周凌云， 余小紅， 耿圓圓， 華 燕

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖241002；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

小遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)化學(xué)成分及生物活性研究

ZHOU Lingyun

周凌云1,2， 余小紅2， 耿圓圓2， 華 燕2*

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖241002；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

以小遠(yuǎn)志干燥根莖為原料，采用乙醇提取、硅膠柱層析、Sephadex LH-20、MCI-gel和半制備型HPLC分離等方法對(duì)小遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行研究。從中分離得到18個(gè)口山酮類(lèi)化合物，根據(jù)理化性質(zhì)及ESI-MS、1H NMR、13C NMR等波譜數(shù)據(jù)，分別鑒定為：1,7-二羥基口山酮(1)，3,6-二羥基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮(2)，1,7-二羥基-5,6-二甲氧基口山酮(3)，1,5-二羥基-6,7-二甲氧基口山酮(4)，6-羥基-1,7-二甲氧基口山酮 (5)，7-羥基-1-甲氧基口山酮(6)，3,8-二羥基-1,2,4-三甲氧基口山酮(7)，6,8-二羥基-1,2,3-三甲氧基口山酮(8)，1,3,6-三羥基-2,7,8-三甲氧基口山酮(9)，3-羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮(10)，1,3,7-三羥基口山酮(11)，1,6-二羥基-2,3-二氧亞甲基-7,8-二甲氧基口山酮(12)，1,7-二羥基-2,3-二甲氧基口山酮(13)，1,6-二羥基-5,7-二甲氧基口山酮(14)，3,7-二羥基-1,2-二甲氧基口山酮(15)，3,7-二羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮(16)，1,2,3,7-四甲氧基口山酮(17)，1,6-二羥基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮(18)，除化合物13外，其它化合物均為首次從該植物中分離得到。對(duì)其中分離所得量較多的化合物1～7進(jìn)行了抗氧化及抗菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)化合物4和1有較好的抗氧化活性，對(duì)ABTS·的IC50值分別為12和13 mg/L；化合物3對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值為217 μmol/L。

小遠(yuǎn)志；口山酮類(lèi)化學(xué)成分; 抗氧化；抗菌

口山酮是一類(lèi)重要的天然產(chǎn)物，具有廣泛的生理活性[1-2]，在很多高等植物中均有分布，而該類(lèi)化學(xué)成分最重要的來(lái)源為遠(yuǎn)志科植物，該科包括22個(gè)屬，1 300余種[3]。小遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)為云南特有品種，僅分布在云南中部和西北部。小遠(yuǎn)志民間藥用清熱解毒，祛風(fēng)止痛[4]。國(guó)內(nèi)外對(duì)該種植物化學(xué)成分研究較少,主要為黃酮類(lèi)和多糖類(lèi)成分[5-9]。現(xiàn)代藥理研究表明小遠(yuǎn)志多糖有抗腫瘤活性[10]，小遠(yuǎn)志醇提取物有抗蛇毒活性[11]。然而，對(duì)于小遠(yuǎn)志口山酮類(lèi)化合物報(bào)道較少，宛瑜等[5]從小遠(yuǎn)志中分離鑒定了7個(gè)口山酮類(lèi)成分，但對(duì)其生物活性沒(méi)有進(jìn)行深入研究。為充分揭示小遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)成分，發(fā)掘其藥用價(jià)值，本研究對(duì)小遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分析，并進(jìn)一步測(cè)定了其抗氧化和抗菌活性。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

小遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)，采自云南省昭通市永善縣，由西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院杜凡教授鑒定為遠(yuǎn)志科植物小遠(yuǎn)志，標(biāo)本(2012010)保存在西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院植物資源利用系藥用植物教研室。柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠，青島海洋化工廠；反相填充材料RP-18(40～60 μm)，Merk公司；Sephadex LH-20 (40～70 μm)，瑞典Amersham Pharmacia公司；D101 大孔樹(shù)脂，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司；MCI-gel (70～150 μm)，Mitsubishi Chemical Corporation；常用分離試劑，工業(yè)級(jí)重蒸；乙腈，色譜純；ABTS，北京酷來(lái)搏科技有限公司；萬(wàn)古霉素，上海生工生物工程技術(shù)有限公司。白色念珠菌(Moniliaalbican)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)和綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)，均由西南林業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)在甲醇中由Waters Xevo TQ-S三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀或Bruker HTC/Esquire spectrometer液相-離子阱色譜聯(lián)用儀測(cè)定；1H NMR和13C NMR譜由Bruker AM-400 MHz和Avance III-600 MHz超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定；半制備采用Agilent-HP 1100高效液相色譜儀，HPLC半制備柱(Agilent，Zorbax SB-C18，250 mm × 9.4 mm，5 μm)進(jìn)行分離純化。UV-2450紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京島津儀器有限公司。

