文 一，張 濤，劉偉江，康 陽，陳 堅(jiān)

環(huán)境保護(hù)部環(huán)境規(guī)劃院，北京 100012

環(huán)境分子診斷技術(shù)在污染場地環(huán)境管理中的應(yīng)用進(jìn)展

文 一，張 濤，劉偉江，康 陽，陳 堅(jiān)

環(huán)境保護(hù)部環(huán)境規(guī)劃院，北京 100012

環(huán)境分子診斷技術(shù)(EMDSs)是有機(jī)單體同位素分析和各種分子生物學(xué)技術(shù)的總稱，將其應(yīng)用于污染場地特征識(shí)別、修復(fù)方案可行性評(píng)估、監(jiān)測和修復(fù)終止等污染場地環(huán)境管理過程中，探明土壤和地下水中污染物生物和非生物降解過程、降解速率及機(jī)制，確定不同污染來源，可彌補(bǔ)傳統(tǒng)污染場地環(huán)境管理方法的不足，具有廣闊的發(fā)展前景。文章綜述了污染場地環(huán)境管理過程及傳統(tǒng)方法的不足，介紹了有機(jī)單體同位素分析和各種分子生物學(xué)技術(shù)的基本原理和用途，并對(duì)各種技術(shù)的特點(diǎn)進(jìn)行闡述和對(duì)比；介紹了EMDSs在污染場地環(huán)境管理中的實(shí)際應(yīng)用，提出了EMDSs的發(fā)展趨勢(shì)。

污染場地； 環(huán)境分子診斷；有機(jī)單體同位素分析；分子生物學(xué)技術(shù)

環(huán)境分子診斷技術(shù)(EMDSs)是利用新興的同位素技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)，分析土壤和地下水等環(huán)境樣本的生物和化學(xué)特征，用于污染場地特征識(shí)別、修復(fù)方案可行性評(píng)估、效果監(jiān)測和修復(fù)結(jié)案等污染場地環(huán)境管理過程[1]。

按照診斷原理，環(huán)境分子診斷技術(shù)主要分為2類：基于同位素的有機(jī)單體同位素分析(CSIA)和基于DNA、RNA等的分子生物學(xué)技術(shù)(MBTs)。這些方法已經(jīng)在醫(yī)藥、國防和工業(yè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，由于傳統(tǒng)的場地環(huán)境管理方法(如水文地質(zhì)調(diào)查、化學(xué)和地球化學(xué)分析等)僅能提供污染物自然衰減是否發(fā)生或者主動(dòng)污染修復(fù)的反應(yīng)速率高低等間接證據(jù)，難以快速和全面支撐污染場地環(huán)境管理決策，而環(huán)境分子診斷技術(shù)通過分析涉及污染物轉(zhuǎn)化過程中的同位素、微生物、基因或者酶等微觀證據(jù)，可以提供更多有效和直接的數(shù)據(jù)，用以完善傳統(tǒng)管理方法的不足[2-3]。近10年來，國內(nèi)外逐漸將環(huán)境分子診斷技術(shù)應(yīng)用在污染場地環(huán)境管理中，據(jù)美國環(huán)保局(USEPA)統(tǒng)計(jì)，2009—2012年已有數(shù)百個(gè)環(huán)境修復(fù)場地在場地污染調(diào)查、監(jiān)測和修復(fù)等過程中使用了環(huán)境分子診斷技術(shù)[4]。中國臺(tái)灣地區(qū)將環(huán)境分子診斷技術(shù)應(yīng)用在油品類污染場地調(diào)查中，在加油站油品泄漏場地中，通過碳同位素分析、特定生物指標(biāo)化合物分析，判斷油品污染的油源的差異，確定受污染的時(shí)間[5]。

在我國，環(huán)境分子診斷技術(shù)的應(yīng)用和研究還處于起步階段，主要利用CSIA和MBTs對(duì)污染物的遷移轉(zhuǎn)化機(jī)制進(jìn)行探索性研究，在實(shí)際污染場地環(huán)境管理中應(yīng)用較少[6-8]。本文綜述了環(huán)境分子診斷技術(shù)的種類、適用性及在污染場地環(huán)境管理中運(yùn)用，并提出了下一步研究的方向。

