何嬌嬌王 萍,馮 建婁宇棟黨 慧鄧 蓉

(1. 浙江海洋大學浙江省海洋養(yǎng)殖裝備與工程技術重點室, 舟山 316000; 2. 寧波大學海洋學院, 寧波 315211)

玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚生長、血清生化指標及肝臟組織學的影響

何嬌嬌1王 萍1,2馮 建1婁宇棟1黨 慧1鄧 蓉1

(1. 浙江海洋大學浙江省海洋養(yǎng)殖裝備與工程技術重點室, 舟山 316000; 2. 寧波大學海洋學院, 寧波 315211)

為探討玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚(Larimichthys crocea) 幼魚生長、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響, 進行了為期56d的養(yǎng)殖試驗, 探索玉米蛋白粉替代大黃魚幼魚飼料魚粉的適當比例。以初始體重為(10.49±0.03) g的大黃魚幼魚為研究對象, 用玉米蛋白粉替代基礎飼料(含40%魚粉)0、15%、30%、45%、60%和75%的魚粉來配制6種等氮(粗蛋白含量45%)等脂(粗脂肪含量10%)的實驗飼料, 分別標記為C0、C15、C30、C45、C60、C75組。除C0以外的替代組分別添加了適量的晶體氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)。結果表明,玉米蛋白粉替代水平對大黃魚幼魚存活率、試驗魚特定生長率、飼料系數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)。C45和C60組肌肉粗蛋白含量顯著高于C0組(P＜0.05), 肌肉粗脂肪含量C45組顯著高于C0、C15和C75組 (P＜0.05), C45、C60和C75組肌肉水分顯著低于C0組(P＜0.05), 全魚粗蛋白、粗脂肪、水分含量無顯著差異(P＞0.05); 灰分含量有上升趨勢, C75組顯著高于其他組(P＜0.05)。各替代組的血清白蛋白、白球比、谷草轉氨酶、葡萄糖均無顯著性差異(P＞0.05); 隨著替代比例的升高, 總膽固醇有降低的趨勢, 除C15組與C0無顯著性差異外(P＞0.05), 4組均顯著低于CO組(P＜0.05); 實驗探討替代后對魚的影響, C75組血清總蛋白和球蛋白含量顯著低于C0組(P＜0.05); C75組血清谷草轉氨酶含量顯著高于C0(P＜0.05)。各處理組總抗氧化能力、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化氫酶均沒有顯著性影響(P＞0.05), 但替代組總抗氧化能力含量均高于C0; 丙二醛在C75組顯著高于C0組(P＜0.05)。通過肝組織學觀察表明, 當替代比例高于45%時, 呈現(xiàn)肝細胞核偏位、胞漿內脂肪滴較多、細胞透明空泡化等癥狀。綜上所述, 在實驗條件下, 研究認為玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚幼魚的適宜添加量為45%。

大黃魚; 玉米蛋白粉; 生長性能; 血清生化指標; 抗氧化; 肝臟組織學

魚粉是水產飼料優(yōu)質的蛋白源, 其含有豐富且較為平衡的必需氨基酸和脂肪酸; 抗營養(yǎng)因子少且適口性好, 不僅可消化能高而且還含有許多如煙酸、小肽、膽堿等特殊免疫蛋白等, 能夠滿足水產魚類的營養(yǎng)需求[1]。然而, 考慮到魚粉的昂貴價格和魚粉供應需求量不穩(wěn)定等主要因素, 國內外學者對植物蛋白源替代魚粉進行了大量研究[2—4]。

玉米蛋白粉是以玉米為原料, 在制作過程中通過分離及脫脂后除去淀粉、胚芽、外皮產生的副產品。淀粉和纖維含量較低、不含抗營養(yǎng)因子、蛋白質含量(60%—70%)高于魚粉和豆粕中的蛋白質含量、含有豐富的維生素B和維生素E且玉米蛋白粉所含必需氨基酸總量比大豆粉和魚粉中的必需氨基酸總量高, 其中總含硫氨基酸和亮氨酸含量大于大豆粉和魚粉中的含量[5,6]。據報道, 玉米蛋白粉在大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)[5,7]、凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)[8]中的添加量可以達到33%—70%。這些研究表明玉米蛋白粉的適宜添加對水產動物的生長不產生負面影響。因此, 玉米蛋白粉可作為水產動物飼料魚粉的替代蛋白源。