1.2 提取分離

小遠(yuǎn)志干燥根莖約5 kg，粉碎后過(guò)篩(178 μm)，用75%的乙醇回流提取3次，每次40 L,分別提取4、2和2 h,合并提取液，減壓濃縮得到浸膏約1.7 kg。浸膏稀釋3倍，用溫水超聲波溶解，抽濾后過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂，先用9 L水洗脫，再用12 L 65%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮得到500.0 g粗提樣品，經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿-甲醇 (30 ∶1～ 0 ∶1，體積比) 梯度洗脫，合并后得到8個(gè)部分Fr.1～Fr.8。

Fr.1 (6.1g) 經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(20 ∶1～ 0 ∶1，體積比) 洗脫，TLC檢測(cè)后合并得到5個(gè)組分Fr.1.1～ Fr.1.5。組分Fr.1.2經(jīng)過(guò)結(jié)晶和重結(jié)晶后得到化合物1 (620.7 mg)；組分Fr.1.3經(jīng)過(guò)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(15 ∶1～3 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，得到了化合物3 (169.7 mg)，4(71.9 mg) 和5(50.0 mg)；組分Fr.1.4經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比15 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，體積比20 ∶1～5 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)柱層析，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (45 ∶55, 體積比) 為流動(dòng)相，得到了化合物13 (1.8 mg)，18 (1.3 mg)。

Fr.2 (6.6 g) 首先用MCI-gel進(jìn)行脫色，脫色后的樣品經(jīng)TLC檢測(cè)后合并得到4個(gè)組分Fr.2.1～ Fr.2.4。組分Fr.2.1經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比10 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，體積比20 ∶1～3 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最終得到了化合物6 (15.1 mg) 和7 (23.8 mg)；組分Fr.2.2經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比10 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比10 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (40 ∶60, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物9 (3.0 mg)；組分Fr.2.3經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比4 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比8 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (38 ∶72, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物12 (1.8 mg)。

Fr.3 (16.5 g) 首先用MCI-gel進(jìn)行脫色，脫色后的樣品經(jīng)RP-18，用甲醇-水(30 ∶70～90 ∶10，體積比)洗脫，TLC檢測(cè)后合并得到4個(gè)組分Fr.3.1～ Fr.3.4。組分Fr.3.1經(jīng)過(guò)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(5 ∶1～0 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (38 ∶62, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物10 (3.0 mg)和11 (4.2 mg)；組分Fr.3.2經(jīng)過(guò)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(2 ∶1～0 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (35 ∶65, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物14 (3.0 mg)，15 (2.0 mg)，16 (2.0 mg) 和17 (1.3 mg)；組分Fr.3.3經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比5 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比8 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (35 ∶65, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物2 (2.5 mg) 和17 (1.0 mg)；組分Fr.3.4經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比3 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比5 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (33 ∶67, 體積比) 為流動(dòng)相，最終得到了化合物8 (1.2 mg)。

1.3 生物活性測(cè)定

1.3.1 抗氧化活性測(cè)定 參考文獻(xiàn)[12]報(bào)道的ABTS總自由基清除試驗(yàn)方法，測(cè)定化合物1～7(分離所得量少的單體化合物未進(jìn)行測(cè)定)及對(duì)照品維生素C的抗氧化能力。

1.3.2 抗菌活性測(cè)定 參考文獻(xiàn)[13～14]報(bào)道的抗菌實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定化合物1～7和對(duì)照品萬(wàn)古霉素對(duì)白色念珠菌(M.albican)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、大腸埃希氏菌(E.coli)和綠膿桿菌(P.aeruginosa)的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針晶；分子式：C13H8O4，相對(duì)分子質(zhì)量為228；ESI-MS(m/z)：227 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.70 (1H, s, OH-1), 9.04 (1H, s, OH-7), 7.67 (1H, t,J=8.4 Hz, H-3), 7.58 (1H, d,J=3.1 Hz, H- 8), 7.49 (1H, d,J=9.3 Hz, H-5), 7.41 (1H, dd,J=9.1, 3.1 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4, Hz, H- 4), 6.74 (1H, d,J=8.3Hz, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：162.7 (s, C-1), 110.5 (d, C-2), 137.8 (d, C-3), 107.7 (d, C- 4), 120.2 (d, C-5), 126.1 (d, C- 6), 155.0 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.9 (s, C-9), 157.3 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 107.8 (s, C-9a), 151.0 (s, C-10a)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基口山酮。

