黃敏玉， 黃 群， 吳 軍， 孟冬冬， 覃天資， 龍 毅

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科， 廣西 百色 533000)

磷酸甘油酸變位酶-1在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達(dá)及臨床意義

黃敏玉， 黃 群， 吳 軍， 孟冬冬， 覃天資， 龍 毅

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科， 廣西 百色 533000)

目的：觀察磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達(dá)差異，并分析PGAM1表達(dá)檢測(cè)的臨床意義。方法：收集Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標(biāo)本，采用免疫組化檢測(cè)PGAM1表達(dá)水平，分析不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)差異，并分析PGAM1表達(dá)與生精功能指標(biāo)卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平的關(guān)系。結(jié)果：Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)；Ⅰ型前列腺炎患者中PGAM1低表達(dá)者的卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中PGAM1低表達(dá)者的卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。結(jié)論：除Ⅰ型前列腺炎患者外，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者PGAM1呈異常的低表達(dá)，而PGAM1呈異常的低表達(dá)對(duì)患者睪丸組織生精功能產(chǎn)生影響，因此PGAM1檢測(cè)在前列腺炎患者病情及生精功能障礙診斷中具有一定的臨床價(jià)值。

磷酸甘油酸變位酶-1； 前列腺炎； 生精功能

磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)作為變位酶家族的一種關(guān)鍵酶，在機(jī)體糖酵解反應(yīng)中起到關(guān)鍵性的作用[1]。當(dāng)前已有研究證實(shí)PGAM1在人體腦、肝、腎、睪丸等組織內(nèi)可正常表達(dá)，而其異常表達(dá)可誘導(dǎo)這些人體組織發(fā)生癌變[2～4]。另外學(xué)者張守波[5]研究發(fā)現(xiàn)PGAM1異常低表達(dá)與人體睪丸老化密切相關(guān)，且參與人體睪丸的支持細(xì)胞糖酵解反應(yīng)，從而對(duì)睪丸組織生精功能產(chǎn)生影響。鑒于前列腺炎是男性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)疾病，且與男性睪丸組織生精功能激素分泌密切相關(guān)，因此本研究收集我院收集Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標(biāo)本，觀察磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達(dá)差異，并分析PGAM1表達(dá)檢測(cè)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：經(jīng)醫(yī)院倫委會(huì)同意，收集我院近1年期間(2016年1～12月)前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①入院后患者均經(jīng)病理診斷為前列腺炎；②患者同意參與研究，且簽定知情同意書(shū)；③患者均行性激素六項(xiàng)檢查，且資料完整；④患者患前列腺炎前無(wú)性功能障礙、無(wú)精子癥或少精子癥。按上述標(biāo)準(zhǔn)共入選123例前列腺炎患者和40例健康體檢人群的睪丸組織標(biāo)本。參照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的相關(guān)前列腺炎分型標(biāo)準(zhǔn)[6]，將123例前列腺炎患者分為Ⅰ型(急性前列腺炎)、Ⅱ型(慢性細(xì)菌性前列腺炎)、Ⅲ型(慢性盆腔疼痛性前列腺炎)、Ⅳ型(無(wú)癥狀性前列腺炎)前列腺炎患者，其中Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者分別為40例、42例、38例、43例，上述五組一般資料比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)。

1.2 研究方法：以入選睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)水平以及患者生精功能指標(biāo)(卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮)作為觀察指標(biāo)。生精功能指標(biāo)來(lái)自患者就診時(shí)性激素六項(xiàng)檢查，采用免疫組化檢測(cè)PGAM1表達(dá)水平。分析不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)差異，并分析PGAM1表達(dá)與生精功能指標(biāo)卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平的關(guān)系。