大黃魚(Larimichthys crocea)是我國的一種具有高營養(yǎng)高商業(yè)價值的鱸形目(Perciformes)、石首魚科(Sciaenidae)洄游類魚, 對飼料蛋白質含量要求高。由于大黃魚肉質鮮嫩, 具有重要的商業(yè)價值,在我國沿海地帶興起了養(yǎng)殖熱潮。目前, 大黃魚飼料魚粉的替代研究只有少量報道[9—11], 研究表明,魚粉替代的適宜比例因選擇的蛋白源不同而有差異。本文用玉米蛋白粉對大黃魚幼魚飼料魚粉進行了替代研究, 探索其對大黃魚幼魚的生長、體成分、血清指標以及肝臟組織學的影響, 旨在得到玉米蛋白粉替代大黃魚幼魚飼料魚粉的適宜比例, 以期為大黃魚的飼料應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗設計與試驗飼料

以魚粉、小麥蛋白粉、玉米蛋白粉(購自寧波天邦股份有限公司)、豆粕為主要蛋白源, 魚油、大豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源, 配制6種等氮(蛋白水平為45%)等脂(脂肪水平為10%)的實驗飼料, 原料組成見表 1。以玉米蛋白粉分別替代0(C0)、15%(C15)、30%(C30)、45%(C45)、60%(C60)和75%(C75)的魚粉, 各實驗組以對照組(C0)飼料賴氨酸、蛋氨酸含量為基準, 分別添加相應水平的晶體賴氨酸和蛋氨酸。具體原料成分及營養(yǎng)成分見表 2、3。各原料經粉碎后過80目篩, 按照配方設計精確稱重, 采用逐級擴大方法來將原料混合均勻, 并加水攪拌, 達到充分濕潤的效果。采用雙螺桿擠條機(華南理工大學, F-26(II)型)制作成條, 然后用制粒機制成粒徑分別為2和4 mm的顆粒飼料, 于90℃烘箱熟化30min, 自然風干后保存在–20℃冰箱以備用。

1.2 實驗魚與試驗管理

養(yǎng)殖實驗在浙江省象山縣西滬港區(qū)進行。正式實驗開始前將大黃魚放入3 m×6 m×3 m的海水網箱中, 使用商業(yè)飼料(粗蛋白45%, 粗脂肪10%)由寧波天邦科技有限公司提供; 暫養(yǎng)2周, 使其適應人工配合飼料。兩周后, 挑選體格大小均一且健康無病,平均體質量為(10.49±0.03) g的大黃魚隨機分組。每個處理隨機分配三個浮式海水網箱(1.5 m×1.5 m× 2 m), 每個網箱放養(yǎng)60尾魚, 每天人工飽食投喂兩次(05:00—07:00 和 17:00—19:00), 投料速度較為緩慢, 以確保飼料能基本被試驗魚攝入, 盡可能減少沉底浪費, 循環(huán)投喂至眼觀飽食狀態(tài)(以大部分魚不再游到水層表面攝食為準), 并觀察有無死魚,稱量計數(shù)。養(yǎng)殖周期為8周, 期間水溫度為25.5—29.5℃, 鹽度為27‰—30‰, 溶解氧含量高于7 mg/L。

1.3 樣品采集與分析

樣品采集與分析 在養(yǎng)殖試驗結束后, 對實驗魚停食1d后, 用丁香酚(1：1000)麻醉, 然后計數(shù),稱重。隨機取5尾魚用于常規(guī)成分的分析。另外,分別從每個網箱中隨機抽取5尾魚, 用一次性無菌注射器自尾靜脈取血, 室溫下自然沉降4h, 然后離心(4000 r/min, 15min, 4℃), 制備血清保存于–20℃冰箱, 用于血清指標分析。解剖分離得到肝臟和內臟, 并稱量其濕重, 用于肝體比和臟體比, 分離其肝臟用于抗氧化酶活性研究, 另隨機取2尾魚的肝臟在清理完表面的脂肪和結締組織后放入波恩試液定保存。

