汪霞 遼陽疾病預(yù)防控制中心 （遼寧 遼陽 111000）

薄層色譜掃描和氣相色譜-質(zhì)譜法快速檢測血中2,4-滴丁酯

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目的：探討應(yīng)用薄層色譜掃描（TLCS）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）定性定量快速檢測血中2,4-滴丁酯的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。方法：提取準(zhǔn)備好的樣品，分別點(diǎn)于CF254板上，展開、掃描，根據(jù)光譜圖計(jì)算比移值；在樣品中加入鄰苯二甲酸二異丁酯后進(jìn)行提取，應(yīng)用GC-MS分析定性，在離子模式下進(jìn)行定量檢測。結(jié)果：TLCS分析，血中2,4-滴丁酯不同展開劑的比移值（Rf）分別為0.76和0.28薄層掃描最大的吸收波長分別為226nm和278nm。經(jīng)過GC-MS的定性分析，血中的2,4-滴丁酯56，177和269分別為特征性片段，離子模式下的定量檢測線性范圍結(jié)果為0.20～100.0 μg/ml最低檢出限為0.1μg/ml（S/N=3）。結(jié)論：應(yīng)用薄層色譜掃描（TLCS）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）定性定量快速檢測血中2,4-滴丁酯效果較好，可以滿足臨床的的快速檢驗(yàn)診斷需求。

2,4-滴丁酯 薄層色譜 氣相色譜-質(zhì)譜 快速檢測

2,4-滴丁酯是一種苯氧羧酸除草劑，如誤服會導(dǎo)致消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等一系列中毒的癥狀，常見中毒臨床表現(xiàn)有嗜睡、肌無力、纖維顫動等，較嚴(yán)重的會出現(xiàn)昏迷、抽搐以及大小便失禁、呼吸衰竭等狀況[1]。近些年關(guān)于該檢測研究應(yīng)用蔬菜水果的農(nóng)藥殘留很多[2]，一般應(yīng)用氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法以及高效液相色譜法，本文初次應(yīng)用2,4-滴丁酯薄層色譜掃描定性定量檢測，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.實(shí)驗(yàn)儀器與方法

1.1 儀器和試劑

美國Finnigan公司生產(chǎn)的GC-MS分析儀，掃描儀選擇的是日本島津的波長為CS-930的掃描儀，CF254硅膠薄板是由青島海洋化工廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為8352001，2,4-滴丁酯檢測使用配比標(biāo)準(zhǔn)溶液為配套的國家統(tǒng)一指標(biāo)公司生產(chǎn)，分析純分別為鄰苯二甲酸二異丁酯內(nèi)標(biāo)和正己烷。

1.2 儀器的條件

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱是DB-5MS（30 m×0.25×0.25 mm×0.25 μm）毛細(xì)管柱；載氣為高純氦氣，流速1.0 Fμg/m；l柱溫：起始溫度100?C（1 min30?C/min200?C（1 min）-10?C/min-280?C（3 min）；進(jìn)樣口溫度250?C；傳輸線溫度250?C。

1.2.2 質(zhì)譜條件

EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度250?C。掃描起始時(shí)間4 min掃描范圍50～650 amu。調(diào)諧方式為自動調(diào)諧，倍增電壓1073 V，發(fā)射電流100μA。

1.2.3 薄層色譜條件

光密度掃描范圍：200～370mm，掃描方式：nomal掃描結(jié)合difference掃描，反射廣譜方式，SX=3。

1.3 血樣的分析與處理

1.3.1 血液處理

取全血1ml加內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸二異丁酯100μL，PH=6的緩沖液準(zhǔn)備1ml，三氯甲烷5ml，充分搖勻震蕩，將混勻液體置入轉(zhuǎn)速為3000的離心機(jī)內(nèi)離心5min，棄去上清液，對血液分別提取兩次，同時(shí)將有機(jī)相合并，于70?C的水浴氮經(jīng)氣流吹干，剩余的血液殘?jiān)尤?00μl正己烷定容，充分混勻備檢。

1.3.2 薄層色譜分析

表1. 不同的萃取溶劑對2,4-滴丁酯的提取率分析

硅膠薄板選擇GF254，標(biāo)準(zhǔn)液為2,4-滴丁酯，劑量為1μl，然后用試管從定容液中提取15μl備用，上行展開應(yīng)用環(huán)己烷-丙酮（4:1）和環(huán)己烷-氯仿（5:1），樣品在紫外燈下通過熒光顯色行斑點(diǎn)定位，將檢測的色譜條件設(shè)定穩(wěn)定后，開始掃描，標(biāo)準(zhǔn)液作為掃描的參考，與結(jié)果比照。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜分析