1 污染場地環(huán)境管理過程

國內(nèi)外的污染場地環(huán)境管理指南或規(guī)范中，一般將污染場地環(huán)境管理分為4個(gè)階段：污染場地特征識(shí)別、污染修復(fù)、監(jiān)測和修復(fù)終止[9]。污染場地特征識(shí)別的作用是確定污染類型、刻畫污染程度和空間分布、建立場地概念模型，為開展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和實(shí)施地下水修復(fù)方案提供信息。污染修復(fù)包括修復(fù)方案選擇、修復(fù)工程設(shè)計(jì)、可行性評(píng)估和修復(fù)工程實(shí)施等過程。污染環(huán)境場地管理中的監(jiān)測，包括監(jiān)測修復(fù)技術(shù)可行性評(píng)估中的修復(fù)效果、修復(fù)工程實(shí)施過程中污染物和副產(chǎn)物的濃度和溶質(zhì)通量變化趨勢(shì)等，以評(píng)價(jià)修復(fù)的實(shí)際效果。污染修復(fù)終止是指當(dāng)實(shí)施修復(fù)工程后，場地的土壤、水和土壤氣等環(huán)境介質(zhì)中污染物的濃度不會(huì)對(duì)人群及環(huán)境產(chǎn)生危害時(shí)，停止污染場地修復(fù)行動(dòng)。

傳統(tǒng)的污染場地環(huán)境管理是通過對(duì)土壤和地下水等環(huán)境樣品的采樣分析，獲得污染物和副產(chǎn)物的濃度和溶質(zhì)通量的變化趨勢(shì)，為環(huán)境管理各階段提供決策信息。土壤和地下水環(huán)境樣品的傳統(tǒng)分析方法存在局限性，例如，傳統(tǒng)的污染物分析利用氣相色譜或者氣質(zhì)聯(lián)用定量污染物的含量，僅能提供少量的污染物信息，且無法提供污染物的同位素信息，而污染物的同位素變化是表征污染來源、降解速率和降解機(jī)制的可靠指標(biāo)；在生物分析上，傳統(tǒng)方法是利用異養(yǎng)菌平板計(jì)數(shù)法或者最大近似數(shù)分析法估計(jì)微生物的數(shù)量和生物降解的可能性，然而近99%的微生物不能在實(shí)驗(yàn)室接種培養(yǎng)，基于平板培養(yǎng)的方法并不能充分評(píng)估參與污染物生物降解的微生物菌落的規(guī)模和組成[10]。因此，傳統(tǒng)的方法無法精確判斷目標(biāo)污染物發(fā)生的生物和非生物過程的降解機(jī)理、降解速率和降解效果，也不能有效區(qū)分污染物來源[11]，難以快速和準(zhǔn)確地為污染特征識(shí)別、污染修復(fù)效果確定和修復(fù)技術(shù)調(diào)整等提供數(shù)據(jù)支持。

采用環(huán)境分子診斷技術(shù)作為污染場地環(huán)境管理過程中傳統(tǒng)方法的補(bǔ)充，可以從多種疑似污染來源中準(zhǔn)確判斷污染來源[12-13]，可以提高對(duì)污染場地環(huán)境中微生物群落及其降解污染物能力的了解[13]，掌握降解污染物的非生物過程及機(jī)制[14]，提供詳細(xì)的生物和非生物降解發(fā)生和反應(yīng)速率等信息[15]，確定監(jiān)測自然衰減或者主動(dòng)修復(fù)策略，估計(jì)滿足修復(fù)目標(biāo)達(dá)到的時(shí)間，為污染場地環(huán)境管理各階段提供有效和更直接的數(shù)據(jù)支撐。環(huán)境分子診斷技術(shù)在污染場地環(huán)境管理的各階段的應(yīng)用見圖1。

圖1 環(huán)境分子診斷技術(shù)在污染場地環(huán)境管理各階段中的應(yīng)用Fig.1 Potential uses of EMDs in site management

2 環(huán)境分子診斷技術(shù)的介紹

環(huán)境分子診斷技術(shù)的類別見圖2。

2.1 有機(jī)單體同位素分析技術(shù)

有機(jī)污染物在發(fā)生化學(xué)或生物化學(xué)反應(yīng)等過程中，由于動(dòng)力學(xué)同位素效應(yīng)導(dǎo)致殘留物中重同位素富集，產(chǎn)物中重同位素貧化[16]，可利用同位素質(zhì)譜分析儀或者同位素質(zhì)譜儀與氣相或液相色譜聯(lián)用等方法測定殘留物中特定元素重同位素的富集值(或產(chǎn)物中重同位素貧化)，以判斷目標(biāo)污染物是否發(fā)生轉(zhuǎn)化[17]。目前，在單體碳同位素中應(yīng)用較多的元素為氫(2H/1H)、碳(13C/12C)、氮(15N/14N)、氧(18O/16O和17O/16O)和氯(37Cl/35Cl)[18]。