化合物2：黃色粉末；分子式：C17H16O8，相對(duì)分子質(zhì)量為348；ESI-MS(m/z)：349 [M+H]+，371 [M+Na]+和387 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：6.48 (2H, s, H- 4, 5), 3.78 (6H, s, 1, 8-OMe), 3.73 (6H, s, 2, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1, 8), 138.9 (s, C-2, 7), 158.4 (s, C-3, 6), 98.9 (d, C- 4, 5), 172.5 (s, C-9), 153.0 (s, C- 4a, 10a), 108.2 (s, C- 8a, 9a), 61.4 (q, 1, 8-OMe), 60.6 (q, 2, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)照基本一致，故鑒定為3,6-二羥基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物3：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J= 8.4 Hz, H-3), 6.84 (1H, d,J= 8.1 Hz, H- 4), 6.68 (1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J= 11.1 Hz, H-2), 3.84 (3H, s, 6-OMe), 3.77 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：161.2 (s, C- 1), 110.0 (d, C-2), 136.1 (d, C-3), 106.0 (d, C- 4), 153.3 (s, C-5), 138.9 (s, C- 6), 153.8 (s, C-7), 99.3 (d, C- 8), 180.4 (s, C-9), 154.8 (s, C- 4a), 107.9 (s, C- 8a), 107.5 (s, C-9a), 154.8 (s, C-10a), 61.7 (q, 5-OMe), 60.8 (q, 6-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基-5,6-二甲氧基口山酮。

化合物4：黃色結(jié)晶；分子式：C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：12.88 (1H, s, OH-1), 7.65 (1H, t,J=8.3 Hz, H-3), 7.26 (1H, s, H- 8), 7.07 (1H, d,J=7.7 Hz, H- 4), 6.76 (1H, d,J=7.5 Hz, H-2), 3.90 (3H, s, 6-OMe), 3.89 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.8 (s, C-1), 110.0 (d, C-2), 136.4 (d, C-3), 107.2 (d, C- 4), 134.9 (s, C-5), 146.5 (s, C- 6), 148.2 (s, C-7), 99.4 (d, C- 8), 180.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 111.2 (s, C- 8a), 107.7 (s, C-9a), 146.3 (s, C-10a), 61.0 (q, 6-OMe), 56.0 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,5-二羥基- 6,7-二甲氧基口山酮。

化合物5：白色粉末；分子式：C15H12O5，相對(duì)分子質(zhì)量為272；ESI-MS(m/z)：317 [M+K]+，311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：7.62 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.39 (1H, s, H- 8), 7.04 (1H, d,J=7.8 Hz, H- 4), 6.90 (1H, d,J=8.2 Hz, H-2), 6.84 (1H, s, H-5), 3.86 (3H, s, 1-OMe), 3.84 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.0 (s, C-1), 106.1 (d, C-2), 134.4 (d, C-3), 109.5 (d, C- 4), 102.3 (d, C-5), 153.8 (s, C- 6), 146.0 (s, C-7), 105.6 (d, C- 8), 173.6 (s, C-9), 157.4 (s, C- 4a), 114.4 (s, C- 8a), 111.3 (s, C-9a), 150.5 (s, C-10a), 56.1 (q, 1-OMe), 56.8 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對(duì)照基本一致，故鑒定為6-羥基-1,7-二甲氧基口山酮。

化合物6：黃色粉末；分子式：C14H10O4，相對(duì)分子質(zhì)量為242；ESI-MS(m/z)：265 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.67 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.42 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.38 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.21 (1H, dd,J=9.2, 2.5 Hz, H- 6), 7.08 (1H, d,J=8.3 Hz, H- 4), 6.92 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-2), 3.87 (3H, s, 1-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：160.2 (s, C-1), 109.7 (d, C-2), 135.5 (d, C-3), 105.9 (d, C- 4), 118.9 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 153.9 (s, C-7), 108.9 (d, C- 8), 174.9 (s, C-9), 157.5 (s, C- 4a), 123.1 (s, C- 8a), 111.2 (s, C-9a), 148.1 (s, C-10a), 56.3 (q, 1-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對(duì)照基本一致，故鑒定為7-羥基-1-甲氧基口山酮。