飼料原料、飼料以及魚體常規(guī)成分測定采用AOAC(1993)的方法。其中水分測定是用105℃烘箱, 烘至恒重。采用半微量凱氏定氮法(總氮×6.25, VELP, UDK142 automatic distillation unit意大利)測定粗蛋白。索氏抽提法(乙醚為抽提液)測定粗脂肪。而灰分的測定是在馬福爐中(550℃)灼燒12h之后稱其重量所得。氨基酸的測定送至浙江生態(tài)紡織品禁用染化料檢測中心有限公司, 采用日立L-8800高速氨基酸分析儀進行分析。

血液生化指標測定及分析 血液生化指標的測定送至寧波大學附屬醫(yī)院進行測, 將所得結果進行分析。

抗氧化酶活性的測定與分析 總抗氧化能力T-AOC、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)活性的測定均采用南京建成科技有限公司生產的試劑盒進行測定, 測定方法參考說明書進行。

表 1 飼料原料成分(%干物質)Tab. 1 Ingredients of the experimental diets (% dry matter)

肝組織學觀察及分析 所有樣品在固定36h后, 進行無水乙醇脫水、石蠟包埋、組織切片(厚度為5 μm)、蘇木精和伊紅染色、中性樹膠封片等步驟。使用光學顯微鏡觀察肝臟的組織學特征。

1.4 數(shù)據處理及統(tǒng)計分析

特定生長率(Specific growth rate, SGR, %)= 100×(lnWt–lnW0)/t;

存活率(Survival rate, SR) (%)=100×Nt/N0;

飼料系數(shù)(Feed conversion ratio, FCR, %)=(T– S)/(Wt–W0);

肝體比(HSI, %)=(Wh/Wt)×100;

臟體比(VSI, %)=(Wv/Wt)×100;

肥滿度(Condition factor, CF, %)=100×Wt/L3。

上述公式中W0、Wt分別表示實驗魚初始體重和終末體重; N0、Nt分別表示養(yǎng)殖實驗開始時網箱中魚的尾數(shù)和養(yǎng)殖試驗結束時網箱中魚的尾數(shù); T、S分別表示總飼料量和剩余飼料量; Wh為魚體肝臟質量(g), Wv為魚體內臟質量(g), t表示實驗天數(shù), L是魚體的體長。

采用SPSS17.0軟件對所得數(shù)據進行單因素方差分析(ANOVA), 差異顯著后進行Tukey多重比較,顯著性水平設為P＜0.05; 實驗結果以平均值±標準差表示。

表 2 實驗飼料組成及營養(yǎng)成分(%干物質)Tab. 2 Ingredients and nutrients of the experimental diets (% dry matter)

2 結果

2.1 CGM替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能和飼料利用的影響

從表 4中可以看出, 在各處理組中, 大黃魚存活率較高, 均在93.89%—99.44%, 并未受到玉米蛋白粉替代魚粉水平的顯著影響(P＞0.05)。各處理組,末體重、特定生長率、增重率、飼料系數(shù)等指標均無顯差異(P＞0.05)。

從表 5中可以看出, 玉米蛋白粉替代魚粉在C30、C45組大黃魚幼魚肥滿度顯著高于其C0組(P＜0.05), 而其他組之間無顯著差異(P＞0.05)。各處理組之間的肝體比(HSI)、臟體比(VSI)無顯著性差異(P＞0.05)。

表 3 實驗飼料氨基酸組成Tab. 3 The amino acid composition of the experimental diets (% dry matter)

表 4 玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚幼魚生長和飼料系數(shù)的影響Tab. 4 Effects of CGM on growth performance and FCR of juvenile large yellow croaker

2.2 CGM替代魚粉對大黃魚幼魚體組成的影響

在實驗結束后, 各處理組大黃魚幼魚肌肉和全魚的水分、灰分、粗蛋白及粗脂肪分析數(shù)據見表 6。C45和C60組肌肉粗蛋白含量顯著高于C0組(P＜0.05); 肌肉粗脂肪含量C45組顯著高于C0、C15和C75組(P＜0.05), 有先升高后降低的趨勢; C45、C60和C75組肌肉水分顯著低于C0組(P＜0.05); 各組肌肉灰分含量無顯著性差異(P＞0.05)。全魚粗蛋白、粗脂肪、水分含量無顯著差異(P＞0.05); 灰分含量有上升趨勢, C75組顯著高于其他組(P＜0.05)。

