胡利清，周玉球，吳洪秋

(珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東珠海519001)

肺炎衣原體抗體兩種檢測方法的對(duì)比分析

胡利清，周玉球，吳洪秋

(珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東珠海519001)

目的探討酶聯(lián)免疫法(ELISA)和間接免疫熒光法（IIFA）在肺炎衣原體（CP）感染早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)該院兒科2015年1月至2016年7月疑因CP感染的225例住院患兒采用ELISA和IIFA檢測血清CP－IgM結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，比較兩種方法檢測CP－IgM陽性率的差異。結(jié)果ELISA和IIFA各檢出CP－IgM陽性81例和87例，陽性檢出率分別為36．0%和38．7%，ELISA和IIFA陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。兩法的陽性符合率為94．2%，陰性符合率為96．5%，總符合率為96．9%。同時(shí)采用這兩種方法檢測CP－IgM，則陽性檢出率可達(dá)到39．1%，敏感性明顯高于任一單一方法。結(jié)論IIFA檢測CP－IgM較ELISA敏感，兩者聯(lián)合檢測可以提高CP感染診斷陽性率，酶聯(lián)免疫法ELISA抗體診斷試劑適合在臨床檢測中推廣應(yīng)用。

肺炎衣原體；肺炎衣原體抗體；間接免疫熒光法

肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae，CP)是常見社區(qū)感染的呼吸道病原體之一[1]，起病緩慢，老人與幼兒較成人易感染該病原體[2]，常引起急性呼吸道感染，尤其是咽炎，鼻竇炎，支氣管炎，肺炎，并可誘發(fā)支氣管哮喘急性發(fā)作，臨床常表現(xiàn)為咽痛、咳嗽、咳痰、發(fā)熱等，一般癥狀較輕。但在有基礎(chǔ)疾病的前提下，CP感染不但可以引起非典型肺炎，還可引起神經(jīng)、循環(huán)等肺外其他系統(tǒng)的并發(fā)癥，可引起虹膜炎、肝炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎及結(jié)節(jié)性紅斑等。是艾滋病、惡性腫瘤或白血病等疾病發(fā)生繼發(fā)感染的重要病原體之一。另發(fā)現(xiàn)在一些疾病如惡性腫瘤、腦血管病、腎功能不全、帕金森綜合征、肝硬化及糖尿病患者，均可檢出較高陽性率的肺炎衣原體抗體。肺炎衣原體肺部感染的臨床癥狀及X線表現(xiàn)均無特異性，難以和其他非典型肺炎相區(qū)別，尤其是肺炎支原體肺炎，故確診有賴于實(shí)驗(yàn)室診斷。CP的實(shí)驗(yàn)室檢測方法有很多，包括CP直接涂片和培養(yǎng)法、免疫熒光直接抗原檢測法、補(bǔ)體結(jié)合抗體檢測、核酸擴(kuò)增檢測法和血清檢測法等，本文回顧性分析225例CP肺炎患兒臨床資料，探討酶聯(lián)免疫法(ELISA)和間接免疫熒光法（IIFA）檢測CP抗體在兒童CP感染早期診斷的價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1一般資料選擇2015年1月至2016年7月在本院兒科住院同時(shí)做ELISA和IIFA檢測的患兒225例，其中男121例，女104例，年齡1～9歲，中位年齡3歲。

1．2方法CP－IgM ELISA和IIFA檢測試劑盒分別購自珠海麗珠試劑公司和鄭州安圖生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生產(chǎn)的CX22LKDRFS1型熒光顯微鏡用于IIFA熒光觀察。嚴(yán)格按照檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。ELISA每次測試均設(shè)置空白、陰性和陽性對(duì)照，與待測標(biāo)本同時(shí)檢測。IIFA每次測試均設(shè)置陰性、陽性對(duì)照，與待測標(biāo)本同時(shí)檢測。待檢血清經(jīng)過IgG吸附劑處理后，加在包被有CP抗原的生物玻片上，熒光顯微鏡下觀察內(nèi)部質(zhì)控孔陰性，陰性對(duì)照和陽性對(duì)照出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，以標(biāo)本中McCoy細(xì)胞中的CP出現(xiàn)蘋果綠熒光判斷為陽性，否則為陰性。