化合物7：黃色晶體；分子式：C16H14O7，相對(duì)分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 7.58 (1H, t,J= 8.1 Hz, H- 6), 6.95 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.70 (1H, d,J=8.0 Hz, H-7), 3.82 (3H, s, 1-OMe)，3.73 (3H, s, 2-OMe)，3.73 (3H, s, 4-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：133.4 (s, C-1), 150.3 (s, C-2), 153.3 (s, C-3), 140.5 (s, C- 4), 107.6 (d, C-5), 137.3 (d, C- 6), 111.4 (d, C-7), 162.9 (s, C- 8), 182.5 (s, C-9), 149.1 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 109.5 (s, C-9a), 156.6 (s, C-10a), 62.0 (q, 1-OMe), 61.8 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 4-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對(duì)照基本一致，故鑒定為3,8-二羥基-1,2,4-三甲氧基口山酮。

化合物8：黃色粉末；分子式：C16H14O7，相對(duì)分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：317 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 8.28 (1H, s, OH- 6), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.44 (1H, s, H-7), 6.23 (1H, d, s, H-5), 3.81 (3H, s, 1-OMe)，3.79 (3H, s, 2-OMe)，3.74 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.5 (s, C-1), 139.7 (s, C-2), 154.1 (s, C-3), 96.3 (d, C- 4), 91.4 (d, C-5), 164.8 (s, C- 6), 99.5 (d, C-7), 162.5 (s, C- 8), 178.9 (s, C-9), 155.9 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 102.3 (s, C-9a), 155.9 (s, C-10a), 61.3 (q, 1-OMe), 60.1 (q, 2-OMe), 55.6 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]對(duì)照基本一致，故鑒定為6,8-二羥基-1,2,3-三甲氧基口山酮。

化合物9：黃色粉末；分子式：C16H14O8，相對(duì)分子質(zhì)量為334；ESI-MS(m/z)：335 [M+H]+，357 [M+Na]+和373 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.64 (1H, s, H-5), 6.32 (1H, s, H- 4), 3.95 (3H, s, 8-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe), 3.85 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 131.9 (s, C-2), 155.9 (s, C-3), 94.4 (d, C- 4), 100.6 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 140.2 (s, C-7), 153.9 (s, C- 8), 181.8 (s, C-9), 159.2 (s, C- 4a), 108.4 (s, C- 8a), 103.8 (s, C-9a), 155.8 (s, C-10a), 60.9 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 7-OMe), 62.4 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,3,6-三羥基-2,7,8-三甲氧基口山酮。

化合物10：黃色粉末；分子式：C16H14O6，相對(duì)分子質(zhì)量為302；ESI-MS(m/z)：301 [M+H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.58 (1H, t,J=8.2 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.87 (1H, d,J=8.1 Hz, H-7), 6.54 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 8-OMe)，3.79 (3H, s, 1-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.8 (s, C-1), 139.2 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 98.9 (d, C- 4), 108.9 (d, C-5), 133.9 (d, C- 6), 106.1 (d, C-7), 159.9 (s, C- 8), 173.1 (s, C-9), 152.8 (s, C- 4a), 112.3 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 156.4 (s, C-10a), 61.4 (q, 1-OMe), 60.5 (q, 2-OMe), 56.0 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對(duì)照基本一致，故鑒定為3-羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物11：黃色粉末；分子式：C13H8O5，相對(duì)分子質(zhì)量為244；ESI-MS(m/z)：243 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.96 (1H, s, OH-1), 754 (1H, s, H- 8), 7.39 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.29 (1H, d,J=8.8 Hz, H-6), 6.38 (1H, s, H- 4), 6.23 (1H, s, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：164.5 (s, C-1), 98.6 (d, C-2), 166.5 (s, C-3), 94.5 (d, C- 4), 119.6 (d, C-5), 125.0 (d, C- 6), 154.9 (s, C-7), 109.2 (d, C- 8), 181.9 (s, C-9), 158.9 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 103.3 (s, C-9a), 150.6 (s, C-10a)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,3,7-三羥基口山酮。

