劉 曦， 馬 駿， 胡茂通， 董細丹， 項蘭婷， 顧倩如， 杜轉運， 陳三妹， 陳國榮△

(1． 浙江中醫(yī)藥大學附屬溫州市中醫(yī)院腎內科， 溫州 325000； 2. 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科， 浙江 溫州 325015；3. 溫州醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學與生命科學學院， 浙江 溫州 325035； 4. 紹興文理學院醫(yī)學院， 浙江 紹興 312000)

姜黃素類似物L6H4對2型糖尿病大鼠腎臟的保護作用*

劉 曦1， 馬 駿2， 胡茂通2， 董細丹2， 項蘭婷2， 顧倩如2， 杜轉運3， 陳三妹4△， 陳國榮2△

(1． 浙江中醫(yī)藥大學附屬溫州市中醫(yī)院腎內科， 溫州 325000； 2. 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科， 浙江 溫州 325015；3. 溫州醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學與生命科學學院， 浙江 溫州 325035； 4. 紹興文理學院醫(yī)學院， 浙江 紹興 312000)

目的：探討姜黃素類似物L6H4對2型糖尿病大鼠腎臟的保護作用及機制。方法：24只SPF級雄性SD大鼠，隨機分成3組(n=8)：對照組(NC組)、糖尿病組(DM組)和糖尿病治療組(DT組)，采用高脂飲食加腹腔注射低劑量鏈脲佐菌素誘導2型糖尿病大鼠模型。DT組按0.2 mg/kg·d劑量的L6H4灌胃8周。治療結束后測24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。采用光鏡和透射電鏡觀察大鼠腎臟的形態(tài)學改變；用免疫組化法測定大鼠腎臟組織轉化生長因子-β1(TGF-β1)、纖維粘連蛋白(FN)、四型膠原(Col-IV)的表達水平。結果：DM組大鼠24 h尿蛋白、FBG 、TG、Scr、BUN均明顯升高(P<0.01)，腎小球體積增大、不規(guī)則，彌漫性系膜基質增多，伴基底膜不同程度的增生肥厚及足突融合現象；腎組織的TGF-β1、FN、Col-IV表達水平明顯增加(P<0.05)。經L6H4治療后，DT組的24 h尿蛋白、FBG、TG、Scr、BUN水平明顯下降(P<0.01)，大鼠腎小球形態(tài)較規(guī)則，系膜區(qū)基質明顯減少，足細胞腫脹、融合現象減輕；腎組織的TGF-β1、FN、Col-IV表達明顯減少(P<0.05)。結論：L6H4可能通過下調TGF-β1的表達，抑制FN、Col-IV的大量分泌，減輕細胞外基質的沉積，從而起到保護2型糖尿病大鼠腎臟的作用。

姜黃素類似物L6H4；2型糖尿??；腎臟；轉化生長因子-β1；大鼠

【DOI】 10.12047/j.cjap.5499.2017.003

據國際糖尿病聯盟(IDF)統(tǒng)計，從全球范圍來看，糖尿病患者在2011年已有3.7億，2030年將達到5.5億。其中糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)的患病率和致死率已經成為僅次于糖尿病性心腦血管病變的慢性并發(fā)癥之一。

有報告指出[1-3]，糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的機制與全身代謝紊亂引起的腎血流動力學不穩(wěn)定以及各種細胞成分功能異常化呈一定相關性，但具體尚未明確；由于DN時機體存在嚴重的糖脂代謝紊亂，因此一旦發(fā)生DN，病情便會迅速進展，短期內發(fā)展成終末期腎病，提前進入腎替代治療階段，因此，如何有效延緩DN進展，改善患者的生活質量已經成為研究熱點之一。

姜黃素是從傳統(tǒng)中藥姜黃提取的一種酚類色素，是其最主要的藥理活性成分，具有抗氧化、降血脂、抗動脈硬化、抗衰老及抑制腫瘤細胞生長等作用。姜黃素類似物L6H4是一種在姜黃素基礎上合成的新型不對稱單羰基姜黃素衍生物，它不僅具有姜黃素的一般特性，而且具有更高的生物利用度、安全性，從而更好地發(fā)揮姜黃素的藥理作用。本實驗通過鏈脲佐菌素(streptozocin, STZ)誘導2型糖尿病大鼠模型，用L6H4進行干預，觀察大鼠腎臟形態(tài)改變以及相關腎功能指標、細胞成分的表達結果，探討姜黃素類似物L6H4對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 動物分組及模型建立