1.3 PGAM1檢測(cè)及判定標(biāo)準(zhǔn)：免疫組化PGAM1表達(dá)檢測(cè)：所有入選睪丸組織標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)脫水、組織包埋、切片等處理后，置于PGAM1抗體(1:200)以室溫孵育2h，再進(jìn)一步洗片后加入二抗再室溫孵育1h。以DAB顯色5min，然后以蘇木素復(fù)染1min，然后中性樹(shù)膠封片。免疫組化結(jié)果判定[7]：參照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院制定的標(biāo)準(zhǔn)，以免疫組化PGAM1檢測(cè)陽(yáng)性強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比兩項(xiàng)評(píng)分乘積值來(lái)判定，健康人群正常PGAM1表達(dá)評(píng)分值為7分，低于7分為低表達(dá)，高于7分為高表達(dá)。①陽(yáng)性強(qiáng)度評(píng)分：按細(xì)胞染色強(qiáng)度判定，無(wú)色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)為0分、1分、2分、3分。②陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：百分比≤25%、25%<百分比≤50%、50%<百分比≤75%、百分比>75%分別計(jì)為0分、1分、2分、3分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。卵泡刺激素、黃體生成素、T激素等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用組間t檢驗(yàn)分析差異。PGAM1表達(dá)例數(shù)等計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，采用組間χ2檢驗(yàn)分析差異。若P<0.05，則表示組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)差異比較：免疫組化檢測(cè)結(jié)果可知，不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達(dá)主要存在于睪丸組織生精小管中(圖1A)，而在睪丸組織間質(zhì)細(xì)胞中無(wú)明顯高表達(dá)。同時(shí)不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達(dá)主要存在于生精小管精原細(xì)胞(圖1B)，精母細(xì)胞(圖1C)和細(xì)胞胞質(zhì)(圖1D)中。Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)差異比較n(%)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

圖1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)的免疫檢測(cè)結(jié)果(×40)

注：A：前列腺炎患者生精小管中的PGAM1表達(dá)的免疫檢測(cè)結(jié)果；B：前列腺炎患者精原細(xì)胞中的PGAM1表達(dá)的免疫檢測(cè)結(jié)果；C：前列腺炎患者精母細(xì)胞中的PGAM1表達(dá)的免疫檢測(cè)結(jié)果；D：前列腺炎患者細(xì)胞胞質(zhì)中的PGAM1表達(dá)的免疫檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與卵泡刺激素水平的關(guān)系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1高表達(dá)者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1低表達(dá)者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與卵泡刺激素水平的關(guān)系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

表3 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與黃體生成素水平的關(guān)系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

表4 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與睪酮水平的關(guān)系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

2.3 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與黃體生成素水平的關(guān)系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1高表達(dá)者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1低表達(dá)者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達(dá)與睪酮水平的關(guān)系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1高表達(dá)者的睪酮水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1低表達(dá)者的睪酮水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)者的睪酮與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見(jiàn)表4。

3 討 論

在男性不育因素中，生精功能障礙是其中最重要的因素，約占全部男性不育因素的50%左右[8]。而男性生精功能障礙除與生殖器內(nèi)分泌、生殖器創(chuàng)傷、生殖器發(fā)育等因素相關(guān)外，亦與前列腺炎對(duì)患者睪丸組織生精功能激素分泌相關(guān)[9]。國(guó)外研究，在Ⅰ型(急性前列腺炎)、Ⅱ型(慢性細(xì)菌性前列腺炎)、Ⅲ型(慢性盆腔疼痛性前列腺炎)、Ⅳ型(無(wú)癥狀性前列腺炎)前列腺炎患者的多次重復(fù)睪丸取精術(shù)中，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者的取精成功率明顯低于Ⅰ型前列腺炎患者和健康人群，其原因在于Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎為慢性或無(wú)癥狀前列腺炎癥，作用時(shí)間較長(zhǎng)，從而對(duì)患者生精功能相關(guān)基因PGAM1表達(dá)產(chǎn)生影響[10～12]。

本研究不同分型前列腺炎患者睪丸組織PGAM1表達(dá)免疫組化檢測(cè)結(jié)果表明，Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標(biāo)本PGAM1表達(dá)與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。提示，PGAM1異常表達(dá)異常與前列腺炎病密切相關(guān)。且不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達(dá)主要存在于睪丸組織生精小管中，而在睪丸組織間質(zhì)細(xì)胞中無(wú)明顯高表達(dá)，同時(shí)不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達(dá)主要存在于生精小管精原細(xì)胞，精母細(xì)胞和細(xì)胞胞質(zhì)中，提示PGAM1高表達(dá)與男性睪丸組織生精過(guò)程密切相關(guān)。上述研究結(jié)果證實(shí)了學(xué)者John.A[13]的研究結(jié)果：PGAM1參與男性睪丸組織生精細(xì)胞分化、形成過(guò)程。Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎導(dǎo)致PGAM1呈異常的低表達(dá)，可能與Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎均是慢性或無(wú)癥狀前列腺炎癥，作用時(shí)間較長(zhǎng)，從而對(duì)患者生精功能相關(guān)基因PGAM1表達(dá)產(chǎn)生影響有關(guān)，而PGAM1低表達(dá)抑制慢性前列腺患者的糖代謝活動(dòng)，從而對(duì)睪丸組織內(nèi)生精細(xì)胞分化、形成過(guò)程產(chǎn)生影響[14,15]。

