張立強(qiáng)+李媛+周偉東+鄧平+丁桂珍+李勤+艾桃山

摘要：為了解車(chē)輪蟲(chóng)（Trichodina spp.）豐度與水環(huán)境因子之間的相關(guān)性，對(duì)養(yǎng)殖水體黃顙魚(yú)腮部寄生的車(chē)輪蟲(chóng)豐度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，同時(shí)對(duì)水體的溫度、總磷、活性磷、總氮、亞硝酸鹽、氨氮進(jìn)行了測(cè)定。相關(guān)性分析表明，黃顙魚(yú)腮部寄生車(chē)輪蟲(chóng)豐度與總磷濃度、活性磷濃度、總氮濃度顯著負(fù)相關(guān)；與亞硝酸鹽濃度顯著正相關(guān)；與溫度（24.0～30.5 ℃）、氨氮濃度無(wú)顯著相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：車(chē)輪蟲(chóng)（Trichodina spp.）；感染豐度；總磷；總氮；亞硝酸鹽；氨氮

中圖分類(lèi)號(hào)：Q959.11 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）06-1103-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.06.028

Abstrat： In order to reveal the trichodinid（Ciliophora：Peritrichida） abundance and its relationship to water quality parameters，the abundance of Trichodina spp. on the gill of yellow catfish was investigated in aquaculture water. Meanwhile，the temperature，total phosphorus，available phosphorus，total nitrogen，nitrite，and ammonia nitrogen data were got. Results indicated that Trichodina spp. abundance was negatively correlated with the concertration of total phosphorus，available phosphorus and total nitrogen. Positively correlated with the concertration of nitrite. No significant correlation with temperature（between 24.0～30.5 ℃） and ammonia nitrogen.

Key words：Trichodina spp.；abundance；total phosphorus；total nitrogen；nitrite；ammonia nitrogen

車(chē)輪蟲(chóng)（Trichodina spp.）是一大類(lèi)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物危害極大、可自由運(yùn)動(dòng)的原生動(dòng)物，隸屬于寡膜綱（Oligohymeno）緣毛目（Peritrichia）游泳亞目（Mobilina）車(chē)輪蟲(chóng)科（Trichodinidae）車(chē)輪蟲(chóng)屬（Trichidina），該蟲(chóng)具有附著盤(pán)結(jié)構(gòu)（圖1）。車(chē)輪蟲(chóng)廣泛寄生于淡水魚(yú)類(lèi)、海水魚(yú)類(lèi)、貝類(lèi)、甲殼類(lèi)、兩棲類(lèi)的鰓、皮膚、鰭條、膀胱、輸尿管、生殖系統(tǒng)等部位，可導(dǎo)致嚴(yán)重的組織病變[1-8]，且車(chē)輪蟲(chóng)的感染一年四季都存在，只是感染程度及造成的危害不同而已。隨著中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，集約化、規(guī)模化等高密度的養(yǎng)殖模式成為主要的養(yǎng)殖模式，加上水體的流動(dòng)性，病原的相互隔離很難掌控，車(chē)輪蟲(chóng)病每年都會(huì)大規(guī)模暴發(fā)。車(chē)輪蟲(chóng)的感染除了直接導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物的死亡之外，還會(huì)間接引起細(xì)菌和病毒的繼發(fā)感染，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失并制約著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[9-16]。

有關(guān)車(chē)輪蟲(chóng)的研究主要集中于車(chē)輪蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)、藥物防治及生態(tài)應(yīng)用方面[6，17-21]，在生產(chǎn)實(shí)踐中車(chē)輪蟲(chóng)病害的發(fā)生與養(yǎng)殖水環(huán)境因子關(guān)聯(lián)性研究較少。為了揭示車(chē)輪蟲(chóng)與環(huán)境因子之間的關(guān)系，研究了黃顙魚(yú)養(yǎng)殖水體車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度與水溫、總磷、活性磷、總氮、亞硝酸鹽、氨氮之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 采樣點(diǎn)

武漢市水產(chǎn)科學(xué)研究所山南養(yǎng)殖池、江夏黃顙魚(yú)養(yǎng)殖戶(hù)、江夏山坡黃顙魚(yú)養(yǎng)殖基地。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