健康SPF級雄性SD大鼠24只，體重180～220 g，普通飼料適應性飼養(yǎng)1周，按體重隨機分為3組：正常對照組(normal control，NC組)、糖尿病組(diabetes mellitus，DM組)、糖尿病L6H4治療組(DM+L6H4-treatment，DT組)；正常對照組繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)；其余組改用高脂飼料，喂養(yǎng)4周后按35 mg/kg單次腹腔注射STZ造模，72 h后尾靜脈測血糖，血糖>16.7 mmol/L則造模成功[4]。DT組按0.2 mg/kg·d劑量的L6H4(溶于1%羧甲基纖維素鈉)灌胃8周,NC組、DM組予等容積的1%羧甲基纖維素鈉灌胃。喂養(yǎng)及造模期間，實驗大鼠自由進水，未使用胰島素以及相關降糖藥物。實驗結束，禁食12 h，股動脈放血處死大鼠。取雙側腎臟，計算腎臟肥大指數(雙側腎臟質量之和/體質量)。

1.2 藥品與試劑

姜黃素類似物L6H4(純度99.5%，溫州醫(yī)科大學梁廣教授贈)；1%羧甲基纖維素鈉(國藥集團化學試劑有限公司)；鏈脲佐菌素(上海潤朗生物科技有限公司)。

FN、Col-IV、TGFβ1抗體(兔抗鼠)(北京中杉金橋生物試劑有限公司)；山羊抗兔單克隆抗體(二抗，PV6001 北京中杉金橋生物試劑有限公司)。

1.3 一般情況記錄

觀察大鼠的日常活動、飲食、大小便情況等，并記錄大鼠體重變化。

1.4 生化指標檢測

實驗結束后，股動脈放血處死大鼠，留取血清，靜置45 min后，3 000 r/min離心10 min，取上清液, 置于-20℃冰箱保存。采用日立7600全自動生化分析儀檢測空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)、甘油三酯(triglyceride, TG)、血肌酐(serum creatinine，Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、尿酸(uric acid，UA)、24 h尿蛋白(24-hour urinary protein)。

1.5 光鏡標本制備

1.5.1 HE染色 大鼠處死取腎皮質厚約3 mm的組織，放入10%中性福爾馬林固定液中固定，經乙醇梯度脫水、石蠟包埋后，制成厚約3 μm的切片，行HE染色，中性樹膠封固。光鏡下觀察腎小球體積、系膜基質、毛細血管基底膜等的變化情況。

1.5.2 Masson染色 染色標本制作石蠟切片，常規(guī)脫蠟，蘇木素染色5 min，1%鹽酸乙醇分化1～3 s，沖洗15 min，置于紅色Masson液(變色酸2R 0.5 g+磷鎢酸1.0 g+冰醋酸1.0 ml+蒸餾水100 ml)3 min，流動水沖洗5 s，置于0.1%亮綠色Masson液15 s(亮綠色物質0.1 g+20%乙醇100 ml)，乙醇梯度脫水各10 s：80%乙醇→95%乙醇(Ⅰ)→95%乙醇(Ⅱ)→無水乙醇(Ⅰ)→無水乙醇(Ⅱ)，石炭酸15 s，二甲苯3 s，二甲苯透明，中性樹膠封片。光鏡下觀察腎臟膠原纖維的變化情況。

1.6 電鏡標本制備

取腎皮質(大小約為：0.1 cm×0.1 cm×0.1 cm)小塊組織，放入2.5%戊二醛中固定，然后放入4℃冰箱固定2 h，PBS漂洗，鋨酸后固定，PBS漂洗，丙酮梯度脫水，Epon8l2 包埋，半薄切片定位，PT-XL型超薄切片機切片，醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重染色，透射電子顯微鏡下觀察超微結構[5，6]。

1.7 免疫組織化學染色 (Envision二步法)

常規(guī)石蠟切片經烘烤、二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水、3%過氧化氫液中阻斷、高溫高壓抗原修復后，滴加一抗TGF-β1、FN、Col-IV，37℃烤箱中孵育1 h，室溫下復溫5 min，滴加二抗，37℃烘箱中孵育15 min，DAB顯色2 min，蘇木素復染，中性樹膠封固，PBS代替一抗作陰性對照。結果判定：胞漿呈棕黃色為陽性表達。應用Image-Pro Plus 6.0圖像處理軟件計算平均光密度(IOD/Area)評估TGF-β1、FN、Col-IV的表達情況。