1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，兩種檢測方法陽性率的比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1檢測CP－IgM的陽性率采用ELISA和IIFA從上述患兒血清中檢出CP－IgM陽性有81例和87例，陽性率分別為36．0%．和38．7%，IIFA檢測陽性率高于ELISA，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=196．59，P＞0．05）。

2．2 ELISA和IIFA檢測的一致性兩種方法陽性符合率為94．2%（81/87）、陰性符合率為96．5%（138/143）。IIFA檢測呈陽性而ELISA檢測呈陰性有7例，IIFA檢測呈陰性而ELISA檢測呈陽性有1例。同時(shí)采用這兩種方法檢測CP－IgM，則陽性檢出率可達(dá)到39．1%，敏感性明顯高于任一單一方法。見表1。

表1 ELISA與IIFA測定CP-Ig M結(jié)果比較（n）

3 討論

肺炎衣原體(Cp)是一類嚴(yán)格寄生于真核細(xì)胞內(nèi)，具有獨(dú)特發(fā)育周期，并能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物，經(jīng)呼吸道傳播具有高度傳染性。肺炎衣原體無動(dòng)物儲(chǔ)存宿主，感染后潛伏期平均為15～30d左右，肺炎衣原體侵入人體后，主要引起單核巨噬細(xì)胞反應(yīng)，肺泡巨噬細(xì)胞作為病原體貯存和傳播的載體，造成其在宿主體內(nèi)的持續(xù)感染。有研究表明肺炎衣原體在機(jī)體內(nèi)持續(xù)感染可長達(dá)9年，甚至在應(yīng)用抗生素治療期間仍存在持續(xù)感染[3]。CP感染是5歲以上兒童及成人常見呼吸系統(tǒng)感染性疾病的病原體，主要由上呼吸道和肺部感染引起成人及青少年的非典型肺炎，亦可引起咽炎、喉炎、支氣管炎，以及百日咳樣疾病與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎[4，5]等。據(jù)統(tǒng)計(jì)是引起感染性性肺炎的第三位主要病原體[6]。在呼吸系統(tǒng)感染的患者中檢測血清肺炎衣原體抗體陽性率為22．8%～55．8%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他國家的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)[7]。研究表明，隨著患者年齡增長CP的感染率也會(huì)隨之升高，老年人最高可達(dá)到75%[8]。CP感染分布呈雙峰型，臨床上小兒患者感染后癥狀和體征較輕，而老年感染患者合并慢性阻塞性肺疾病，心、腦、腎等神經(jīng)循環(huán)系統(tǒng)疾病，代謝病等基礎(chǔ)疾病時(shí)，臨床癥狀表現(xiàn)則比較嚴(yán)重。有研究表明．肺炎衣原體感染還與慢性阻塞性肺疾病(COPD)[9]，肺氣腫[10]以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)[11，12]。