化合物12：黃色粉末；分子式：C16H12O8，相對(duì)分子質(zhì)量為332；ESI-MS(m/z)：333 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.57 (1H, s, H-5), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.10 (2H, s, -O-CH2-O), 3.93 (3H, s, 8-OMe)，3.86 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.2 (s, C-1), 130.3 (s, C-2), 159.5 (s, C-3), 89.5 (d, C- 4), 100.9 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 141.2 (s, C-7), 155.3 (s, C- 8), 181.5 (s, C-9), 153.5 (s, C- 4a), 107.4 (s, C- 8a), 106.1 (s, C-9a), 156.3 (s, C-10a), 103.9 (t, -O-CH2-O), 62.3 (q, 8-OMe), 61.6 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-2,3-二氧亞甲基-7,8-二甲氧基口山酮。

化合物13：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J=8.4 Hz, H-5), 6.84(1H, d,J=8.1 Hz, H- 4), 6.68(1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J=11.1 Hz, H- 6), 3.84 (3H, s, 2-OMe), 3.77 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 132.8 (s, C-2), 161.6 (s, C-3), 91.9 (d, C- 4), 120.0 (d, C-5), 125.7 (d, C- 6), 156.3 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 104.7 (s, C-9a), 151.3 (s, C-10a), 61.1 (q, 2-OMe), 56.9 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基-2,3-二甲氧基口山酮。

化合物14：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：287 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.41 (1H, s, OH-1), 8.25 (1H, s, OH-6), 7.57 (1H, t,J=8.1 Hz, H-3), 7.16 (1H, s, H- 8), 7.00 (1H, d,J=7.9 Hz, H- 4), 6.70 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-2), 3.85 (3H, s, 7-OMe), 3.83 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：161.0 (s, C-1), 109.5 (d, C-2), 135.4 (d, C-3), 106.8 (d, C- 4), 134.8 (s, C-5), 148.5 (s, C- 6), 147.4 (s, C-7), 98.9 (d, C- 8), 180.2 (s, C-9), 155.4 (s, C- 4a), 117.8 (s, C- 8a), 107.6 (s, C-9a), 134.7 (s, C-10a), 60.2 (q, 5-OMe), 55.7 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-5,7-二甲氧基口山酮。

化合物15：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：289 [M+H]+，311 [M+Na]+和327 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：7.49 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.30 (1H, d,J=9.0 Hz, H-5), 7.17 (1H, dd,J=8.8, 2.8 Hz, H- 6), 6.59 (1H, s, H- 4), 3.92 (3H, s, 1-OMe), 3.87 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：155.0 (s, C-1), 141.1 (s, C-2), 156.8 (s, C-3), 101.1 (d, C- 4), 119.4 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 150.0 (s, C-7), 110.0 (d, C- 8), 177.0 (s, C-9), 162.1 (s, C- 4a), 124.2 (s, C- 8a), 110.0 (s, C-9a), 155.0 (s, C-10a), 62.2 (q, 1-OMe), 61.6 (q, 2-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]對(duì)照基本一致，故鑒定為3,7-二羥基-1,2-二甲氧基口山酮。

化合物16：黃色粉末；分子式：C16H14O7，相對(duì)分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.17 (1H, d,J=8.9 Hz, H- 6), 7.04 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 6.27 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 1-OMe)，3.80 (3H, s, 8-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1), 138.1 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 99.4 (d, C- 4), 112.6 (d, C-5), 121.9 (d, C- 6), 146.3 (s, C-7), 145.3 (s, C- 8), 173.4 (s, C-9), 154.1 (s, C- 4a), 117.2 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 148.8 (s, C-10a), 61.5 (q, 1-OMe), 61.2 (q, 2-OMe), 60.4 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對(duì)照基本一致，故鑒定為3,7-二羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物17：黃色粉末；分子式：C17H16O6，相對(duì)分子質(zhì)量為316；ESI-MS(m/z)：315 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.68 (1H, d,J=2.3 Hz, H- 8), 7.37 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.24 (1H, dd,J=8.8, 2.3 Hz, H- 6), 6.63 (1H, s, H- 4), 4.13 (3H, s, 1-OMe), 4.03 (3H, s, 2-OMe), 3.93 (3H, s, 3-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：153.4 (s, C-1), 139.5 (d, C-2), 158.7 (s, C-3), 96.1 (d, C- 4), 116.5 (s, C-5), 123.6 (s, C- 6), 154.5 (s, C-7), 106.3 (s, C- 8), 175.2 (s, C-9), 156.1 (s, C- 4a), 122.7 (s, C- 8a), 110.3 (s, C-9a), 149.7 (s, C-10a), 61.9 (q, 1-OMe), 61.3 (q, 2-OMe), 56.1 (q, 3-OMe), 55.8 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,2,3,7-四甲氧基口山酮。