水樣采集：7～9月每周采樣兩次，時(shí)間為上午的9：00～10：00，分別于塘四角及中央用采水器各采5 L水，取混合樣。理化因子的取樣測(cè)定與浮游生物樣品采集同步進(jìn)行，其中，溫度現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定，總磷、總氮、NH4-N、NO2-N、和PO4-P等水質(zhì)指標(biāo)參照水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法進(jìn)行[22]。

車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度的統(tǒng)計(jì)：現(xiàn)場(chǎng)捕獲黃顙魚(yú)取第二片鰓組織，用200 μL無(wú)菌水反復(fù)沖洗鰓組織，涂片于顯微鏡下統(tǒng)計(jì)車(chē)輪蟲(chóng)數(shù)量。

1.3 數(shù)據(jù)分析

通過(guò)GraphPad Prism 5軟件分析環(huán)境因子與車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度之間的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 車(chē)輪蟲(chóng)數(shù)量及水環(huán)境因子測(cè)定

試驗(yàn)共采集數(shù)據(jù)30次，分別測(cè)定了總磷、總氮、NH4-N、NO2-N、和PO4-P的濃度，同時(shí)統(tǒng)計(jì)了第二片鰓組織上的車(chē)輪蟲(chóng)數(shù)量，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與溫度相關(guān)性分析

數(shù)據(jù)測(cè)定時(shí)間為7～9月，水溫在24.0～30.5 ℃間波動(dòng)，即在平均溫度27.25 ℃上、下波動(dòng)11.8%。第二鰓片組織上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)之間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%（圖1）。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與溫度無(wú)顯著相關(guān)性（P=0.682 0）。

2.3 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與總磷濃度相關(guān)性分析

總磷含量在0.017～0.719 mg/L間波動(dòng)，即在平均濃度0.368 mg/L上、下波動(dòng)95.3%。第二鰓片上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與總磷濃度顯著負(fù)相關(guān)（P=0.000 3）。

2.4 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與活性磷濃度相關(guān)性分析

活性磷含量在0.013～0.265 mg/L間波動(dòng)，即在平均濃度0.139 mg/L上、下波動(dòng)90.6%。第二鰓片上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)之間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與活性磷濃度顯著負(fù)相關(guān)（P=0.007 5）。

2.5 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與總氮濃度相關(guān)性分析

總氮含量在0.171～1.946 mg/L間波動(dòng)，即在平均濃度1.059 mg/L上、下波動(dòng)83.8%。第二鰓片上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與總氮的濃度顯著負(fù)相關(guān)（P=0.026 6）。

2.6 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與亞硝酸鹽濃度相關(guān)性分析

亞硝酸鹽含量在0.008～0.071 mg/L間波動(dòng)，即在平均濃度0.040 mg/L上、下波動(dòng)79.7%。第二鰓片上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)之間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與亞硝酸鹽濃度顯著正相關(guān)（P=0.002 1）。

2.7 車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與氨氮濃度相關(guān)性分析

氨氮含量在0.021～0.880 mg/L之間波動(dòng)，即在平均濃度0.451 mg/L上、下波動(dòng)95.3%。第二鰓片上的車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在20～420個(gè)之間波動(dòng)，即在平均感染豐度220個(gè)上、下波動(dòng)90.9%。相關(guān)性分析結(jié)果表明，車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與氨氮濃度無(wú)顯著相關(guān)性（P=0.908 8）。