提取定容好的待檢測液1μl，進(jìn)樣待檢測，將離子色譜條件設(shè)定好，標(biāo)準(zhǔn)液作為參考對照，進(jìn)樣掃描，將掃描得出的結(jié)果同樣品的提取特征結(jié)合，行離子檢測，最后定性結(jié)果觀察指標(biāo)為總離子流和各個(gè)組別的保留時(shí)間。

2.結(jié)果

2.1 比移值

本次實(shí)驗(yàn)的展開劑為環(huán)己烷-丙酮和環(huán)己烷-氯仿，此時(shí)實(shí)驗(yàn)板的2,4-滴丁酯的薄層分析比移值（Rf）為0.76和0.28。使用鄰苯二甲酸二異丁酯為內(nèi)標(biāo)物在2,4-滴丁酯的薄層分析得出的離子特征片段為56、177、269，分離的效果很好。根據(jù)配好的2,4-滴丁酯標(biāo)準(zhǔn)液算出，其濃度在0.20～100.0 μg/ml范圍內(nèi)時(shí)，檢測效率最高，結(jié)果最準(zhǔn)確，其線性關(guān)系最為良好。

2.2 提取溶劑和PH之間的關(guān)系

不同的緩沖溶液調(diào)整不同的PH值，溶劑萃取選擇乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷，每種重復(fù)3次萃取，記錄選擇的溶劑跟PH值。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果得出，當(dāng)三氯甲烷萃取時(shí)，PH值為6的萃取效果是最好的。不同溶劑的萃取結(jié)果見表1。

3.討論

本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的三種萃取劑使得2,4-滴丁酯提取率可以達(dá)到較高的程度[3]，當(dāng)使用三氯甲烷提取時(shí)，PH為6的時(shí)候效果最好，可以達(dá)到最大的吸收率，乙醚萃取效果次之，因?yàn)殡s志分離效果不如三氯甲烷，乙酸乙酯回收率最低[4]。從本次實(shí)驗(yàn)可以得出三氯甲烷是很好的提取溶劑。本文使用的提取方法所得到的結(jié)果已經(jīng)滿足了生物檢測中心中關(guān)于中藥毒物的檢測要求，需要注意的是三氯甲烷的傷害性較大，需要注意室內(nèi)通風(fēng)和自我防護(hù)[5]。

實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的環(huán)己烷-丙酮和環(huán)己烷-氯仿展開劑可以很好的分離2,4-滴丁酯，計(jì)算得出的比移值可以得出定性結(jié)果，但薄層色譜的分析靈敏度不高，對體外檢測尚可適用，而體內(nèi)檢測常應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]。這里關(guān)于2,4-滴丁酯檢測的應(yīng)用在以往的文獻(xiàn)中未見[7]，本實(shí)驗(yàn)依據(jù)萃取劑的屬性和相溶原理設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案為首次實(shí)踐，從結(jié)果來看，取得了較好的分離定性、定量檢測結(jié)果，和預(yù)期相比有較好的效果。該種方法和傳統(tǒng)的氣質(zhì)聯(lián)法相比靈敏度更高一些，且受雜質(zhì)的干擾程度較小，而且保留的時(shí)間能夠結(jié)合特征性離子豐度來準(zhǔn)確的定性和定量，提高檢測效率和精準(zhǔn)度。

[1] 李鵬, 賈雪峰, 韓勝, 等. 薄層色譜掃描和氣相色譜-質(zhì)譜法快速檢測血中2,4-滴丁酯[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2008,18(2):204-207.

[2] 羅敏, 霍永昌, 魏獻(xiàn)春, 等. 五種蛇膽的薄層色譜掃描指紋圖譜研究[J]. 中藥材, 2002,25(1):16-18.

[3] 黃修柱, 季穎. 2,4-滴丁酯原藥及其雜質(zhì)GC-MS分析研究[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2005,26(8):3-7.

[4] 趙琳, 張曉波, 任紅波, 等. 在線GPC-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定玉米中莠去津、乙草胺和2,4-滴丁酯殘留[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2013, 34(5):35-39.

[5] 吳亞靜. 一起涉嫌2,4-滴丁酯投毒案件的GC/MS分析[J]. 河北公安警察職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào), 2015,15(4):35-36.

[6] 李元星. 色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用分析食品及化妝品中的酞酸酯和防腐劑[D]. 湖南師范大學(xué), 2006.

[7] Zou P, Wang L, Yang Z G, et al. Rapid and simultaneous determination of ten off-favor compounds in water by headspace solid phase microextraction and gas chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Central South University, 2016,23(1):59-67.

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