化合物18：黃色粉末；分子式：C17H16O8，相對(duì)分子質(zhì)量為348；ESI-MS(m/z)：347 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, CDCl3)δ：13.32 (1H, s, OH-1), 6.44 (1H, s, H-2), 6.33 (1H, s, H- 4), 4.04 (3H, s, 8-OMe), 4.02 (3H, s, 5-OMe), 3.98 (3H, s, 7-OMe), 3.88 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, CDCl3)δ：163.6 (s, C-1), 97.3 (d, C-2), 166.1 (s, C-3), 92.3 (d, C- 4), 138.0 (s, C-5), 151.6 (s, C- 6), 148.4 (s, C-7), 131.7 (s, C- 8), 180.3 (s, C-9), 156.6 (s, C- 4a), 108.7 (s, C- 8a), 103.6 (s, C-9a), 147.3 (s, C-10a), 62.1 (q, 8-OMe), 61.8 (q, 5-OMe), 61.8 (q, 7-OMe), 55.8 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]對(duì)照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物1～18的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

2.2 生物活性測(cè)定結(jié)果

2.2.1 抗氧化活性 以Vc(IC50= 7 mg/L)作為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)試了化合物1～7對(duì)ABTS自由基的清除能力，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示化合物1和4具有較好的抗氧化活性，其IC50值分別為13和12 mg/L。

表1 化合物1～7對(duì)ABTS自由基的清除能力

圖1 化合物1～18的結(jié)構(gòu)

2.2.2 抗菌活性 以萬(wàn)古霉素(MIC=0.69 μmol/L，MBC=1.38 μmol/L)作為陽(yáng)性對(duì)照，所測(cè)定的化合物1～7中僅化合物3對(duì)金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出一定的抑制作用，其MIC值為217 μmol/L。

3 結(jié) 論

本研究對(duì)小遠(yuǎn)志中口山酮化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離到了18個(gè)化合物，除化合物13外，其它化合物均為首次從該植物中分離得到。對(duì)分離所得量較多的化合物1～7進(jìn)行抗氧化和抗菌活性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)化合物4和1有較好的抗氧化活性，對(duì)ABTS·的IC50值分別為12和13 mg/L；化合物3對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值為217 μmol/L。

[1]楊學(xué)東, 徐麗珍, 楊世林. 遠(yuǎn)志屬植物中口山酮類(lèi)成分及其藥理研究進(jìn)展[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2000, 12 (5): 88-93. YANG X D, XU L Z, YANG S L. Advances in the research of chemistry and pharmacology of xanthones extracted fromPolygalaL.[J]. Nature Product Research and Development, 2000, 12 (5): 88-93.

[2] LIN L L, HUANG F, CHEN S B, et al. Xanthones from the roots ofPolygolacaudataand their antioxidation and vasodilatation activitiesinvitro[J]. Planta Medica, 2005, 71(4): 372-375.

[3] 張培軒, 段瑞, 黃鵬. 中國(guó)遠(yuǎn)志屬藥用植物資源及地理分布[J]. 基層中藥雜志，2002，16(6)：42-43. ZHANG P X, DUAN R, HUANG P. Medicinal plant resources and geographical distribution ofPolygala[J]. Primary Journal of Chinese Materia Medica，2002，16(6)：42-43.

[4]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì). 中國(guó)植物志[M]. 北京：科學(xué)出版社, 2013. Flora of China Editorial Committee. Flora of China[M]. Beijing: Science Press, 2013.

[5] 宛瑜，郁惠珍，葉玲，等. 從小遠(yuǎn)志中分離黃酮醇和口山酮衍生物[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2008，30(7)：51-55. WAN Y, YU H Z, YE L, et al. Flavonol and xanthone derivatives fromPolygalasibiricaL. varmegalophaFr.[J]. Journal of Southwest University: Natural Science Edition，2008，30(7)：51-55.

[6]陳良鳳, 周俊,宛瑜, 等. 小遠(yuǎn)志多糖一級(jí)結(jié)構(gòu)的初步研究[J]. 有機(jī)化學(xué), 2013, 33 (2): 365-369. CHEN L F, ZHOU J, WAN Y, et al. Preliminary study on the primary structure ofPolygalasibiricaL.varmegalophaFr. polysaccrides[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2013, 33 (2): 365-369.