2.3 CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚血清指標的影響

從表 7中分析可得, C0組血清總蛋白與球蛋白含量顯著高于C30和C75組(P＜0.05), 其他組之間無顯著差異(P＞0.05); 各處理組血清白蛋白含量無顯著差異(P＞0.05); C75組血清谷丙轉氨酶活力顯著高于C0、C15和C30組(P＜0.05), 其他組之間無顯著差異(P＞0.05); 各處理組血清谷草轉氨酶活力雖無顯著差異, 但C45、C60和C75組酶活力明顯高于C0組; 血清總膽固醇和甘油三酯的含量隨著玉米蛋白粉添加量的增加有下降趨勢, C0組總膽固醇含量顯著高于C30—C75組(P＜0.05), 甘油三酯含量C0組顯著高于其他組(P＜0.05); 血清葡萄含量各處理組之間無顯著性差異(P＞0.05)。

2.4 CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織抗氧化能力的影響

從表 8可以看出, 肝臟超氧化歧化酶(SOD)在C15、C30組與C0有顯著差異(P＜0.05), 而C45、C60、C75與C0組無顯著差異(P＞0.05); C75組丙二醛(MDA)顯著高于其他組(P＜0.05), 其他組之間無顯著性差異(P＞0.05); 肝臟總抗氧化能力(TAOC)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)在各處理組均無顯著性差異(P＞0.05)。

2.5 CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織的影響

從肝臟組織圖觀察顯示圖 1, C0、C15、C30和C45中實驗魚肝細胞排列整齊, 肝細胞索明顯, 細胞較為正常。但隨著替代比例的增加, C60和C75組實驗魚肝細胞核偏位, 肝細胞胞漿內有大小不一的脂肪滴, 且脂肪滴滲入細胞胞漿將細胞核擠壓到一側, 甚至肝細胞核心出現(xiàn)了萎縮, 整個肝細胞漿被脂肪滴取代, 使肝細胞腫脹, 胞漿外溢, 使細胞呈現(xiàn)出透明空泡化, 變性的肝細胞隨后壞死, 使肝細胞核溶解或消失, 但其結構輪廓仍在。

3 討論

3.1 CGM替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能和體成分的影響

玉米蛋白粉具有幾乎不含抗營養(yǎng)因子、來源廣、價格低廉等優(yōu)點[5], 但其在飼料中的添加量因養(yǎng)殖品種而異。在異育銀鯽(Carassiusauratus gibelio)的研究中指出, 玉米蛋白粉替代75%的魚粉不會對其生長產生影響, 但與對照組相比100%替代組生長受到限制、飼料系數(shù)升高[12]。在本實驗中玉米蛋白粉的替代水平對大黃魚幼魚的特定生長率、飼料系數(shù)等指標沒有顯著影響。而在牙鲆(Japanese flounder)的研究中指出, 玉米蛋白粉替代60%的魚粉其生長指標顯著低于對照組[13]?？赡苁且驗樘砑诱T食劑改善了飼料適口性, 沒有顯著降低大黃魚幼魚的攝食量, 從而對生長無顯著影響。另外, 也可能是在飼料中添加了適量晶體賴氨酸和蛋氨酸, 晶體氨基酸的添加對植物蛋白源替代水平的效果雖然仍有爭議, 但越來越多的研究結果表明,添加晶體氨基酸對提高水產動物對植物蛋白的利用是有作用的[14—16]。因此, 提高植物蛋白源的替代水平可以從適口性、氨基酸平衡等方面進行改善。肥滿度和肝體比能夠從一定程度上衡量魚類生理或營養(yǎng)狀況。有研究表明: 當植物蛋白源替代魚粉含量增加后, 魚體表現(xiàn)出肥滿度降低, 肝體比上升的趨勢[17]。而在本研究中, 魚體的肥滿度隨著替代比例的增加, 有升高再降低的趨勢。這種差異可能是因蛋白源替代物、替代比例及魚的種類等因素有關。在本實驗中肥滿度在替代水平為45%時達到最高值與C0有顯著差異, 表明在魚體的營養(yǎng)生理層面在C45組能達到大黃魚幼魚生長的最適需求。而各組間, 肝體比、臟體比沒有顯著差異,這與苗星[18]在大黃魚的飼料中添加不同水平的雙低菜粕, 對肝體比、臟體比的影響相似。

表 5 玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚幼魚肝體指數(shù)的影響Tab. 5 Effects of dietary fish meal replacement by CGM on juvenile large yellow croaker somatic parameters (dry weight basis)