3 小結(jié)與討論

唐發(fā)輝[23]研究表明車(chē)輪蟲(chóng)在10～30 ℃之間，車(chē)輪蟲(chóng)的感染率隨著溫度的升高而升高，Palm等[24]研究顯示車(chē)輪蟲(chóng)對(duì)川鰈的感染率隨溫度的下降反而上升，本研究發(fā)現(xiàn)在24.0～30.5 ℃之間沒(méi)有直接相關(guān)性，這可能與溫度變化范圍小有關(guān)，同時(shí)由于本研究調(diào)查的水體為養(yǎng)殖水體，存在其他化學(xué)指標(biāo)濃度較高的因素，間接導(dǎo)致車(chē)輪蟲(chóng)對(duì)溫度的變化不敏感。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度與水體總磷、總氮、活性磷的濃度呈負(fù)相關(guān)性，總磷、總氮、活性磷指標(biāo)反映的是水體的富營(yíng)養(yǎng)化水平。Marcogliese等[19]研究表明魚(yú)體感染車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度在污染物濃度為1%時(shí)明顯上升，但是沒(méi)有給出污染物的各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)。本研究測(cè)定結(jié)果表明，總磷含量在0.017～0.719 mg/L間波動(dòng)，總氮含量在0.171～1.946 mg/L間波動(dòng)，活性磷含量在0.013～0.265 mg/L間波動(dòng)，已達(dá)富營(yíng)養(yǎng)水平，在該水體中車(chē)輪蟲(chóng)的食物微生物及有機(jī)碎屑含量極為豐富，車(chē)輪蟲(chóng)無(wú)需附著于魚(yú)體攝取食物，這可能是導(dǎo)致車(chē)輪蟲(chóng)感染豐度下降的主要原因。亞硝酸鹽是一種對(duì)黃顙魚(yú)有毒有害的化學(xué)物質(zhì)，高含量的亞硝酸會(huì)抑制黃顙魚(yú)的生理指標(biāo)，導(dǎo)致黃顙魚(yú)的免疫力下降，本研究測(cè)定結(jié)果表明，亞硝酸鹽濃度在0.008～0.071 mg/L間波動(dòng)，在該濃度下由于黃顙魚(yú)體質(zhì)下降，使得車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度上升。這與Ogut等[25]研究結(jié)果是一致的，同樣高含量的氨氮濃度也會(huì)抑制黃顙魚(yú)的生理指標(biāo)，但是在本研究中發(fā)現(xiàn)氨氮濃度與車(chē)輪蟲(chóng)的感染豐度沒(méi)有直接的相關(guān)性，可能是高濃度的氨氮含量同時(shí)對(duì)車(chē)輪蟲(chóng)的數(shù)量造成了一定的抑制效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] VALLADAO G M，GALLANI S U，DE P？魣DUA S B，et al. Trichodina heterodentata（Ciliophora） infestation on Prochilodus lineatus larvae：a host-parasite relationship study[J].Parasitology，2014，141（5）：662-669.

[2] MITRA A K，BANDYOPADHYAY P K，GONG Y. Studies on Trichodinid and Chilodonellid Ciliophorans （Protozoa：Ciliophora） in the Indian freshwater and estuarine fishes with description of Trichodinella sunderbanensis sp. nov. and Trichodina nandusi sp. nov[J].Parasitology Research，2013，112（3）：1077-1085.

[3] HARRIS D J，SPIGONARDI M P，MAIA，J P M C，et al. （2013） Molecular survey of parasites in introduced Pelophylax perezi （Ranidae）water frogs in the Azores[J].Acta Parasitologica，2015， 58（4）：607-611.

[4] COLLYMORE C，WHITE J R，LIEGGI C. Trichodina xenopodus，a ciliated protozoan，in a laboratory-maintained Xenopus laevis[J].Comparative Medicine，2013，63（4）：310-312.

[5] DIAS R J，F(xiàn)ERNANDES N M，SARTINI B. Occurrence of Trichodina heterodentata（Ciliophora：Trichodinidae） infesting tadpoles of Rhinella pombali（Anura：Bufonidae） in the Neotropical area[J].Parasitology International，2009，58（4）：471-474.

[6] 龔迎春，余育和.車(chē)輪蟲(chóng)分類(lèi)與系統(tǒng)發(fā)育研究進(jìn)展[J].動(dòng)物學(xué)研究，2007，28（2）：217-224.

[7] XU K，SONG W. Two trichodinid ectoparasites from marine molluscs in the Yellow Sea，off China，with the description of Trichodina caecellae n. sp.（Protozoa：Ciliophora： Peritrichia）[J]. Systematic Parasitology，2008，69（1）：1-11.