[7]魏永俊, 周秋菊, 黃樹(shù)穎, 等. 小遠(yuǎn)志多糖的提取及純化[J]. 江蘇師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2014, 32 (1): 60-63. WEI Y J, ZHOU Q J, HUANG S Y, et al. Extraction and purification ofPolygalasibiricaL. varmegalophaFr. polysaccharides[J]. Journal of Jiangsu Normal University: Natural Science Edition, 2014, 32 (1): 60-63.

[8]李強(qiáng), 耿圓圓, 王軍民, 等. 小遠(yuǎn)志中三個(gè)黃酮醇苷[J]. 西部林業(yè)科學(xué), 2015, 44 (5): 72-75. LI Q, GENG Y Y, WANG J M, et al. Three flavonol glycosides fromPolygalasibiricavar．megalopha[J]. Journal of West China Forestry Science, 2015, 44 (5): 72-75.

[9] HUANG Y J, ZHOU L Y, WANG J M, et al. Two new flavonol glycosides fromPolygalasibiricaL. varmegalophaFr. [J]. Molecules, 2015, 20 (12): 21494-21500.

[10]吳翚, 周俊, 宛瑜, 等. 小遠(yuǎn)志總多糖的微波提取及抗腫瘤活性研究[J]. 徐州師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2004, 22(3): 52-54. WU H, ZHOU J, WAN Y, et al. The total polysaccharide extracted fromPolygalasibiricaL. var.megalophaFr. by microwave and the study on its anti-tumor activity[J]. Journal of Xuzhou Normal University: Nature Science Edition, 2004, 22(3): 52-54.

[11]郁惠珍, 吳翚. 小遠(yuǎn)志醇提物抗蛇毒活性初探[J]. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2008, 17 (1): 3-5. YU H Z, WU H. Studies on anti-snake venom activity of ethanol extract fromPolygalasibiricaL．varmegalophaFr.[J]. Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmaey, 2008, 17 (1): 3-5.

[12] LEE I K, YUN B S. Hispidin analogs from the mushroomInonotusxeranticusand their free radical scavenging activity[J]. Biorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2006, 16 (9): 2376-2379

[13] GUZ N R, STERMITZ F R. Spectral comparisons of coniferyl and cinnamyl alcohol epoxide derivatives with a purportedcis-epoxyconiferyl alcohol isolate[J]. Phytochemistry, 2000, 54 (8): 897-899.

[14] YANG C X, ZUO G Y, HAN J, et al.Invitroantimicrobial activities of 26 Yunnan plants extracts against multi-drug resistant pathogens[J]. African Journal of Microbiology Research, 2012, 6 (19): 400-405.

[15] MAKN K, LI W K, ZHANG M, et al. Effects of euxanthone on neuronal differentiation [J]. Life Sciences, 2000, 66 (4): 347-354.

[16] HUA Y, CHEN C X, LIU Y Q, et al. Three new xanthones fromPolygalacrotalarioides[J]. Chinese Chemical Letters, 2006, 17 (6): 773-775.

[17] NAONOBU T, YOSHIHISA T. Xanthones fromHypericumchinense[J]. Phytochemistry, 2006, 67(19):2146-2151.

[18] QUILLINAN A J, SCHEINMANN F. Extractives from Guttiferae. Part XXIX. Synthesis of celebixanthone methyl ether and related 1,5,6,7-tetraoxygenated xanthones[J]. Journal of Chemistry Society, Perkin Translation 1, 1975, 3 (3): 241-245.

[19] HIDEKI T, MUNEKAZU I, KOHICHI M, et al. Three xanthones fromPoeciloneuronpauciflorumandMammeaacuminata[J]. Phytochemistry, 1997, 45 (1): 133-136.

[20] LI W K, CHAN C L, LEUNG H W, et al. Xanthones fromPolygalacaudata[J]. Phytochemistry, 1999, 51 (7): 953-958.

[21] HABIB A M, KALAKOTA S R, THOMAS G M, et al. New xanthones fromPsorospermumfebrifugum[J]. Journal of Natural Products, 1987, 50 (2): 141-145.

[22] 徐華松, 華燕. 西南遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)化合物的分離與鑒定[J]. 西南林學(xué)院學(xué)報(bào), 2010, 30 (3): 92-94. XU H S, HUA Y. Isolation and identification of xathones extracted fromPolygalacrotalarioides[J]. Journal of Southwest Forestry University, 2010, 30 (3): 92-94.

[23] ZHANG L J, YANG X D, XU L Z, et al. Three new xanthones from the roots ofSecuridacainappendiculata[J]. Heterocycles, 2005, 65 (7): 1685-1690.

