蘇 琪，李小麗

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.西安市灞橋區(qū)畜牧技術(shù)推廣中心,陜西西安 710038； 3.西安市灞橋區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西西安 710038)

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獸醫(yī)臨床

西安市雞新城疫免疫抗體水平調(diào)查與分析

蘇 琪1,2，李小麗3

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.西安市灞橋區(qū)畜牧技術(shù)推廣中心,陜西西安 710038； 3.西安市灞橋區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西西安 710038)

為更好地了解全面免疫后雞群抗體產(chǎn)生情況和抗體滴度分布規(guī)律，對西安市不同區(qū)縣、不同來源的雞群進(jìn)行了新城疫免疫抗體監(jiān)測。從2011到2015年，從西安市下轄的未央?yún)^(qū)、高陵區(qū)、長安區(qū)、灞橋區(qū)、閻良區(qū)、戶縣、周至縣及藍(lán)田縣等區(qū)縣共采集血樣3 465份，涉及規(guī)模以上養(yǎng)雞場120個，散養(yǎng)戶10個，畜禽交易市場3個，其中合格樣品3 227份。對采集來的血樣分離血清，采用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)檢測抗體滴度，對監(jiān)測結(jié)果按照依據(jù)進(jìn)行分類統(tǒng)計。結(jié)果表明，從2011年到2015年，西安市不同區(qū)縣雞群春秋兩季新城疫免疫抗體合格率均達(dá)到了70%以上，平均合格率為93%，免疫效果良好。5年的數(shù)據(jù)和春秋兩季抗體合格率監(jiān)測結(jié)果表明，采用合理的免疫程序和規(guī)范操作，全面免疫后雞群新城疫抗體保護(hù)水平較高，采用的免疫程序可以作為參考程序推廣應(yīng)用。

雞；新城疫；免疫；抗體；調(diào)查

目前，我國規(guī)定對新城疫(Newcastle disease,ND)進(jìn)行全面免疫預(yù)防，主要采取接種疫苗的方法進(jìn)行本病的防控。為了解和掌握西安市不同區(qū)縣雞群新城疫免疫情況，評價疫苗接種后的免疫效果，制定科學(xué)的免疫程序，筆者依據(jù)對西安市13個區(qū)縣雞群新城疫抗體水平監(jiān)測與分析結(jié)果，對新城疫免疫接種效果進(jìn)行評價，為進(jìn)一步做好新城疫防控工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2011年至2015年從西安市下轄的未央?yún)^(qū)、高陵區(qū)、長安區(qū)、灞橋區(qū)、閻良區(qū)、戶縣、周至縣及藍(lán)田縣等區(qū)縣共采集雞血樣3 465份。以2015年為例，共采集樣品796份，其中春季采集439份，秋季采集357份。涉及規(guī)?；B(yǎng)雞場(存欄大于2萬羽)120個，散養(yǎng)戶10個，畜禽交易市場3個(西安市朱雀農(nóng)產(chǎn)品交易中心、胡家廟農(nóng)產(chǎn)品市場、城東農(nóng)產(chǎn)品交易市場)。采血時將雞保定好，翼下靜脈采血，血液室溫放置待其自然凝固后，1 800 r/min離心5 min分離血清，保存待檢。

1.1.2 主要試劑 新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原及陰性、陽性血清，青島易邦生物工程有限公司產(chǎn)品，批號：獸藥生字[2007]150138082；2月齡以下，雞接種用雞新城疫活疫苗(La Sota株)，杭州薦量獸用生物制品有限公司產(chǎn)品，批準(zhǔn)文號：獸藥生字[2012]110542007； 2月齡以上雞接種用雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)，楊凌綠方生物工程有限公司產(chǎn)品，批號：獸藥生字[2011]270022004；1%雞紅細(xì)胞，自制；其他試劑均為分析純。

1.1.3 主要儀器 微量振蕩器(型號：XK95-1，編號：BQDJ-YQ-003)；多道移液器(型號：Z1768，編號：BQDJ-YQ-032)；96孔“V”型微量反應(yīng)板；臺式離心機(jī)等。

1.1.4 主要溶液配制 磷酸鹽緩沖液：NaCl 8 g，NaH2PO41.561 g，Na2HPO43.582 g，加蒸餾水定容至1 000 mL，調(diào)pH至7.2。

1%雞紅細(xì)胞懸液：無菌吸取3.8%的枸櫞酸鈉溶液，從非免疫雞翼下靜脈采血，加適量磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋后，3 000 r/min離心5 min～10 min，棄去上清液，再用PBS洗滌3次。