表 6 飼料中玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚幼魚體成分 (濕重)的影響Tab. 6 Effects of dietary fish meal replacement by CGM on body composition (% w d) of juvenile large yellow croaker

表 7 玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚幼魚血清生化指標的影響Tab. 7 Effects of dietary fish meal replacement by CGM on serum biochem ical indices of juvenile large yellow croaker

表 8 不同玉米蛋白粉替代魚粉對大黃魚肝臟抗氧化指標的影響Tab. 8 The effect of different levels of CGM on indices of antioxidant in juvenile large yellow croaker

圖 1 CGM替代魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織的影響(H & E染色, 400×)Fig. 1 Effect of replacement fish meal by CGM on liver histology of large yellow croaker (H & E, 400×)

在本研究中全魚粗脂肪、粗蛋白各組間無顯著性差異, 這與玉米蛋白粉替代魚粉對大菱鲆[15](S. maximus)、凡納濱對蝦[8](L. vannamei) 的粗脂肪、粗蛋白無顯著影響的研究結果一致。程媛嬡等[19]用玉米蛋白粉替代魚粉對羅氏沼蝦的研究結果表明玉米蛋白粉對羅氏沼蝦體組成和肌肉中的粗蛋白、粗脂肪和粗灰分都沒有顯著影響, 而在本試驗中肌肉粗蛋白在C45和C60組含量顯著高于C0組,而全魚粗蛋白含量各組間無顯著差異, 這說明肌肉組織對飼料中的營養(yǎng)形式變化較為敏感, 反映了機體組織對營養(yǎng)調控的差異性[20]。肌肉粗蛋白升高可能是因為替代組添加的晶體氨基酸可以促進大黃魚幼魚飼料中必須氨基酸的平衡性, 減少氨基酸用于分解供能, 從而蛋白質合成量增加。在試驗中用玉米蛋白粉替代魚粉后全魚粗脂肪含量與對照組沒有顯著差異, 其原因之一可能是玉米蛋白中不可消化的碳水化合物含量比較少, 二是因為在試驗中添加了賴氨酸, 所以飼料中不缺乏生酮氨基酸。大黃魚幼魚全魚灰分隨著替代比例的升高而升高,該結果與圓斑星鰈[21](Verasper variegatus)研究結果相一致。

3.2 CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚血清指標及幼魚肝臟的影響

CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚血清指標的影響 肝臟是蛋白質合成的主要場所, 血清總蛋白含量可以反映出肝臟對蛋白質的合成能力。對哲羅魚(Hucho taimen)的研究中發(fā)現(xiàn), 隨著大豆分離蛋白替代飼料魚粉水平的增加, 其血清中總蛋白含量降低[22]。而用蠶豆蛋白的研究發(fā)現(xiàn), 白鱘(Huso huso)血清總蛋白含量并沒有隨著替代比例增加而表現(xiàn)出顯著性差異[23]。在本研究中, 對照組總蛋白含量最高, C75組顯著低于對照組, 這表明肝臟對魚粉蛋白的吸收優(yōu)于玉米蛋白, 過高的玉米蛋白添加影響了肝臟對蛋白質的合成能力。在正常情況下谷丙轉氨酶(ALT)主要存在于肝臟細胞中,而谷草轉氨酶(AST)主要存在于肝細胞線粒體, 它們在血清中的含量很低, 只有當細胞膜通透性增強或細胞壞死時才會大量進入血液, 使血清酶活增加[24]。因此, 血清ALT和AST可作為反映肝臟功能的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn), 血清ALT含量隨著替代比例增加而升高, C60和C75組血清ALT含量顯著高于對照組, 表明玉米蛋白粉替代達60%以上的魚粉時對肝臟細胞造成了一定程度的損傷, 這與肝組織切片結果一致。植物蛋白源降低膽固醇的作用在很多研究中已經證實[13,25]。本研究也得到相似結果: 隨著玉米蛋白粉的添加水平的升高, 血清總膽固醇含量呈下降趨勢?？赡茉蚴悄懝檀荚谖改c中的吸收受阻, 或是由于植物蛋白源替代中膽固醇不足等因素導致其下降[26]。

CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚肝臟抗氧化能力的影響 在正常生理條件下, 活性氧(自由基)類高活性分子的生成和清除維持在穩(wěn)態(tài)水平和平衡狀態(tài)。當活性氧的生成超過機體的清除能力時, 就會使氧化還原平衡紊亂, 導致氧化應激的發(fā)生, 造成多種大分子(DNA、蛋白質、脂質)的損傷,進而導致多種疾病的發(fā)生?？寡趸? 對于抵抗氧化損傷, 維持氧化還原平衡具有重要作用[27]。機體的抗氧化能力還是評價水生動物健康的重要指標之一?？偪寡趸芰?T-AOC)是機體抗氧化系統(tǒng)功能的綜合體現(xiàn), 可以反映出機體的抗氧化應激能力[28]; 超氧化物歧化酶(SOD)是抗氧化體系中首先被激活的酶類, 具有清除自由基的作用[29]; 過氧化氫酶(CAT)是動物體內的重要抗氧化酶, 它能將H2O2進一步轉化成水[30], CAT活力的高低表現(xiàn)為H2O2濃度的增加, H2O2的濃度可能與SOD的應激反應有關[27]; 谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)的功能與CAT相似, 對H2O2具有極強的清除作用, 對于保護生物大分子和細胞膜結構不受氧化物質的損傷具有重要作用[24]。丙二醛(MDA)是脂質過氧化的產物, 可以作為判斷機體細胞受氧自由基損傷程度的指標[29]。實驗結果表明: 各處理組T-AOC、GSHPx和CAT沒有顯著性差異, 但替代組T-AOC的含量均高于對照組, 說明飼料中玉米蛋白粉的添加對大黃魚幼魚的抗氧化能力有一定的促進作用。C75組與C0組MAD有顯著差異且是最大值, 說明替代比例超過60%時, 大黃魚幼魚處于氧化應激狀態(tài), 這與曹俊明等[31]用蠅蛆粉替代魚粉水平超過60%時,凡賓納對蝦處于氧化應激狀態(tài)的研究結果一致。其出現(xiàn)氧化應激的原因可能是與飼料中脂肪含量過多有關, 王朝明等[32]等研究表明飼料中脂肪含量過多從某種程度上會使機體清除自由基的能力減弱, 從而使機體MDA的含量增加。

CGM替代飼料魚粉對大黃魚幼魚肝臟肝臟組織的影響 肝臟組織學觀察, 從組織學的角度對養(yǎng)殖魚類的攝食營養(yǎng)進行組織學分析, 是評價魚體對植物蛋白源吸收利用率的方法之一。由于養(yǎng)殖魚類食用人工配合飼料, 輕度脂肪堆積在養(yǎng)殖魚類中十分常見[33]。在Couto等[34]對白姑魚(Argyrosomus regius)的研究指出, 飼料中添加225 g/kg角斗胚芽粕不會引起肝組織病變。但一些研究發(fā)現(xiàn), 角斗胚芽粕添加的增加, 真鯛(Sparus aurata)肝細胞空泡化加劇[35]; 在混合蛋白替代魚粉的研究中也發(fā)現(xiàn), 高比例的混合蛋白添加會導致脂肪變性[36]。本替代組織學觀察表明, 玉米蛋白粉添加從0—45%,肝臟脂肪堆積不明顯, 進一步添加時脂肪堆積加重,高替代比例75%添加組觀察到嚴重脂肪變性, 其可能的原因是隨著替代比例的增加, 飼料脂肪的含量也隨著增加, 使魚體能量過剩, 肝細胞中脂肪沉積,肝的生長機能降低, 是脂蛋白合成減少, 使肝中的脂肪不能及時運出, 從而導致肝組織損傷[37]。這與脂質抗氧化指標MAD檢測結果相吻合, 其MAD含量在替代比例為75%時較對照組顯著升高。其原因是高替代比例試驗組, 自由基對肝臟中的多不飽和脂肪酸具有很高的親和力, 引發(fā)脂質氧化, 形成不穩(wěn)定的氫過氧化物, 并迅速降解成MDA等物質,促使MDA含量升高, 如此過量的抗氧化劑伴隨著自由基對肝臟的損傷會加重。此外, 谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)在機體蛋白質代謝中起重要作用, 其活性變化亦是反映肝細胞受損傷的主要敏感指標[24]。在健康動物血清中轉氨酶的活力很小。因為脊椎動物在正常情況下肝臟內的轉氨酶只有少量被釋放到血液中, 因此血清中的轉氨酶活性較小。而在本實驗中, 隨著替代比例的增加,血清ALT呈上升趨勢, 且替代比例達到75%時顯著高于對照組, 此時細胞膜的通透性加大, 大量ALT滲入血液中, 表明肝組織受到損傷, 這與肝組織切片觀察結果相吻合。