[24] WU X Y, LIU M, WU Y L, et al. Separation and identification of new sucrose esters from root ofPolygalatenuifoliaWilld.[J]. Journal of Shenyang Pharmaceutical University, 2010, 27(10): 788-792.

[25] HUA Y, CHEN C X, LIU Y Q, et al. Two new xanthones fromPolygalacrotalarioides[J]. Journal of Asian Natural Products Research, 2007, 9 (3): 273-275.

[26] PINHEIRO T R, FILHO V C, KITA T, et al. Three xanthones fromPolygalacyparissias[J]. Phytochemistry, 1998, 48 (4): 725-728.

[27] FRANCO C, FILIPPO C, LEONARDO B, et al. Quercetin as the active principle ofHypericumhircinumexerts a selective inhibitory activity against MAO-A: Extraction, biological analysis, and computational study[J]. Jounral of Nature Products, 2006, 69 (6): 945-949.

[28] FU J, ZHANG D M, CHEN R Y. Three new xanthones from the roots ofPolygalajaponicaHoutt.[J]. Journal of Asian Natural Products Research, 2006, 8 (1/2): 41-46.

[29] PARRA M, PICHER M T, SEOANE E, et al. New xanthones isolated fromCentauriumlinarifolium[J]. Jounral of Nature Products, 1984, 47 (1): 123-126.

Chemical Constituents and Bioactivities of Xanthones fromPolygalasibiricaL. var.megalophaFr.

ZHOU Lingyun1,2, YU Xiaohong2, GENG Yuanyuan2, HUA Yan2

(1. School of Pharmacy,Wannan Medical College, Wuhu 241002, China；2. College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming 650224, China)

Eighteen compounds were isolated by ethanol extraction, silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, MCI-gel column chromatography and semi-preparative HPLC from the dried roots ofPolygalasibiricaL. var.megalophaFr. Their structures were identified as 1,7-dihydroxy xanthone (1), 3,6-dihydroxy-1,2,7,8-tetramethoxy xanthone (2), 1,7-dihydroxy-5,6- dimethoxy xanthone (3), 1,5-dihydroxy-6,7-dimethoxy xanthone (4), 6-hydroxy-l,7-dimethoxy xanthone (5), 7-hydroxy-1-methoxy xanthone (6), 3,8-dihydroxy- 1,2,4-trimethoxy xanthone (7), 6,8-dihydroxy-1,2,3-trimethoxy xanthone (8), 1,3,6-trihydroxy-2,7,8-trimethoxy- xanthone (9), 3-hydroxy-1,2,8-trimethoxy xanthone (10), 1,3,7-trihydroxy xanthone (11), 1,6-dihydroxy-2,3-methylene-dioxy-7,8-dimethoxy xanthone (12)，1,7-dihydroxy-2,3-dimethoxy xanthone (13), 1,6-dihydroxy-5,7-dimethoxy xanthone (14), 3,7-dihydroxy-1,2-dimethoxy xanthone (15), 3,7- dihydroxy- 1,2,8-trimethoxy xanthone (16), 1,2,3,7-tetramethoxy xanthone (17), 1,6-dihydroxy-3,5,7,8-tetramethoxy xanthone (18) by ESI-MS,1H NMR,13C NMR. All compounds except 13 were isolated from this plant for the first time. The antioxidant and antimicrobial activities of compound 1-7 were studied. And the results showed that the compound 4(IC50= 12 mg/L)and compound 1(IC50= 13 mg/L)showed good ABTS scavenging activity and compound 3(MIC = 217 μmol/L)had certain inhibitory activity againstStaphylococcusaureus.

Polygala.sibiricaL. var.megalophaFr.; xathones; antioxidant; antimicrobial

10.3969/j.issn.0253-2417.2017.02.016

2016- 07- 05

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31260083)；皖南醫(yī)學(xué)院校重點(diǎn)科研項(xiàng)目培育基金(WK2016Z06)

周凌云(1980— )，男，安徽蕪湖人，博士生，主要從事中藥活性成分研究

*通訊作者：華 燕，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事天然藥物化學(xué)的研究；E-mail:huayan1216@163.com。

TQ35

A

0253-2417(2017)02- 0121- 08

周凌云，余小紅，耿圓圓，等.小遠(yuǎn)志中口山酮類(lèi)化學(xué)成分及生物活性研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2017，37(2)：121-128.