1.2 方法

按照農(nóng)業(yè)部《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T16550-2008)血凝和血凝抑制試驗(yàn)法進(jìn)行檢測。

1.3 數(shù)據(jù)分析

文中部分?jǐn)?shù)據(jù)采用SPSS Statistics 17.0軟件的卡方檢驗(yàn)程序進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 2011年-2015年西安市不同區(qū)縣雞群新城疫免疫抗體合格率統(tǒng)計結(jié)果

2.1.1 抗體合格率 目前，國家要求對新城疫進(jìn)行全面免疫。免疫必須依據(jù)農(nóng)業(yè)部制定的免疫方案進(jìn)行操作，所用疫苗來源必須符合要求。西安市13個區(qū)縣2011年-2015年不同雞群新城疫免疫抗體檢測結(jié)果見表1。從2011年到2015年，西安市13個區(qū)縣雞群新城疫免疫抗體合格率均達(dá)到了70%以上，平均合格率為93%，免疫效果良好。其中最高合格率出現(xiàn)在2014年，為97%；2015年的免疫抗體合格率最低，為89%，但也超過了國家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。由此可見，雖然每年對新城疫都進(jìn)行了春、秋兩次全面免疫，經(jīng)檢測的免疫抗體合格率也都達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)，但合格率有高有低，不夠穩(wěn)定,差異明顯(2=37.725，P<0.01)。

表1 2011年-2015年西安市13個區(qū)縣雞群新城疫免疫抗體合格率

2.1.2 春、秋兩季抗體合格率 西安市一年四季均有新城疫病例發(fā)生，以春季和秋季發(fā)病率最高，夏季次之，冬季最低。經(jīng)分析，從2011年到2015年，西安市春秋兩季新城疫免疫抗體總體合格率超過70%，平均合格率為93%，效果良好。春季的免疫抗體合格率見圖1，由圖1可知，2012年和2014年抗體合格率最高，達(dá)到了99%，2013年最低，為88%(P<0.05)；秋季的免疫抗體合格率見圖2， 2013年秋季的抗體合格率最高，達(dá)到了99%，2011和2015年秋季的抗體合格率最低，為88%(P<0.05)，但均超過了70%的標(biāo)準(zhǔn)?？傮w來看，雖然春、秋兩季采集的樣品數(shù)量和合格數(shù)有所差別，但免疫抗體合格率大致相同。

圖1 2011年-2015年西安市春季新城疫免疫抗體合格率

圖2 2011年-2015年西安市秋季新城疫免疫抗體合格率Fig.2 The qualified rates of immune antibodies against NDV in autumn between 2011 and 2015

2.2 2015年西安市不同區(qū)縣雞群新城疫免疫抗體合格率統(tǒng)計結(jié)果

2.2.1 不同檢測點(diǎn)免疫抗體合格率 2015年從西安市不同區(qū)縣雞群共采集樣品796份，涉及規(guī)?；u場120個，散養(yǎng)戶10個，畜禽交易市場3個，將796份樣品按照不同檢測點(diǎn)分為3組，其中規(guī)模化養(yǎng)殖場檢測數(shù)為589份，散養(yǎng)戶128份，畜禽交易市場79份，樣品檢測結(jié)果見表2。3個不同檢測點(diǎn)免疫抗體平均合格率為89%，均超過了規(guī)定的70%以上，其中規(guī)模場樣品的最高，市場的其次，散養(yǎng)戶的最低，不同檢測點(diǎn)抗體合格率差異較大(P<0.05)。

表2 2015年西安市不同檢測點(diǎn)雞群新城疫免疫抗體合格率統(tǒng)計結(jié)果

2.2.2 不同日齡段雞群新城疫免疫抗體合格率統(tǒng)計結(jié)果 將796份樣品按照幼雛、青年雞、成年雞分成3組統(tǒng)計抗體合格率，結(jié)果見表3。從表3可以看出，在雞群免疫以后，成年雞的免疫抗體合格率最高，其次為青年雞的，幼雛的最低(P<0.05)。

表3 不同日齡段雞群新城疫免疫抗體合格率統(tǒng)計結(jié)果

2.2.3 疫苗接種時間與抗體水平 依據(jù)監(jiān)測年份和疫苗接種時間對抗體合格率進(jìn)行分析，免疫接種后3周時，抗體水平達(dá)到26，免疫接種后6周時能維持較高水平，而免疫接種后12周后逐漸下降，與此前報道的接種后5周～7周抗體水平達(dá)到最高峰相似。如果將檢測結(jié)果依據(jù)抗體滴度分布，抗體水平處于25、26的樣品比例較大(表4)。