1.8 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 一般情況

NC組大鼠精神狀態(tài)正常，飲食規(guī)律，DM組大鼠出現不同程度的多飲、多尿、多食，2周后體重逐漸下降、消瘦。與NC比較，病變組大鼠體重明顯下降，腎臟肥大指數明顯增加(P<0.01，表1)；經L6H4干預后，DT組大鼠消瘦狀況明顯改善(P<0.05)，腎臟肥大指數明顯下降(P<0.01)。

GroupBodyweight(g)Hypertrophyindex(10-3)NC425.75±14.373.20±0.16DM312.00±20.59**4.09±0.29**DT349.38±23.07##3.81±0.16#

NC： Normal control； DM： Diabetes mellitus； DT： DM+L6H4-treatment

**P<0.01vsNC；##P<0.05,##P<0.01vsDM

2.2 24 h尿蛋白、血糖、血脂的改變

與NC組比，DM組24 h尿蛋白、FBG、TG均明顯升高(P<0.01，表2)，經姜黃素類似物L6H4治療后，上述指標均有明顯下降(P<0.01)。

Group24hUrinaryprotein(mg/d)FBG(mmol/L)TG(mmol/L)NC9.61±2.376.73±0.5090.295±0.128DM94.13±9.23**30.47±1.82**3.045±0.431**DT66.86±8.69##13.73±1.15##0.331±0.112##

NC： Normal control； DM： Diabetes mellitus； DT： DM+L6H4-treatment； FBG： Fasting blood glucose; TG: Triglyceride

**P<0.01vsNC；###P<0.01vsDM

2.3 腎功能指標的改變

與NC組比，DM組大鼠的血肌酐、尿素氮水平均有明顯升高(P<0.01，表3),經L6H4干預后，DT組的血肌酐、尿素氮水平明顯下降(P<0.01)，尿酸水平未見明顯差異。

2.4 腎臟形態(tài)學改變

2.4.1 HE染色觀察 NC組大鼠腎臟的腎小球體積正常，形態(tài)規(guī)則，毛細血管袢排列整齊，管壁規(guī)則。與NC相比，DM組大鼠的腎小球體積明顯增大，毛細血管袢卷曲，系膜基質增生。經L6H4治療后，DT組大鼠的腎小球體積接近正常，形態(tài)規(guī)則，系膜區(qū)基質增生明顯減少(圖1，見彩圖頁Ⅰ)。

GroupScr(umol/L)BUN(mmol/L)UA(umol/L)NC33.29±9.277.75±1.11107.13±22.91DM97.14±9.67**15.91±2.64**120.50±20.16DT62.69±8.81##9.85±1.88##113.75±14.61##

NC： Normal control； DM： Diabetes mellitus； DT： DM+L6H4-treatment; Scr: Serum creatinine; BUN: Blood urea nitrogen; UA: Uric acid

**P<0.01vsNC；###P<0.01vsDM

2.4.2 Masson染色觀察 NC組大鼠的腎小球毛細血管基底膜、系膜區(qū)有少量膠原纖維沉積，呈藍綠色。DM組大鼠腎小球表現為系膜區(qū)細胞增殖，系膜基質增生，系膜區(qū)及腎小球中央區(qū)可見大量呈藍綠色的基質，經L6H4干預后，可見藍綠色的陽性基質減少(圖2，見彩圖頁Ⅰ)。

2.4.3 電鏡觀察 電鏡下觀察，腎小球濾過膜的內層由毛細血管內皮細胞構成，其上有窗孔結構，濾過膜的中間層由基底膜構成，呈負電子狀態(tài)，濾過膜的外層由足細胞構成，其表面有足突，相互交錯，相鄰足突之間有一定的裂隙。與NC組相比，DM組大鼠的內皮細胞腫脹、變形，基底膜明顯增厚，足突變短、融合。L6H4干預后，DT組大鼠的基底膜厚度均勻接近正常，足突融合現象消失(圖3)。

Fig. 3 Ultrastructure of rats kidney podocyte in each group observed under transmission electron microscope A： Normal control； B： Diabetes mellitus； C： DM+L6H4-treatment

2.5 免疫組化檢測

2.5.1 TGF-β1表達的改變 NC組大鼠的腎小球毛細血管基底膜區(qū)、系膜區(qū)以及腎小管上皮細胞可見微量呈片狀分布的棕褐色陽性基質，DM組大鼠的上述區(qū)域可見大量棕褐色致密顆粒(P<0.01)，呈強陽性表達，經L6H4干預后，DT組大鼠的TGF-β1的表達水平明顯減輕(P<0.01，表4，圖4，圖4見彩圖頁Ⅰ)。

