下，除了在空間平均布局探頭之外，滅菌物品的內(nèi)部等蒸汽不容易到達(dá)的地方也需要設(shè)置探頭。不同類型的滅菌鍋根據(jù)滅菌條件的不同，是否滿載對滅菌效果的影響大不一樣。脈動真空式滅菌柜由于不需要高的真空度，被滅菌品裝載過密時(shí)，滅菌效果差[3]?，F(xiàn)在無菌實(shí)驗(yàn)室流行使用的雙扉滅菌鍋多為脈動真空式滅菌柜，裝載時(shí)一定要注意不要裝載過密并加強(qiáng)監(jiān)控。

表1 2015版藥典培養(yǎng)基及滅菌條件Tab.1 Culture media and autoclave cycle of ChP 2015

1.2.2 生物指示劑

市售的濕熱滅菌用生物指示劑含有一定數(shù)量的耐受性最強(qiáng)的微生物制備的孢子，而且數(shù)量超過實(shí)際的微生物污染水平。就是在這樣一個過度殺滅的滅菌中，生物指示劑的被滅殺程度是評價(jià)一個滅菌程序有效性最直觀的的指標(biāo)。腔室滿載的情況下，在冷點(diǎn)位置設(shè)置生物指示劑，檢驗(yàn)滅菌效果。

表2 濕熱滅菌工藝常用生物指示劑Tab.2 Biological indicator for moist heat sterilization process

1.3 蒸汽滅菌工藝確認(rèn)

1.3.1 有效性

使用高壓蒸汽滅菌鍋對物品進(jìn)行滅菌時(shí)達(dá)到理論無菌是最基本的要求。針對不同的滅菌物品選擇不同的滅菌程序，最后確認(rèn)滅菌的有效性。

由于操作方便及有限的滅菌鍋數(shù)量限制，操作時(shí)會在液體程序中混合滅菌空瓶及其他器具。實(shí)驗(yàn)表明，蒸汽很難穿過擰緊的藍(lán)蓋瓶進(jìn)入內(nèi)部。如果使用液體程序滅菌空瓶，要注意擰松或者在內(nèi)部預(yù)先裝好培養(yǎng)基或緩沖液。而且傳統(tǒng)的紗布包裝在液體程序滅菌后濕透，不利于無菌狀態(tài)的保持，最好使用透氣的滅菌袋。

1.3.2 功能性

由于在實(shí)際操作過程中無法對每次滅菌物品的初始污染菌含量進(jìn)行準(zhǔn)確識別，所以現(xiàn)在通用的滅菌程序都是過量滅菌。過量滅菌的高溫高壓過程會對某些培養(yǎng)基的有效成分引起破壞，有些培養(yǎng)基的滅菌溫度就比常規(guī)的121℃低，相應(yīng)的滅菌時(shí)間適當(dāng)延長，如RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌鍋工藝確認(rèn)中必須選擇此類培養(yǎng)基進(jìn)行相應(yīng)的功能性確認(rèn)，證明在當(dāng)前的滅菌條件下培養(yǎng)基的功能沒有受到影響，或者可以整合培養(yǎng)基的適用性檢查的數(shù)據(jù)體現(xiàn)在高壓蒸汽滅菌鍋工藝確認(rèn)報(bào)告中。

1.3.3 滅菌后的轉(zhuǎn)移

培養(yǎng)基是在密閉的容器中滅菌，滅菌后只要進(jìn)行表面消毒即可以保持滅菌狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)器具如果是使用紗布包裝，無論液體程序或者器具程序都會存在濕包情況，無菌狀態(tài)不易于保持，最好使用透氣的滅菌袋。雙扉滅菌鍋的使用更加有利于滅菌狀態(tài)的保持。

表3 常見滅菌程序及有效性確認(rèn)Tab.3 Sterilization cycle and effective conf i rmation

2 驗(yàn)證狀態(tài)的維護(hù)

2.1 參數(shù)監(jiān)控

滅菌鍋每次滅菌均應(yīng)記錄并打印滅菌開始時(shí)間、升溫時(shí)間、滅菌溫度維持時(shí)間等具體滅菌工藝參數(shù)?？刂茰缇锲费b載數(shù)量和位置。西方國家已經(jīng)有藥品滅菌通過滅菌參數(shù)放行的先例，而不需要做無菌檢查[5]。

2.2 化學(xué)指示膠帶

在規(guī)定的飽和蒸汽壓力下滅菌條件持續(xù)一定時(shí)間，印在膠帶上的指示顯色劑條紋發(fā)生分解，并與助色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，隨之引起不可逆顏色變化有淺至深，從而間接指示是否滿足滅菌條件。