在污染場地環(huán)境管理中，有機(jī)單體同位素分析技術(shù)可應(yīng)用于監(jiān)測和量化污染物的降解過程和確定環(huán)境污染物的來源。在許多非生物和生物反應(yīng)過程中，由于元素的重同位素鍵強(qiáng)度高于輕同位素，因此輕同位素會(huì)優(yōu)先從反應(yīng)物中轉(zhuǎn)移到產(chǎn)物中(正常的同位素分餾)，而重同位素則會(huì)在殘留反應(yīng)物中富集，可以通過這個(gè)過程來判斷污染物是否發(fā)生降解。以13C/12C為例，當(dāng)發(fā)生降解反應(yīng)時(shí)，底物中13C發(fā)生富集，其富集程度的大小與降解程度有關(guān)。HUNKELER等[19]研究苯的微生物降解時(shí)，發(fā)現(xiàn)底物中13C發(fā)生顯著的富集，其中δ13C值為+3.4‰(f<0.1)。在特定的環(huán)境領(lǐng)域下，化合物的同位素組成保持不變，可直接利用其同位素組成進(jìn)行來源示蹤，確定污染物的來源。CSIA已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于評(píng)價(jià)石油烴的原始來源，包括判別不同地區(qū)的原油以及通過這些原油生產(chǎn)的汽油[20]。SHOUAKAR等[21]通過H同位素組成，區(qū)分環(huán)境中的三氯乙烯是來自于工業(yè)三氯乙烯還是通過還原脫氯作用由四氯乙烯降解生成，工業(yè)生產(chǎn)的三氯乙烯中的δ2H的值為100‰或更高，高于通過四氯乙烯還原脫氯產(chǎn)生的三氯乙烯中的δ2H的值。由于地下水中δ2H的值為0‰或者更低，若監(jiān)測到TCE中δ2H的值超過100‰，那么三氯乙烯的來源為工業(yè)生產(chǎn)。

2.2 分子生物學(xué)技術(shù)

通常情況下，特定的污染物在特定的微生物作用下，發(fā)生生物轉(zhuǎn)化，基于分子生物技術(shù)的環(huán)境分子診斷技術(shù)，可檢測和定量作用特定污染物的微生物，識(shí)別產(chǎn)生降解作用的未知微生物，確定微生物降解特定污染物的能力，基于上述能力，可以用來確定污染物的降解機(jī)理和降解效率，為污染場地環(huán)境管理提供數(shù)據(jù)支持。目前，運(yùn)用在污染場地環(huán)境管理的分子生物學(xué)技術(shù)包括定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)、微生物指紋圖譜、DNA微探針陣列、穩(wěn)定同位素探針(SIP)、酶活性探針(EAPs)和熒光原位雜交(FISH)[4]，各種技術(shù)的原理和用途見表1。

2.3 環(huán)境分子診斷技術(shù)的適用性

環(huán)境分子診斷技術(shù)中包含了多種技術(shù)，可以提供不同或相似的環(huán)境場地管理信息，在實(shí)際使用中，需要根據(jù)不同技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)、費(fèi)用和技術(shù)成熟度(見表2)，選擇合適的技術(shù)在實(shí)際污染場地環(huán)境管理中運(yùn)用，如CSIA除了提供監(jiān)測和量化污染物的降解過程外，還能確定環(huán)境污染物的來源，分子生物學(xué)技術(shù)主要用于提供污染物降解過程中功能微生物的種類、數(shù)量和活性等信息。在分子生物學(xué)技術(shù)中，有些技術(shù)可以提供相同的信息，如qPCR、FISH等都能提供微生物基因序列信息。環(huán)境分子診斷技術(shù)的測試費(fèi)用為225～5 000美元，技術(shù)成熟度也有商業(yè)可利用或者還處于實(shí)驗(yàn)室研究階段之分[1,4]。

表1 基于分子生物的環(huán)境分子診斷技術(shù)

表2 環(huán)境分子診斷技術(shù)的適用性

2.4 在污染場地環(huán)境管理中的應(yīng)用

環(huán)境分子診斷技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于多環(huán)芳烴、石油烴、氯代烴、農(nóng)藥殘留物等有機(jī)污染場地的場地特征識(shí)別、修復(fù)可行性評(píng)估以及修復(fù)效果的判定[30]。表3概括了近年來CSIA在污染場地環(huán)境管理中實(shí)際應(yīng)用案例，從實(shí)際應(yīng)用可以看出，CSIA在氯代烴污染場地的應(yīng)用最為廣泛，并且涉及了污染場地環(huán)境管理的各個(gè)階段。以新澤西州受三氯乙烯污染地下水的航空基地的場地特征識(shí)別為例，前期的地下水采樣分析結(jié)果表明，該場地存在2個(gè)明顯的地下水氯代烴高值區(qū)，但不能確認(rèn)是否存在2個(gè)污染源。利用CSIA技術(shù)分析地下水中δ13C，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高值區(qū)中的δ13C分別為-38.83‰和-32.44‰，存在明顯差異，表明存在2個(gè)明顯的污染源[4]。