相關(guān)研究證實(shí)，睪丸組織一些激素水平與睪丸組織的生精功能密切相關(guān)，劉柳等[16]研究顯示，生精功能障礙男性的卵泡刺激素和黃體生成素表達(dá)水平顯著高于正常健康男性，而睪酮水平則顯著低于正常健康男性。江凡等[17]發(fā)現(xiàn)，無(wú)精癥生精功能障礙男性的卵泡刺激素和黃體生成素表達(dá)水平也高于正常健康男性，同時(shí)睪酮水平也顯著低于正常健康男性。同時(shí)亦有國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者的卵泡刺激素和黃體生成素表達(dá)水平低于正常健康男性，睪酮水平顯著低于正常健康男性[18]。綜合上述學(xué)者研究結(jié)果，本研究嘗試分析了不同分型前列腺患者PGAM1表達(dá)異常與生精功相關(guān)激素的相關(guān)性。結(jié)果證實(shí)，Ⅰ型前列腺炎患者中PGAM1低表達(dá)者的卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平與健康體檢人群比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中PGAM1低表達(dá)者的卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。提示，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者生精功能障礙與患者PGAM1低表達(dá)導(dǎo)致卵泡刺激素、黃體生成素、T激素等生精功能激素表達(dá)異常密切相關(guān)[19,20]。因此，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎PGAM1表達(dá)檢測(cè)在診斷前列腺炎患者生精功能障礙中有一定的臨床價(jià)值。

綜上所述，除Ⅰ型前列腺炎患者外，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者PGAM1呈異常的低表達(dá)，而PGAM1呈異常的低表達(dá)對(duì)患者睪丸組織生精功能產(chǎn)生影響，因此PGAM1檢測(cè)在前列腺炎患者病情及生精功能障礙診斷中具有一定的臨床價(jià)值。

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The Clinical Significance and Expression of Phosphoglycerate Mutase-1 in the Testis Tissues of Patients with Different Types of Prostatitis

HUANGMinyu,HUANGQun,WUJun,etal

(TheAffiliatedHospitalofYoujiangMedicalCollege,GuangxiZhuangAutonomousRegion,GuangxiBaise533000,China)

Objective:To observe the phosphoglycerate mutase (PGAM1)-1 expression in testicular tissue of patients with different types of prostatitis, to analyze the clinical significance of detecting PGAM1 expression. Methods: Type I,II,III and IV prostatitis patients and healthy population of the testicular tissue specimens were collected. The level of PGAM1 expression was detected by immunohistochemical. The difference of PGAM1 expression in patients with different types of prostatitis was analyzed. The relationship between the expression of PGAM1 and the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and testosterone was analyzed. Results: There was no significant difference in the expression of PGAM1 in the testis tissue of patients with typeⅠ(P>0.05). The expression of PGAM1 in testis tissues of patients with type II, III and IV prostatitis was significantly different from that in healthy people (P<0.05). There was no significant difference in the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone (LH) and T hormone (P>0.05) in patients with type Ⅰ prostatitis (PGAM1). However, there were significant differences in the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and testosterone in patients with type PGAM1, type III and type IV prostatitis (P<0.05). Conclusion: In addition to the patients with type Ⅰ prostatitis, the expression of PGAM1 of patients with type II, III and IV prostatitis was lower. The abnormal expression of PGAM1 had an effect on spermatogenesis in patients with testicular tissue. Therefore, the detection of PGAM1 has a certain clinical value in the diagnosis of patients with prostatitis.

Phosphoglyceromutase-1; Prostatitis; Spermatogenic function

1006-6233(2017)05-0719-05

廣西壯族自治區(qū)百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：20160615)；廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳重點(diǎn)科研課題，(編號(hào)：重2012082)

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.05.005