[8] VALLADAO G M，GIANNECCHINI L G，MARTINS M L，et al. Trichodina modesta： An exotic ciliate in the Neotropical region parasitizing an unusual host[J].Rev Bras Parasitol Vet，2015， 24（2）：162-167.

[9] 張洪玉，夏 磊，李 江.天津?qū)氎妗V東博羅兩地車(chē)輪蟲(chóng)病流行性調(diào)查[J].中國(guó)水產(chǎn)，2013（12）：71-72.

[10] 王德芬，周曉華，朱健祥.5月全國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖病情預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)[J].中國(guó)水產(chǎn)，2015（5）：48-53.

[11] 施海濤，王明東.草魚(yú)夏花、仔口魚(yú)種小車(chē)輪蟲(chóng)病并發(fā)爛鰓病防治技術(shù)[J].漁業(yè)致富指南，2011（10）：52-53.

[12] XU K，SONG W，WARREN A， et al. Trichodinid ectoparasites （Ciliphora：Peritrichida） of some marine fishes from coastal regions of the Yellow Sea and Bohai Sea[J].Systematic Parasitolog，2001，50（1）：69-79.

[13] KHAN R A. Mortality in Atlantic salmon （Salmo salar） associated with trichodinid ciliates[J].Journal of Wildlife Diseases， 1991，27（1）：153-155.

[14] 鄧志武.棘胸蛙蝌蚪患爛鰓病、腸炎病和車(chē)輪蟲(chóng)病并發(fā)的診治技術(shù)[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，2013，34（6）：48.

[15] MARCOTEGUI P S，MARTORELLI，S R. Trichodinids （Ciliophora：Peritrichida） of Mugil platanus （Mugiliformes：Mugilidae） and Micropogonias furnieri（Perciformes：Sciaenidae） from Samborombon Bay，Argentina，with the description of a new species[J].Folia Parasitologica，2009，56（56）：167-72.

[16] COLORNI A，DIAMANT A. Hyperparasitism of trichodinid ciliates on monogenean gill flukes of two marine fish[J].Diseases of Aquatic Organisms，2005，65（2）：177-180.

[17] TANG F H，ZHAO Y J，WARREN A. Phylogenetic analyses of Trichodinids （Ciliophora，Oligohymenophora） inferred from 18S rRNA gene sequence data[J].Current Microbiology，2013，66（3）：306-313.

[18] 張大中，黃愛(ài)華.異育銀鯽“中科3號(hào)”車(chē)輪蟲(chóng)病的防治方法及誤區(qū)[J].科學(xué)養(yǎng)魚(yú)，2012（3）：60.

[19] MARCOGLIESE D J，PULKKINEN K，VALTONEN E T. Trichodinid （Ciliophora：Trichodinidae） Infections in Perch（Perca fluviatilis） experimentally exposed to pulp and paper mill effluents[J].Arch Environ Contam Toxicol，2011，62（4）：650-656.

[20] 田海軍，劉彥鵬.苦參提取物對(duì)草魚(yú)車(chē)輪蟲(chóng)病的防治研究[J]. 江西水產(chǎn)科技，2011（2）：42-44.

[21] 任撐住，李 進(jìn)，姜 蘭，等.絡(luò)合銅對(duì)藻類(lèi)、車(chē)輪蟲(chóng)的殺滅試驗(yàn)及對(duì)鱖魚(yú)的安全性試驗(yàn)[J].中國(guó)獸藥雜志，2004，38（9）：14-16.

[22] 國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法編委會(huì).水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法[M].第四版.北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2002.

[23] 唐發(fā)輝.重慶地區(qū)鯽魚(yú)共棲車(chē)輪蟲(chóng)研究[D].重慶：重慶師范大學(xué)，2005.

[24] PALM H W，DOBBERSTEIN R C. Occurrence of trichodinid ciliates（Peritricha：Urceolariidae） in the Kiel Fjord，Baltic Sea，and its possible use as a biological indicator[J].Parasitology Research，1999，85（8）：726-732.

[25] OGUT H，PALM H W. Seasonal dynamics of Trichodina spp. on whiting （Merlangius merlangus）in relation to organic pollution on the eastern Black Sea coast of Turkey[J].Parasitology Research，2005，96（3）：149-153.