2.2.4 疫苗接種次數(shù)和抗體水平 參照樣品采集的有關(guān)記錄和檔案，免疫程序如下：初免在14日齡左右；二免在28日齡左右；三免在20個月左右進(jìn)行。且免疫3次后抗體水平最高，持續(xù)時間較長(表5)。

2.2.5 免疫方法與抗體水平 筆者將796只健康雞中的150只隨機(jī)分為A、B、C共3組，每組50只。試驗(yàn)在相同的環(huán)境下，采用同種飼料進(jìn)行飼喂，A組注射1羽份疫苗，B組注射2羽份疫苗，C組進(jìn)行飲水免疫。根據(jù)檢測的抗體水平分析，B組的免疫抗體水平最高，A組次之，C組最低，說明注射2羽份疫苗雞群的抗體水平要高于注射1羽份疫苗雞群的。飲水免疫抗體水平最低是由飲水免疫的不穩(wěn)定性造成的，飲水免疫應(yīng)激小，免疫水平不均，而且相對于直接注射疫苗而言，比較浪費(fèi)，因此，一般不建議使用(表6)。

表4 免疫時間長短與抗體水平

表5 疫苗接種次數(shù)與抗體水平

表6 免疫方法與抗體水平

3 討論

通過對2011年到2015年西安市雞群新城疫免疫抗體合格率、春季和秋季抗體合格率分析來看，雖然每年對雞群都進(jìn)行了新城疫的春秋兩次全面免疫，免疫抗體合格率有高有低，但均超過了國家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%以上的標(biāo)準(zhǔn)[1-2]。

針對2015年采集的樣品，分別從不同檢測點(diǎn)、不同日齡段雞群討論新城疫免疫抗體合格率。從不同檢測點(diǎn)來看，規(guī)?；u場抗體合格率最高，市場其次，散養(yǎng)戶最低。規(guī)模養(yǎng)殖場免疫效果普遍好于散養(yǎng)戶，原因主要是因?yàn)橐?guī)模養(yǎng)殖場防疫意識更強(qiáng)，思想上更積極主動，由專人專職負(fù)責(zé)防疫，防疫效果有保障，能投入大量的人力物力，且能夠按照免疫程序嚴(yán)格執(zhí)行，而目前散養(yǎng)戶還不能做到規(guī)范的免疫程序，容易造成盲目免疫，達(dá)不到理想的免疫效果[3]；從不同日齡段來看，成年雞的免疫抗體合格率最高，其次為青年雞，幼雛最低，推測可能是因?yàn)橛纂r抗病力較差，免疫后抗體水平較低，所以要高度重視幼雛的免疫接種工作[4]。

根據(jù)2015年采集的樣品監(jiān)測結(jié)果，免疫接種3周后，抗體滴度達(dá)到26，之后的6周均能維持較高水平，接種后12周抗體水平逐漸下降，這與趙娟等[5]報道的接種后5～7周抗體水平達(dá)到最高峰相似。2015年西安市采集的796份樣品首免后僅有69份合格，說明首免使用油乳劑苗時不能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。2次至3次免疫后，抗體水平達(dá)到最高，與劉穎等[6]報道的一致。

從不同免疫方法來看，注射2羽份疫苗雞群的抗體水平要高于注射1羽份疫苗雞群的，飲水免疫抗體水平最低，主要是由飲水免疫的不穩(wěn)定性造成的，飲水免疫應(yīng)激小，免疫水平不均，而且相對于直接注射疫苗而言，比較浪費(fèi)，因此，一般不建議使用[7]。