3 結(jié)語

目前，隨著我國工業(yè)化進(jìn)程的發(fā)展與擴(kuò)大，在華北平原、長三角和珠三角等地下水使用量大或者經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的地區(qū)出現(xiàn)了大量的土壤與地下水污染場地，尋求有效的方法，開展快速、準(zhǔn)確和有效的環(huán)境管理迫在眉睫。從國外研究成果與實(shí)際應(yīng)用來看，環(huán)境分子診斷技術(shù)在污染場地特征識(shí)別、污染修復(fù)、監(jiān)測和修復(fù)終止等污染場地環(huán)境管理中發(fā)揮了重要的作用，從污染溯源、確定生物和非生物降解作用、效果和機(jī)制方面提供更多有效和直接的數(shù)據(jù)，可完善傳統(tǒng)環(huán)境管理方法的不足，提高環(huán)境管理決策的效率和準(zhǔn)確度，因此，將環(huán)境分子診斷技術(shù)運(yùn)用到我國污染場地環(huán)境管理中是一個(gè)重要的發(fā)展方向。我國在應(yīng)用環(huán)境分子診斷技術(shù)方面具備了良好的基礎(chǔ)，同位素分析技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于我國醫(yī)藥、工業(yè)領(lǐng)域，具備完備的技術(shù)和硬件條件，并實(shí)現(xiàn)了商業(yè)利用，將其利用到污染場地環(huán)境管理中具有較高的經(jīng)濟(jì)和技術(shù)可行性。下一步需要研究不同污染物在污染場地環(huán)境介質(zhì)中遷移轉(zhuǎn)化過程中同位素的反應(yīng)類型和分餾機(jī)理，不同污染物的降解過程與微生物的DNA、代謝蛋白質(zhì)等的相互關(guān)系，使技術(shù)能應(yīng)用到實(shí)際污染場地環(huán)境管理中。

表3 環(huán)境分子診斷技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用案例

環(huán)境分子診斷技術(shù)也存在一定的局限性，CSIA目前僅能分析整個(gè)污染物中的同位素組成，而不能定位污染物中特定位置的原子；另外，CSIA技術(shù)主要用于有機(jī)污染物的場地環(huán)境管理中，在重金屬污染物的場地環(huán)境管理中應(yīng)用較少，今后可加強(qiáng)它們的研究，拓寬CSIA技術(shù)的適用范圍，進(jìn)一步確定有機(jī)和重金屬環(huán)境污染物的遷移轉(zhuǎn)化機(jī)制，為污染場地環(huán)境管理提供更多的數(shù)據(jù)支撐。在分子生物學(xué)技術(shù)上，隨著高通量生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，將宏基因組學(xué)、環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和高通量測序等新手段應(yīng)用于污染場地環(huán)境管理中是新的發(fā)展方向，這些技術(shù)能分析環(huán)境中全部的微生物群落的結(jié)構(gòu)和功能，可以迅速分析多種環(huán)境樣品，提供更全面和快速的環(huán)境微生物群落生物降解過程的信息。

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Application of Environmental Molecular Diagnostics in Environmental Management of Contaminated Site

WEN Yi， ZHANG Tao， LIU Weijiang， KANG Yang， CHEN Jian

Chinese Academy for Environmental Planning, Beijing 100012, China

Environmental molecular diagnostics (EMDSs) is a series of techniques by combining chemical techniques, specifically compound specific isotope analysis (CSIA), and a variety of molecular biological techniques (MBTs), which have application in each phase of environmental site management, including site characterization identification, feasibility evaluation of remediation plan, monitoring and closure activities. EMDSs can complement these data for conventional management by providing direct measurements of the abiotic and biotic degradation process and relative rates of various degradation processes. In addition, EMDSs can be used to identify the source of contamination when several sources are suspected. The application of EMDSs has a bright prospect in environmental site management. The paper reviews the environmental management process for contaminated site and limitation of conventional methods, introduces the fundamental principal and application of EMDSs, the characteristic and the application of EMDSs, and practical application in environmental site management. Future prospect of EMDSs is also presented.

contaminated site; environmental molecular diagnostics; specifically compound specific isotope analysis; molecular biological techniques

2016-01-26;

2016-05-23

全國地下水基礎(chǔ)環(huán)境狀況調(diào)查評(píng)估項(xiàng)目(20110302)

文 一(1980-)，女，四川資陽人，博士，副研究員。

陳 堅(jiān)

X830.5

A

1002-6002(2017)01- 0029- 07

10.19316/j.issn.1002-6002.2017.01.05