化學(xué)指示膠帶對滅菌條件（溫度、蒸汽飽和度、持續(xù)時(shí)間）的敏感性均體現(xiàn)在從開始顯色到灰黑-黑-深黑的顯色過程中。對顏色深淺判斷個人主觀因素較多，不容易判斷滅菌條件是否完全滿足。更有研究表明，115℃時(shí)化學(xué)指示膠帶就會開始顯色[6]。化學(xué)指示膠帶只能作為滅菌條件監(jiān)測的輔助手段。

2.3 B-D試驗(yàn)

用于預(yù)真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌器冷空氣排放效果的檢測，冷空氣是造成預(yù)真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌失敗的主要因素之一。對預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌，每日進(jìn)行一次B-D試驗(yàn)。

（1）檢測方法 B-D試驗(yàn)要求做前預(yù)熱、空載監(jiān)測每天一次，將B-D試紙放入標(biāo)準(zhǔn)測試包，中間包好，水平放入滅菌柜內(nèi)滅菌車的前底層，靠近柜門與排氣口底前方（上方）滅菌柜內(nèi)除測試包無任何物品。

（2）結(jié)果判定 經(jīng)134℃，3.5 ～ 4 min后，取出B-D測試紙觀察顏色變化。若變色均勻一致，說明冷空氣排放效果良好，滅菌器可以使用。

2.4 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

參數(shù)監(jiān)測應(yīng)每鍋進(jìn)行，化學(xué)指示膠帶應(yīng)該貼于每個獨(dú)立滅菌包裝上，生物指示劑監(jiān)測應(yīng)每周一次[7]。

3 結(jié)束語

高壓蒸汽滅菌鍋是使用量很大的滅菌設(shè)備。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室由于其特殊性，如何規(guī)范化使用必須引起足夠的重視。藥品檢測時(shí)，可能同時(shí)配制多種滅菌條件的培養(yǎng)基，這就需要多臺滅菌鍋同時(shí)工作，附屬設(shè)施必須足夠使用。藥品檢測完成時(shí)會產(chǎn)生一部分陽性污染物，如何布置滅菌鍋和滅菌程序如何設(shè)計(jì)必須考慮。滅菌有效性一直是滅菌鍋關(guān)注的重點(diǎn)，培養(yǎng)基由于其特殊性除了滅菌有效性之外，功能有沒有受到影響也應(yīng)該得到關(guān)注，最好能和培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)合起來一起做。滅菌鍋在藥品微生物實(shí)驗(yàn)室中使用頻率非常高，如何規(guī)范的進(jìn)行驗(yàn)證狀態(tài)的監(jiān)測是驗(yàn)證狀態(tài)維護(hù)的根本。為了更好地合理使用高壓蒸汽滅菌鍋，操作人員除了安全培訓(xùn)之外，還要學(xué)習(xí)滅菌鍋在藥品檢測中發(fā)揮的作用才能做到規(guī)范化使用。

[1]國家安全生產(chǎn)監(jiān)督管理總局安監(jiān)總局令第80號，特種作業(yè)人員安全技術(shù)培訓(xùn)考核管理規(guī)定[S]，2010.

[2]實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊第三版[M]，世界衛(wèi)生組織，2004.

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局，藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南[M]，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.

[4]刁寧寧，張建國.高溫高壓條件下黑曲霉孢子的失活參數(shù)計(jì)算[J]，微生物學(xué)雜志，2015，4（35）：33-36.

[5]FDA工業(yè)指南-最終濕熱滅菌的人用藥和獸用藥的參數(shù)放行申報(bào)[M]，2010.

[6]鄭會樂，黃成棣，等. 壓力蒸汽滅菌指示膠帶的研制及效能測試[J]，中國醫(yī)療器械雜志，1997，21（1）： 16-19.

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部，WS 310.3-2009醫(yī)院消毒供應(yīng)中心清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)[S]，2009.

Standardizing Use of High pressure steam autoclaves in Microbiology Laboratory

Bao Fangming
（Suzhou Institute for Food and Drug Inspection, Suzhou 215104）

Autoclave is most effectively sterilizing equipment commonly used in placing culture medium and positive contaminants. But it is necessary to strictly conform to the standards in validation of autoclave and the maintenance of its sterilizing function. In order to ensuring the effective use of autoclave, the validations in installation, operation and process are very important. Thus the methods of parameter monitor, chemical monitor and biological monitor should be applied in practice to make effective evaluation.

pharmaceutical microbiology laboratory; high pressure steam; standardization

TQ 052.6

A

2095-817X（2017）01-0045-003

2016-05-30

鮑方名（1982—），男，主管藥師，主要從事藥品微生物檢測及凈化工程檢測。