近些年來，CP感染的發(fā)病率逐漸增高，其感染初期癥狀不典型，臨床上常規(guī)用藥治療效果欠佳，因此，早期診斷、早期治療對(duì)減少患者并發(fā)癥、降低病人住院費(fèi)用有重要意義。目前實(shí)驗(yàn)室對(duì)肺炎衣原體的檢測方法主要有三種，一種是病原學(xué)檢查，是確診本病的可靠方法，但臨床診斷不常用，如直接涂片后用Giemsa或直接培養(yǎng)法檢測出肺炎衣原體包涵體及原體。二是免疫學(xué)檢查以熒光或酶標(biāo)記的特異性單克隆抗體直接檢測標(biāo)本中肺炎衣原體抗原或抗體，主要包括ELISA法和間接免疫熒光法。三是PCR法檢測肺炎衣原體DNA，其敏感性和特異性更高，且可和其他種衣原體區(qū)分，但這種方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境有特殊要求，實(shí)驗(yàn)室還必須配備有高端設(shè)備和高級(jí)技術(shù)人員，且PCR方法假陽性率難以控制，因此一般實(shí)驗(yàn)室難以開展[13]。而通過上面的試驗(yàn)研究和分析表明，ELISA法適用于檢測CP感染患者血清中特異性抗體的變化，其敏感度好，特異性強(qiáng)，方法操作簡便，價(jià)格低廉且與間接免疫熒光法IIFA檢測結(jié)果比較，陽性率無顯著差異(P＞0．05)，適合臨床大批量篩查和流行病學(xué)調(diào)查，在普通實(shí)驗(yàn)室均可開展[14]。IIFA靈敏度、特異性高，但也存在一定的局限性，如需要非常有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員進(jìn)行試驗(yàn)和分析、待測標(biāo)本保存時(shí)間有限、試劑有效期較短、需要熒光顯微鏡且試劑價(jià)格不菲等。CP檢測有助于指導(dǎo)臨床醫(yī)師判斷患者的病情發(fā)展程度，為臨床制定有效的診療方案提供科學(xué)依據(jù)。

[1]Eisolh AA，Niederman MS，Drinka P．Nursing homeacquiredpneumonia：a review of risk factors and therapeutic approaches[J]．Curr Med Res Opin，2010，26(12)：2707－2714．

[2]謝紅梅，胡必杰，馬艷，等．1647例呼吸道感染病原體的IgM抗體檢測結(jié)果分析[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22(12)：2696－2698．

[3]Darid A．Leiby Ph．D，趙風(fēng)錦，趙大為，等．肺炎衣原體：能加入輸血傳播病原體的目錄上嗎?[J]．國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)，2003，26(5)：636－639．

[4]Gaston JS，Curry AJ，Portig I，et al．Immume responses to Chlamydia antigens in athemsclemsis[J]．Herz，2000，25(2)：73－78．

[5]Titan A，Tio RA，Ossewaarde JM，et al．Coronary angioplasty induces rise in c Chlamydia pneumoniae－specific antibodies[J]．J Clin Miorobiol，1999，37(4)：1013－1017．

[6]于紅文．小兒肺炎衣原體感染22例分析[J]．中國誤診學(xué)雜志，2009，9(7)：1706．

[7]劉志廣，齊海宇，鄭曉燕，等．發(fā)熱門診呼吸道感染患者中的肺炎衣原體感染調(diào)查[J]．中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2015，30(5)：418－422．

[8]施毅．肺炎衣原體—一種新的呼吸系統(tǒng)致病原體[J]．中華結(jié)核和呼吸雜志，1991，14(4)：239－241．

[9]Schder H．Acute exacerbations in chronic obstructive pulmonary disease(COPD)－microbial patterns and risk factor[J]．Monaldi Arch Chest Dis，2000，55(5)：415－419．

[10]Theegarten D，Mngilevski G，Anhenn O，et al．The role of Chlamydia in the pathogenesis of pulmonary emphysema．Electron microscopy and immunofluorescence reveal corresponding findings as in atherosdemsis[J]．Virchows Arch，2000，437(2)：190－193．

[11]Hannu T，Puolakkainen M，Leirisalo－Repo M．Chlmnydia pneumoniae as a triggering infection in reactive arthritis[J]．Rheuma－tology(Oxford)，1999，38(5)：411-414.

[12]Ferrer Marcelles A，Moraga-Llop FA，Andreu Domingo A，et al．Ureaplasma urealyticum and pertussis-like syndrmn[J].An Esp Rediatr，2000，52(3)：238-241.

[13]代繼紅．肺炎農(nóng)原體肺炎的發(fā)病機(jī)制及實(shí)驗(yàn)室診斷[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2009，16(24)：1220-1222．

[14]Kumar S，Hammerschlag MR．Acute respiratory infection due to Chlamydia pneumoniae：current status ofdiagnostic methods[J].Clin Infect Dis，2007，44(4)：568-576.

R446．62，R374+．3

A

1674－1129(2017)02－0269－02

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．045

2016-10-20；

2017-03-10)