檢測中雖然各雞場新城疫抗體合格率達(dá)到了有關(guān)要求，但少數(shù)個體抗體滴度依然較低，免疫失敗，不但造成人力與財力的各種浪費(fèi)，也增加了出現(xiàn)新城疫的可能性。其可能的原因是疫苗保存不當(dāng)或者操作不規(guī)范[8]。西安市13個區(qū)縣的動物疫病預(yù)防控制中心以及下一級的獸醫(yī)防疫部門都能嚴(yán)格按照相關(guān)要求和規(guī)范領(lǐng)用、發(fā)放疫苗，但還是有一些地方由于地處山區(qū)、交通不便，疫苗的保存、運(yùn)輸條件不完善，部分雞場的主人或防疫接種人員業(yè)務(wù)不熟練、不重視消毒工作，均可能導(dǎo)致免疫效果不夠理想，這些因素都可能引起免疫失敗[9]。另外也可能存在免疫抑制問題，雞場中非傳染性因素和傳染性因素(如傳染性法氏囊病病毒等)都會對新城疫的免疫形成免疫抑制。這些問題不但造成了新城疫非典型化或疫苗接種失敗，而且還會導(dǎo)致機(jī)體對病原體易感性增強(qiáng)，造成病原的繼發(fā)感染[10]。此外，一些雞場管理不善，衛(wèi)生條件較差，消毒不規(guī)范，飼料營養(yǎng)水平較低，致使雞群體質(zhì)虛弱，自身免疫功能明顯降低，會導(dǎo)致抗體持續(xù)水平和免疫后抗體滴度均勻度不理想。最后，有人片面認(rèn)為血凝抑制法檢測的ND抗體水平代表實(shí)際免疫狀況[11]。實(shí)際上，同一雞群中的不同個體間抗體水平差異很大，NDV感染時，抗體水平低的雞先發(fā)病，接著會傳播給其他雞甚至整個雞群[12]。

新城疫抗體監(jiān)測與評價是指導(dǎo)疫病防治工作重要舉措之一，這項(xiàng)工作事關(guān)西安市甚至全國養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展和人民群眾的身體健康，甚至事關(guān)社會的和諧穩(wěn)定[13]。結(jié)合本次試驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為西安市雞群新城疫的防控應(yīng)采取以下措施：①要提高認(rèn)識，加強(qiáng)宣傳。必須清醒地認(rèn)識到ND防控的重要性，堅(jiān)持做好ND的日常流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測，并提高發(fā)病后處置能力。更為重要的是必須強(qiáng)化新城疫防控的宣傳，不斷提高從業(yè)者對新城疫的危害性的認(rèn)識，提高從業(yè)者的整體素質(zhì)，發(fā)動群眾，群防群控。②要不斷規(guī)范免疫程序，提高科學(xué)免疫水平。一直以來，疫苗免疫接種都是重要措施，建議今后將新城疫免疫納入強(qiáng)制免疫的范圍，提高免疫密度。特別要做好春、秋兩次免疫工作，不斷完善現(xiàn)行免疫程序，制定更加科學(xué)、規(guī)范的免疫程序[14]。③新城疫的預(yù)防，必須在高水平飼養(yǎng)管理的基礎(chǔ)上嚴(yán)格執(zhí)行防疫制度，強(qiáng)化動物衛(wèi)生監(jiān)督，定期消毒，杜絕病毒的進(jìn)入。④動物衛(wèi)生監(jiān)督部門要依據(jù)相關(guān)法規(guī)加強(qiáng)監(jiān)督，規(guī)范投入品管理，防止濫用藥。同時要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，盡量做到全進(jìn)全出。對新進(jìn)場的雞苗必須按要求隔離觀察；對發(fā)生疫情的場子及時予以隔離甚至撲殺；對病死雞必須嚴(yán)格無害化處理，堅(jiān)決杜絕疫情進(jìn)一步發(fā)展[15]。

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Investigation and Analysis of Immune Antibody Levels of Newcastle Disease Virus in Chickens of Xi'an City

SU Qi1,2, LI Xiao-li3
(1.CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，Yangling，Shaanxi，712100，China;2.AnimalHusbandryTechnologyPromotionCenter，BaQiaoDistrict,Xi'an，Shaanxi，710038,China;3.InstituteofAnimalHealthSupervision，BaQiaoDistrict,Xi'an，Shaanxi，710038,China)

This research was to monitor the chicken immune antibodies from different districts and channels in Xi'an.During 2011 to 2015,3465 blood samples were selected from 120 scaled chicken farms,10 private chicken farms,3 fowl trading markets in Weiyang,Gaoling,Chang'an,Baqiao,Yanliang,Hu,Zhouzhi and Lantian districts.The sera were separated,and the seral antibody titers were detected by HA and IH assays.The results showed that 3227 qualified samples were got during 2011 to 2015,the qualified rates of immune antibodies from different districts in Spring and Autumn were all over 70%,the average qualified rate was 93%.The data withinn 5 years showed that with reasonable immune process and standard operation,the chickens kept a better antibody titers after comprehensive immunization,the immune program could be popularized as a reference program.

Newcastle disease; immunization; antibody; investigation

2016-10-17

蘇 琪(1986-)，女，陜西西安人，獸醫(yī)碩士，主要從事畜牧技術(shù)推廣工作。

S852.659.5

B

1007-5038(2017)06-0102-05