4 結論

綜合大黃魚幼魚的生長、體成分、血清生化指標及肝組織學結果, 認為在本實驗條件下, 建議玉米蛋白粉添加量為45%。

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EFFECTS OF REPLACING FISH MEAL WITH CORN GLUTEN MEAL ON THE GROWTH, SERUM BIOCHEMICAL INDICES AND LIVER HISTOLOGY OF LARGE YELLOW CROAKER LARIMICHTHYS CROCEA

HE Jiao-Jiao1, WANG Ping1,2, FENG Jian1, LOU Yu-Dong1, DANG Hui1and DENG Rong1
(1. Zhejiang Province Key Laboratory of Marine Aquaculture Equipment and Engineering Technology, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316000, China; 2. School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China)

To investigate the effects of replacing fish meal by corn gluten meal (CGM) on fish growth, serum biochemical indices and liver histology, six isonitrogenous (45% crude protein) and isolipidic (10% crude lipid) diets with various dietary protein levels (0, 15%, 30%, 45%, 60% and 75%) (designated as C0, C15, C30, C45, C60, C75) were formulated to feed triplicate groups of juvenile large yellow croaker [mean initial weight: (10.49±0.03) g] for a 56 days trail. In addition, all diets except the control diet were supplemented with crystalline amino acids such as lysine and methionine. Results showed that the survival rate (SR), specific growth rate (SGR) and feed conversion ratio (FCR) were not significantly affected (P＞0.05). Muscle crude protein content in C45 and C60 were significantly higher than that of C0 (P＜0.05). Muscle crude lipid content in C45 was significantly higher than that of C0, C15 and C75 (P＜0.05). Muscle moisture in C45, C60 and C75 were significantly lower than that of C0. CGM had no effects on crude protein, crude lipid and moisture of whole body (P＞0.05), while, the increased CGM replacement enhanced the whole body ash. CGM did not impact serum ALB, A/G, AST and GLU. The increasing dietary CGM level decreased total TC with a significant difference when the substitution level was more than 30% (P＜0.05). The serum TP and GLB content of C0 was significantly higher than that of C75 (P＜0.05). Serum AST of C60 and C75 were significantly higher than that of C0 (P＜0.05) with the highest in the C75. No significant differences were observed in the T-AOC, CAT and GHS-Px by CGM (P＞0.05). While CGM can increase the T-AOC content. Compared to C0 diet, C75 had significant and highest value in MDA (P＜0.05). From the liver histology, replacement proportion of fish meal by CGM more than 45% mediated liver cell nucleus location and increased lipids accumulation that were translucent with vacuole. These results suggest that the optimal dietary protein level in juvenile large yellow croaker is about 45%.

Large yellow croaker; Corn gluten meal; Growth performance; Serum biochemical indices; Antioxidase; Liver histology

S965.3

A

1000-3207(2017)03-0506-10

10.7541/2017.65

2016-06-22;

2016-11-10

浙江省自然科學重點基金(Z16E090006); 國家海洋公益性行業(yè)科研專項(201505025); 舟山市海洋專項(2015C41001); 浙江省重中之重學科開放基金(XKZSC1406); 國家自然科學基金(31602205); 浙江海洋大學省重中之重學科項目(20161105)資助[Supported by the National Natural Science Foundation of Zhejiang Province (Z16E090006); Public Science and Technology Research Funds Projects of Ocean (201505025); the Special Funds Projects of Ocean in Zhoushan, Zhejiang Province (2015C41001); the Key Discipline Open Fund of Zhejiang Province (XKZSC1406); the National Science Foundation of China (31602205); the Key Discipline Projects for Zhejiang Ocean University of Zhejiang Province (20161105)]

何嬌嬌(1990—), 女, 貴州省湄潭縣人; 碩士研究生; 研究方向為海洋生物養(yǎng)殖學。E-mail: 915316064@qq.com

王萍, 副教授, 碩士研究生導師; E-mail: wp77319@163.com