李澤英 黃翔 劉北華 潘進(jìn)良

摘要：本實(shí)驗(yàn)以五倍子作為試供藥物，黃芩為對(duì)照組，研究超聲波與水煎提取對(duì)五倍子體外抑菌效果的影響，采用平皿打洞法測(cè)定五倍子對(duì)金黃色葡萄球菌、埃希氏大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌和沙門(mén)氏菌等四種常見(jiàn)禽畜致病菌的體外抑菌活性，并用二倍稀釋法測(cè)定五倍子對(duì)四種細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。試驗(yàn)結(jié)果顯示：與水煎法相比較，超聲波提取法對(duì)五倍子體外抑菌效果的提高并不明顯。

關(guān)鍵詞：五倍子；水煎法；超聲波提取法；體外抑菌

中圖分類(lèi)號(hào)：S859 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2096-3637（2017）09-0006-01

1研究的目的和意義

通過(guò)比較超聲波與水煎提取方法對(duì)五倍子的體外抑菌效果，為超聲波提取其他中藥材提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。

2研究方法

2.1藥液制備

水煎提取法：分別稱(chēng)取五倍子、黃連、黃芩各10g，加蒸餾水100mL，浸泡30min，再將藥材連同浸泡的水置于高壓鍋內(nèi)用102℃，蒸煮20min，之后將蒸煮液過(guò)濾到另一個(gè)燒杯中，再往藥渣的燒杯中加入蒸餾水100mL，再次置于高壓鍋中用102℃，蒸煮20min，第2次過(guò)濾蒸煮液，然后合并2次蒸煮液，用離心機(jī)進(jìn)行離心，離心速度是4000r/min，離心10min，取上清液進(jìn)行濃縮，制備成藥液濃度為1g/mL的蒸煮液，然后置于高壓滅菌鍋中滅菌，滅菌溫度120℃，滅菌時(shí)間30min，最后用牛皮紙封口，放置在4℃的冰箱中備用。

超聲波提取法：分別稱(chēng)取五倍子、黃連、黃芩各10g，加蒸餾水100mL，浸泡30min，再將藥材連同浸泡的水置于超聲波提取器中，用20kHz頻率提取20min，之后將提取液過(guò)濾到另一個(gè)燒杯中，再往藥渣的燒杯中加入蒸餾水100mL，再次置于超聲波提取器中，用20kHz頻率提取20min，第2次過(guò)濾提取液，然后合并兩次提取液，用離心機(jī)進(jìn)行離心，離心速度是4000r/min，離心10min，取上清液進(jìn)行濃縮，制備成藥液濃度為1g/mL的提取液，然后置于高壓滅菌鍋中滅菌，滅菌溫度120℃，滅菌時(shí)間30min，最后用牛皮紙封口，放置在4℃的冰箱中備用。

2.2抑菌活性測(cè)定

采用平皿打孔法測(cè)定供試菌株對(duì)供試中藥敏感度，具體操作步驟：先在無(wú)菌平皿中倒入3～4 mm厚的營(yíng)養(yǎng)瓊脂，待瓊脂冷卻凝固后，用滅菌棉簽蘸取供試菌液均勻涂布在瓊脂表面，再用無(wú)菌玻璃打孔器（直徑6mm）在平皿內(nèi)均勻打5個(gè)孔，然后用滅菌針頭除去孔內(nèi)瓊脂并適當(dāng)封閉孔底，最后用滅菌注射器加入供試藥液，以滿(mǎn)而不溢為宜，做好標(biāo)記后置于37℃恒溫培養(yǎng)18～24 h，觀察結(jié)果。若有抑菌作用，則小孔周?chē)霈F(xiàn)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑菌圈，用游標(biāo)卡尺測(cè)量度抑菌圈直徑。抑菌圈直徑小于10mm為耐藥，10～15mm為中度敏感，大于15mm為高度敏感。

同樣方法做2個(gè)平行測(cè)定，并計(jì)算抑菌圈平均值，剩下的一個(gè)孔不加藥液做空白對(duì)照。

2.3最小抑菌濃度測(cè)定

在超凈工作臺(tái)中取無(wú)菌試管8支，1號(hào)管中加入1.8mL營(yíng)養(yǎng)肉湯，2～8號(hào)管中各加入1mL營(yíng)養(yǎng)肉湯，用移液槍吸取已經(jīng)制備好的濃縮藥液0.2mL，加入1號(hào)管中混勻后，在1號(hào)管中吸取1mL混合液加入2號(hào)管中混勻，再在2號(hào)中吸取1mL混合液加入3號(hào)管中，依次倍比稀釋至7號(hào)管，混勻后自7號(hào)管中棄去1mL混合液，8號(hào)管不加菌液作為空白對(duì)照管。此時(shí)，各管藥液濃度分別為100.0mg/mL、50.0mg/mL、25.0mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.125mg/mL、1.5625mg/mL、0mg/mL。將肉湯培養(yǎng)8h的菌液，用無(wú)菌肉湯稀釋至10～3濃度，然后各管均加入菌液0.2mL，混勻后，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18h，觀察結(jié)果，若肉湯混濁，表示菌液生長(zhǎng)，若肉湯清亮，表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。

2.4最小殺菌濃度測(cè)定

將上述MIC測(cè)定中2～7號(hào)管中的肉湯接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，做好標(biāo)記，置于恒溫箱中37℃培養(yǎng)18h，觀察結(jié)果，以平板中有無(wú)菌株生長(zhǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，以無(wú)菌株生長(zhǎng)的最低濃度作為該藥的最小殺菌濃度（MBC）。

3試驗(yàn)結(jié)果

3.1抑菌活性的測(cè)定結(jié)果

除多殺性巴氏桿菌外，超聲波提取法均提高了五倍子對(duì)其他試供菌的體外抑菌效果；五倍子的超聲波提取液對(duì)埃希氏大腸桿菌呈高度敏感，而其水煎液僅僅呈現(xiàn)中度敏感；對(duì)埃希氏大腸桿菌和沙門(mén)氏菌，五倍子超聲波提取液抑菌效果的提高較為顯著。除沙門(mén)氏菌外，超聲波提取法均提高了黃芩對(duì)其他試供菌的體外抑菌效果。

3.2最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定結(jié)果

超聲波提取法僅降低了五倍子對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度，而對(duì)其他3種細(xì)菌的最小抑菌濃度沒(méi)有影響。超聲波提取法降低了黃芩對(duì)埃希氏大腸桿菌的最小抑菌濃度，不能確定是否影響了黃芩對(duì)金黃色葡萄球菌和多殺性巴氏桿菌的最小抑菌濃度測(cè)定。

3.3最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

超聲波提取法僅降低了五倍子對(duì)金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度，而對(duì)其他3種細(xì)菌的最小殺菌濃度沒(méi)有影響。黃芩水煎液的最小殺菌濃度要比超聲波提取液的最小殺菌濃度小，不能確定超聲波提取法是否影響了黃芩對(duì)多殺性巴氏桿菌的最小殺菌濃度。

相對(duì)于水煎法，超聲波提取法對(duì)五倍子體外抑菌效果的提升并不明顯。

參考文獻(xiàn)

[1]趙麗東， 張華峰， 董靜洲， 等. 淫羊藿苷的超聲波強(qiáng)化提取及其穩(wěn)定性初探[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2007， 16（6）： 285-288.