2.5.2 FN表達的改變 NC組大鼠在腎小球基底膜區(qū)可見少量棕黃色的陽性顆粒表達，DM組FN陽性表達量明顯增多(P<0.01)，經L6H4治療后，DT組的FN表達量明顯減少(P<0.05，表4，圖5，圖5見彩圖頁Ⅱ)。

2.5.3 Col-Ⅳ表達的改變 NC組大鼠在腎小球基底膜、系膜區(qū)可見少量呈條索狀的褐色致密基質，與NC組相比，DM組可見基底膜、系膜區(qū)的染色顯著加深，可見大量褐色基質沉著(P<0.01)，經L6H4干預后，DT組的陽性表達水平有明顯下降(P<0.01，表4，圖6，圖6見彩圖頁Ⅱ)。

GroupTGF-β1FNCol-IVNC0.284±0.0130.281±0.0130.267±0.007DM0.320±0.017**0.400±0.035**0.352±0.019**DT0.304±0.008##0.327±0.017#0.292±0.013##

NC： Normal control； DM： Diabetes mellitus； DT： DM+L6H4-treatment; TGF-β1: Transforming growth factor-beta 1; FN: Fibronectin; Col-IV: Collogen IV

**P<0.01vsNC；##P<0.05,##P<0.01vsDM

3 討論

糖尿病腎病(DN)作為糖尿病全身微血管病性合并癥之一，已成為導致終末期腎病的第二位原因。有研究指出[7]，長期高血糖、高血脂狀態(tài)在促進DN發(fā)生發(fā)展的過程中具有重要作用。體內過多的糖類可與血液循環(huán)中游離氨基酸或組織蛋白結合，最終引起晚期糖基化終末產物(AGEs)不可逆增長，而AGEs可直接引起腎臟損傷；另外，慢性高糖狀態(tài)還可以通過活化蛋白激酶C、下調肝素酶的表達導致腎小球基底膜對蛋白的通透性增加[8]，加速腎功能惡化。因此，如何有效的控制血糖、血脂，改善異常代謝有著重要意義。

本實驗中，采用高脂飲食聯合腹腔注射STZ建造2型糖尿病大鼠模型，DM組大鼠空腹血糖、甘油三酯與正常組比較明顯升高(P<0.01)；腎臟肥大指數、血肌酐、血尿素氮、24 h尿蛋白定量與正常組比較明顯增加(P<0.01)，腎臟形態(tài)學可見腎小球體積明顯增大，系膜基質增生，基底膜足細胞足突融合，表明腎臟受到明顯損傷，成功誘導了DN，經L6H4干預后，DT組大鼠FBG、TG、Scr、BUN、24 h尿蛋白定量顯著降低(P<0.01)，表明L6H4能通過調節(jié)糖脂的代謝異常有效保護腎功能，進而延緩DN的進展。

國內外大量研究表明[9],糖尿病腎病發(fā)展過程中主要病理生理學改變是多種細胞因子介導的各種膠原蛋白、結構蛋白合成與降解失衡，細胞外基質大量沉積于腎小球、腎間質內，破壞腎小球基本結構，最終進展為終末期腎病。在此過程中，由TGF-β1介導的信號通路激活是主要的機制之一[10-15]，這些通路可以通過誘導足細胞脫離基底膜，增加蛋白排泄率，加速腎小球濾過膜的損傷；刺激以IV型膠原蛋白、纖維粘連蛋白為主的細胞外基質大量沉積，導致腎小球基底膜肥厚，腎小管上皮細胞變性重塑，最終導致腎功能受損[16-18]。

本實驗中，DM組腎臟肥大指數、TGF-β1、FN、Col-IV型膠原含量的表達與正常組比較顯著增加(P<0.01)，腎臟形態(tài)學觀察可見系膜區(qū)有膠原纖維及基質沉積，內皮細胞腫脹，基底膜增厚，足突融合現象，經L6H4干預后，DT組腎臟肥大指數、FN的表達量明顯降低，TGF-β1、COL-Ⅳ型膠原表達量顯著減少，形態(tài)學可見系膜區(qū)基質沉積顯著減少，足突融合現象減輕，表明L6H4可能通過下調TGF-β1表達，減少細胞外基質的增殖與沉積，從而達到保護和治療腎臟的作用。

