何英愛++++++姚葉林

[摘要]目的 探討金標快速檢測板法（GIGA法）檢測乙型肝炎病毒血清標志物五項的結(jié)果準確性。方法 選取2016年3月1～31日于我院產(chǎn)科門診進行“母嬰篩查”的患者357例，其待測血清標本同時采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）和GIGA進行檢測，對兩種方法檢測結(jié)果的一致性進行方法學(xué)分析。結(jié)果 357例血清標本中，286例GIGA法與ELISA法5項結(jié)果完全相符，總符合率達80.11%，71例結(jié)果不完全一致。采用ELISA法檢測，HBsAg陽性結(jié)果的標本36例中，GIGA法有1例患者沒有檢出。結(jié)論 乙肝五項血清標志物的結(jié)果GIGA法比ELISA法準確性稍低，但GIGA法操作簡便、快速，易于觀察結(jié)果，且GIGA法中HBsAg檢測結(jié)果與ELISA法基本一致，適用于急診手術(shù)前以及獻血前的快速篩查。

[關(guān)鍵詞]乙型肝炎病毒；血清標志物；酶聯(lián)免疫吸附試驗；金標快速檢測板

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）03（c）-0135-04

[Abstract]Objective To explore the GIGA method detect hepatitis B virus serum accuracy of the results of the five makers.Methods 357 patients joined the "maternal and infant screening" in the Obstetrics Clinic of our hospital from March 1st，2016 to March 31，2016 were selected，the serum specimen was tested by ELISA method and GIGA method at the same time，the consistency of test results of the two methods were analyzed.Results In 357 cases of serum specimens，286 cases of GIGA method were completely accorded with ELISA method five items，the total consistent rate was 80.11%.But 71 samples were not completely consistent.36 cases of HBsAg positive results of specimens with ELISA method，one patient was not been detected with GIGA method.Conclusion The accuracy of five serum marker of hepatitis B virus GIGA method is slightly lower than ELISA method ，but GIGA method is simple，fast and easy observation，and GIGA method of HBsAg detection results are basically identical with ELISA method，it is suitable for rapid screening before emergency surgery and blood donation.

[Key words]HBV；Serum markers；ELISA；GIGA

我國是乙型肝炎病毒感染率較高的國家之一，眾多學(xué)者[1-6]報道我國人口HBsAg陽性率為9.8%～15.28%。目前，臨床多利用HBsAg、HBsAb以及HBeAg等乙肝五項對乙型肝炎作出臨床診斷，這幾種免疫學(xué)標志物的檢測方法有多種，常用的有酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（CLIA）和金標快速檢測板法（GIGA）[7]。ELISA用于乙肝五項的測定，其靈敏度相對偏高，且有較高的特異性，已被廣泛應(yīng)用于臨床檢驗。GIGA方法操作比較簡便，耗時短，無需利用其他儀器。對于急診或者是人群篩查，尤為適用[8]。因此，本研究對在我院進行篩查的357例血清標本使用ELISA法及GIGA法同時進行檢測，比較分析兩種方法的檢測結(jié)果，探討臨床標本使用GIGA法檢測乙肝五項的可靠性，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月1～31日于我院產(chǎn)科門診行“母嬰篩查”的患者357例，研究方案經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，患者知情同意并簽署了知情同意書。

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑 ELISA法試劑盒，均由中山生物工程有限公司提供，對乙型肝炎病毒血清標志物五項進行檢測；質(zhì)控品，源自廣東省臨床檢驗中心。GIGA法使用英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司乙肝五項檢查卡。兩種方法試劑均按說明書要求保存，使用前從冰箱取出，恢復(fù)至室溫，均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2儀器 科華生物ST-360全自動酶標儀，全自動快速立式洗板機。

1.3方法

所有患者均在空腹狀態(tài)下抽取靜脈血，4000 r/min離心5 min，將分離的血清保存待檢，溶血標本要求重抽標本。

1.3.1 ELISA法 由專人根據(jù)試劑盒里面的說明進行操作。分別對HBsAg、HBsAb以及HBeAg樣本相應(yīng)的D（450 nm）值進行測定計算；若S/CO≥陰性對照孔×2.1，表明結(jié)果為陽性；相反，則為陰性；對HBeAb、HBcAb樣本相應(yīng)的D（450 nm）值進行測定，若S/CO≥陰性對照孔均值×0.5，表明結(jié)果為陰性；相反，則表明結(jié)果為陽性。

1.3.2 GIGA法 根據(jù)試劑盒標注的說明進行規(guī)范操作。測試卡，均選擇膠體金免疫技術(shù)：于加樣區(qū)中摻加樣品，15 min后對結(jié)果進行查看，若>30 min，表明結(jié)果無效。質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)紫紅色條帶，表明此測試板有效，層析過程符合正常標準，且標本量足夠；若質(zhì)控區(qū)（C）無明顯條帶出現(xiàn)，原因可能是此測試板無效或失效，標本量不足，或?qū)游鲞^程不符合正常標準，應(yīng)棄用此無效測試板，并使用新的測試板重新測試。HBsAg、HBsAb、HBeAg檢測試紙區(qū)中，測試區(qū)（T）若出現(xiàn)紫紅色條帶，則為陽性；若無紫紅色條帶，則為陰性。HBeAb以及HBcAb試紙區(qū)，若測試區(qū)（T）未見紫紅色條帶，表明結(jié)果為陽性；若出現(xiàn)紫紅色條帶，則為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1乙肝五項GIGA法和ELISA法檢測結(jié)果

357例通過GIGA法、ELISA法分別對乙肝五項同時進行檢測，有286例乙肝五項的結(jié)果完全符合，總符合率達80.11%。71例結(jié)果不完全相符。按模式的慣性順序：HBsAg為1，HBsAb為2，HBeAg為3、HBeAb為4，而HBcAb為5，依次對陽性結(jié)果作出判定。兩種檢測方法檢查的乙肝五項結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2乙肝五項各項指標GIGA法與ELISA法檢測結(jié)果比較

對HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五項的檢測結(jié)果分別進行單項比較，ELISA法檢測為陰性的標本，GIGA法基本為陰性，陰性符合率除HBsAb外，其余4項均在90.00%以上。在陽性符合率方面，HBcAb表現(xiàn)差點，符合率僅為64.56%，說明有部分陽性標本會漏檢（表2）。

3討論

比較分析的357例標本中，286例標本兩方法檢測五項結(jié)果完全符合，符合率達80.11%，分析陽性結(jié)果模式比較，發(fā)現(xiàn)兩方法結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），可能是由于兩種方法檢測原理的差異。ELISA法結(jié)合了酶聯(lián)免疫吸附原理，借助酶催化底物所發(fā)生的生物放大效果，使抗原抗體反應(yīng)有更強的靈敏度，其特異性相對突出，有不錯的重復(fù)性。而GIGA法則是采用膠體GIGA記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)，膠體金是氯酸金在還原劑作用下，聚合成大小為1～100 nm的金顆粒所形成的疏水膠溶液，抗原或者是抗體蛋白，在膠體金顆粒成功吸附的狀態(tài)下，便可產(chǎn)生GIGA抗原或者是抗體（也就是免疫金）。膠體金若要顯色，必定需有濃度高的標記物，而且金顆粒要達到足夠的直徑，其靈敏度才能合格，從而導(dǎo)致其檢測靈敏度受到一定限制[9]。有研究表明[10]，GIGA法檢測HBsAg的靈敏度為1 ng/ml，而ELISA法檢測的靈敏度明顯高于GIGA法，為0.5 ng/ml。分析本次研究結(jié)果可知，兩方法檢測10例大三陽（1，3，5）結(jié)果完全一致，18例小三陽（1，4，5）結(jié)果GIGA法有2例未檢出，其中1例GIGA法未檢出HBsAg。此外，36例HBsAg陽性標本中，GIGA法僅此1例未檢出。可能原因為標本中HBsAg濃度較低，導(dǎo)致GIGA法漏檢。

分析本次研究結(jié)果后發(fā)現(xiàn)，HBsAb陰性符合率最低，GIGA法與ELISA法相比陰性符合率只有77.90%。在以往標本檢測中發(fā)現(xiàn)，GIGA法檢測HBsAb敏感性明顯低于ELISA法，對于ELISA法檢測顯色淺的標本，使用GIGA法檢測常未能在判定結(jié)果的限定時間內(nèi)檢出，或是測試區(qū)條帶顯色過淺，肉眼難以觀察。故對于ELISA法檢測HBsAb顯色淺的標本，不宜用GIGA法復(fù)檢，可使用ELISA法重新檢測，或直接用化學(xué)發(fā)光法復(fù)核。有研究分析表明[11]，ELISA中用雙抗原夾心法和雙抗體夾心法檢測進行檢測時，采用二步法能有效降低“鉤狀效應(yīng)”的出現(xiàn)，提高陽性率。同時也可選擇有很高的靈敏度、線性范圍相對寬的酶免疫分析技術(shù)（CLEIA）或者是電化學(xué)發(fā)光分析（ECLIA）對其進行復(fù)查。HBcAb的陽性符合率也較低，才64.56%，GIGA法檢出率較低可能是由于HBcAb的檢測使用的是競爭抑制法，標本陽性時測試區(qū)（T）無條帶出現(xiàn)，若標本中HBcAb濃度低，測試區(qū)（T）可能會出現(xiàn)與質(zhì)控區(qū)（C）條帶相比顏色稍淺的條帶，肉眼觀察難以分辨。也可能是直接用原血清進行檢測導(dǎo)致的，將來用1∶30的稀釋血清進一步進行研究，再另行報道。HBeAb陰性符合率雖較高，達到97.00%，但陽性符合率才70.59%，造成GIGA法有10例陽性標本漏檢，可能原因與HBcAb相似，兩者同樣使用競爭抑制法。使用ELISA法檢測時，用酶標儀比色判定結(jié)果，相對GIGA法更加準確，漏檢率較低。但有2例標本的HBcAb GIGA法檢測為陽性而ELISA法為陰性，由于ELISA法檢測HBcAb時，需要對樣品進行稀釋，反應(yīng)孔中加入約50 μl生理鹽水和5 μl待測血清樣品，標本量加入不宜過多，若標本中HBcAb濃度低，經(jīng)稀釋后檢測可能會出現(xiàn)假陰性結(jié)果。觀察表2其他項目GIGA法與ELISA法檢測結(jié)果基本相符，HBsAg陰性符合率為99.69%，陽性符合率為97.22%，與學(xué)者劉珊等[14-15]的研究一致。HBeAg陰性陽性符合率均為100.00%，符合臨床檢驗的需求。