目前臨床上對于糖尿病腎病的治療尚未形成統(tǒng)一的認識，有報道指出[19]，ACEI或ARB與降糖、調脂、改善微循環(huán)相關的藥物合用具有一定的臨床療效，但因藥物的臨床使用禁忌、配伍禁忌及患者的個體情況，故臨床應用尚無法全面普及；有研究顯示[20]，豆科多年生草本植物中藥黃芪的提取物中因含有黃芪皂苷、元素硒、多糖等成分，能保護腎小球基底膜的電荷屏障，減輕腎小球的高濾過，降低DN患者早期的高凝、高血糖狀態(tài)，但因其提取工藝復雜，成本高，目前尚無法在臨床廣泛應用；姜黃素類似物L6H4是新型不對稱單羰基姜黃素衍生物，不僅具有姜黃素的藥理活性，而且化學結構更穩(wěn)定，炎癥抑制活性更強，制作過程相對簡單，前期大量實驗證明[21-23]其對糖尿病引起的心、肝、腦等主要臟器的病變具有明顯的療效，是一個值得推廣和臨床應用的新型藥物。

綜上所述， L6H4具有改善糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂和保護腎功能的作用，其機制可能與其降血糖、調脂以及通過下調腎臟TGF-β1的表達水平，從而減少FN、Col-IV型膠原分泌有關。

[1] Gooch JL, Barnes JL, Garcia S,etal. Calcineurin is activated in diabetes and is required for glomerular hypertrophy and ECM accumulation[J].AmJPhysiolRenalPhysiol, 2003, 284(1): F144-154.

[2] Chen S, Hong SW, Iglesias-dela Cruz MC,etal. The key role of the transforming growth factor-β system in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].RenFail, 2001, 23(3-4): 471-481.

[3] 曾聰聰, 劉 曦, 劉網網, 等. 姜黃素衍生物 B06 對 2 型糖尿病大鼠腎臟的保護作用[J]. 中國應用生理學雜志, 2015, 31(1): 38-42.

[4] 應麗麗, 倪瑾瑤, 李慧敏, 等. 姜黃素類似物 L6H4 對 2 型糖尿病大鼠心肌的保護作用[J]. 中國病理生理雜志, 2016, 32(1): 27-32.

[5] 陳涵斌, 馬 駿, 李慧敏, 等. 鄰苯二甲酸酯染毒哺乳期母鼠對雄性仔鼠睪丸Leydig細胞形態(tài)及功能的影響[J]. 中國應用生理學雜志, 2015, 31(2): 97-101.

[6] 李旭升, 陳國榮, 李劍敏, 等. 銀杏葉提取物對糖尿病大鼠心肌損傷的防護作用[J]. 中國應用生理學雜志, 2005, 21(2): 176-178.

[7] Schaan BDA, Lacchini S, Bertoluci MC,etal. Increased renal GLUT1 abundance and urinary TGF-β1 in streptozotocin-induced diabetic rats: implications for the development of nephropathy complicating diabetes[J].HormMetabRes, 2001, 33(11): 664-669.

[8] 呂佳璇, 李月紅. 糖尿病腎病的研究進展[J]. 臨床內科雜志, 2016, 33(5): 296-299.

[9] Houlihan CA, Akdeniz A, Tsalamandris C,etal. Urinary transforming growth factor-β excretion in patients with hypertension, type 2 diabetes, and elevated albumin excretion rate effects of angiotensin receptor blockade and sodium restriction[J].DiabetesCare, 2002, 25(6): 1072-1077.

[10]Wang JJ, Zhang SX, Mott R,etal. Salutary effect of pigment epithelium derived factor in diabetic nephropathy evidence for antifibrogenic activities[J].Diabetes, 2006, 55(6): 1678-1685.

[11]Cooper ME. Interaction of metabolic and haemodynamic factors in mediating experimental diabetic nephropathy[J].Diabetologia, 2001, 44(11): 1957-1972.

[12]Sakharova OV, Taal MW, Brenner BM. Pathogenesis of diabetic nephropathy: focus on transforming growth factor-β and connective tissue growth factor[J].CurrOpinNephrolHypertens, 2001, 10(6): 727-738.

[13]Akai Y, Sato H, Ozaki H,etal. Association of transforming growth factor-β1 T29C polymorphism with the progression of diabetic nephropathy[J].AmJKidneyDis, 2001, 38(4): S182-185.

[14]Basile DP. Transforming growth factor-β as a target for treatment in diabetic nephropathy[J].AmJkidneydis, 2001, 38(4): 887-890.