乙肝是我國常見的傳染病，乙肝五項的檢測對于預(yù)防乙肝的傳染有十分重要的作用。在現(xiàn)階段臨床實驗室中，ELISA法能很好地適應(yīng)檢測的要求，檢測靈敏度高、特異性強、準確性好。相較于Q-PCR技術(shù)，ELISA法對乙肝五項進行檢查，其準確性略高但未見太大差異。有研究也提到：對于隱匿性HBV感染，ELISA法相較于熒光定量PCR，在敏感性上略差[12]。不過，ELISA法改進和復(fù)檢，有助于提升檢出的陽性率。在臨床實踐中，對于ELISA法檢測懷疑假陰性標本，復(fù)檢仍然陰性者，可通過化學(xué)發(fā)光法或電化學(xué)發(fā)光法進行定量分析，或進行HBV-DNA分析，判斷結(jié)果。本次研究中，ELISA法陽性檢出率明顯高于GIGA法，漏檢率低。在以往實踐中，ELISA法檢測乙肝五項準確性較高，假陰性結(jié)果較少，檢測結(jié)果較為可靠。

近些年，GIGA法有比較顯著的發(fā)展。作為操作簡單的檢測技術(shù)，GIGA法無需提供完善的實驗條件，對操作人員也沒有嚴格的要求，無需其他獨特的儀器設(shè)施，試劑相對穩(wěn)定，在臨床檢驗上使用廣泛。本實驗得知：GIGA法在對乙肝五項進行檢測時，其準確性以及靈敏度相較于ELISA法均有一定的劣勢。針對HBsAb、HBcAb兩項指標，ELISA法遠優(yōu)于GIGA法，且GIGA法成本較ELISA法高。結(jié)合實驗過程和實驗結(jié)果分析，GIGA法基本適用于急診手術(shù)前少量標本的檢測，快速得出初步篩查結(jié)果，對醫(yī)護人員因職業(yè)暴露感染HBV進行預(yù)防，但不能以初篩結(jié)果作為診斷，需要用ELISA法或其他靈敏度及準確性更好的方法進行復(fù)查確證。若要檢測批量的標本，或是要求準確性較高的檢測，使用ELISA法較GIGA法好。

GIGA法還常用于獻血前對進行HBsAg的快速篩查。HBsAg檢測是在獻血過程中預(yù)防HBV的一線屏障，高敏感性的篩選實驗對于減少輸血相關(guān)的HBV感染的風(fēng)險非常重要。本次實驗中，GIGA法檢測HBsAg的符合率高，與ELISA法相比較敏感性相差不遠，漏檢率低，能滿足獻血前的HBsAg快速篩查的要求。使用GIGA法對獻血者進行快速篩查除了能減少獻血前的HBV傳染風(fēng)險，還利于乙肝的早期發(fā)現(xiàn)診斷，檢測的陽性結(jié)果可以在采血現(xiàn)場向獻血者反饋 ，從而讓獻血者可以在當?shù)蒯t(yī)療機構(gòu)作出診治[13]。

對乙肝五項進行檢測時，GIGA法的準確性略低于ELISA法，存在一定的漏檢率，但GIGA法在操作步驟、實驗儀器、檢測時間方面較ELISA法簡單快速，用作初步篩查檢測結(jié)果較為可靠。GIGA法適用于急診標本以及獻血前的快速篩查，也可用于普通健康體檢或流行病學(xué)的調(diào)查，對保護醫(yī)護人員的安全以及預(yù)防HBV的感染有重要的作用。

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