[15]宋成軍, 付秀美, 李 健, 等. 絲膠對糖尿病腎病大鼠腎臟 TGF-β_1/Smad3 信號通路的作用[J]. 中國應用生理學雜志, 2011, 27(1): 102-105.

[16]Wahab N A, Yevdokimova N, Weston BS,etal. Role of connective tissue growth factor in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].BiochemJ, 2001, 359(1): 77-87.

[17]Hill C, Flyvbjerg A, Rasch R,etal. Transforming growth factor-beta2 antibody attenuates fibrosis in the experimental diabetic rat kidney[J].JEndocrinol, 2001, 170(3): 647-651.

[18]Chen S, Hong SW, Iglesias-dela Cruz MC,etal. The key role of the transforming growth factor-β system in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].RenFail, 2001, 23(3-4): 471-481.

[19]楊玉霞. 糖尿病腎病藥物治療進展[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生(引文版), 2016， (2): 00023-00024.

[20]胡競予. 黃芪聯合纈沙坦治療早期糖尿病腎病的臨床觀察[J]. 實用糖尿病的雜志， 2010， 6(5)： 41-42.

[21]王振富, 鐘 靈. 姜黃素對大鼠糖尿病防治作用的實驗研究[J]. 中國應用生理學雜志, 2014, 30(1): 68-69.

[22]曹 紅, 李 軍, 李廣明, 等. 姜黃素對沙土鼠腦缺血/再灌注損傷的海馬 CA1 區(qū)細胞凋亡和即早基因 c-fos, c-jun, NF-κB 表達變化的關系[J]. 中國應用生理學雜志, 2007, 23(2): 184-188.

[23]Wu J, Li J, Cai Y,etal. Evaluation and discovery of novel synthetic chalcone derivatives as anti-inflammatory agents[J].JMedChem, 2011, 54: 8110-8123.

Protective effects of Curcumin analogue L6H4 on kidney from type 2 diabetic rats

LIU Xi1， MA Jun2， HU Mao-tong2， DONG Xi-dan2， XIANG Lan-ting2， GU Qian-ru2,DU Zhuan-yun3, CHEN San-mei4△, CHEN Guo-rong2△

(1. Department of Nephrology， the Affiliated Wenzhou Chinese Medical Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Wenzhou 325000;2. Department of Pathology, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325015; 3. Department of Biology, School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035; 4. Medical College, Shaoxing University， Shaoxing 312000, China)

Objective: To investigate the protective effect of curcumin analogue L6H4 on the kidney from the type 2 diabetic rats. Methods: Twenty-four SPF male SD rats were randomly divided into 3 groups(n=8): normal control group(NC),diabetes mellitus group(DM) and DM+L6H4-treatment group(DT). After rats were fed with high-fat diet for 4 weeks, both the DM and DT groups were injected with streptozotocin intraperitoneally to induce type 2 diabetes mellitus models. The rats in DT group were given L6H4 by gavage at the dose of 0.2 mg/kg·d for 8 weeks. After the treatment, the 24 h urinary protein, fasting blood glucose (FBG), triglyceride (TG), serum creatinine(Scr)，blood urea nitrogen (BUN) and uric acid (UA) were detected biochemically. The pathological changes of the kidneys were observed under light and transmission electron microscopes. The expressions of TGF-β1, FN and Col IV were detected by immunohistochemistry. Results: The levels of the 24 h urinary protein, FBG, TG, Scr and BUN were elevated significantly in diabetic group(P<0.01). The glomerular volume of DM group rats became irregularly enlarged, diffused mesangial matrix accumulated, with basal membrane proliferous hypertrophy and fusion phenomenon of foot process , the expressions of TGF-β1,FN and Col-IV were elevated significantly (P<0.05). After treated with L6H4, the levels of the 24 h urinary protein, FBG, TG, Scr and BUN were decreased in DT group compared to DM group (P<0.01), the morphological changes of kidney were ameliorated. The expression levels of TGF-β1, FN and Col-IV were downregulated (P<0.05). Conclusion: L6H4 exerts the protective effect on kidneys of type 2 diabetic rats by reducing expression of TGF-β1, inhibiting secretion of Col-IV and FN, relieving the deposition of the extracellular matrix.

curcumin analogue L6H4； type 2 diabetes; kidney； transforming growth factor-beta 1; rat.

浙江省公益性技術應用研究計劃項目(2011C23123)

2016-10-08 【修回日期】2016-11-24

R365

A

1000-6834(2017)01-011-05

△【通訊作者】Tel: 0577-55579792，0575-88345685; E-mail: chengr1978@aliyun. com， csm498@163.com