嚴(yán)海強(qiáng)，孫志為，孟春城，陳業(yè)盛，張麗菊，盧洪巧

（1.云南省中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 6505042；2.云南省第一人民醫(yī)院肝膽外科，云南 昆明 650034）

高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)血腫瘤DNA在肝細(xì)胞癌中的應(yīng)用

嚴(yán)海強(qiáng)1,2，孫志為2*，孟春城2，陳業(yè)盛2，張麗菊2，盧洪巧2

（1.云南省中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 6505042；2.云南省第一人民醫(yī)院肝膽外科，云南 昆明 650034）

肝細(xì)胞癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，中國(guó)已是世界“肝癌第一大國(guó)”，它嚴(yán)重危害著世界各國(guó)人民的身體健康。由于當(dāng)前常規(guī)的影像學(xué)及血清學(xué)檢查早期診斷率低，加之肝細(xì)胞癌惡性程度高，預(yù)后差等特點(diǎn)，臨床確診患者大多數(shù)為中晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)，防治形勢(shì)非常嚴(yán)峻。目前研究顯示，肝細(xì)胞癌與DNA缺陷關(guān)系密切，肝癌患者早期外周血即可檢測(cè)到循環(huán)血腫瘤DNA。隨著測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展，如今的高通量測(cè)序技術(shù)為測(cè)定循環(huán)血腫瘤DNA提供了技術(shù)支持，本文總結(jié)了近年來(lái)基于高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)血腫瘤DNA在肝細(xì)胞癌的基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用方面的經(jīng)驗(yàn)，以期能對(duì)肝細(xì)胞癌的診治帶來(lái)有益幫助。

高通量測(cè)序技術(shù)；循環(huán)血腫瘤DNA；肝細(xì)胞癌

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌）是世界范圍內(nèi)腫瘤發(fā)病率第五順位的惡性腫瘤[1]，我國(guó)是肝癌的高發(fā)國(guó)家，2008年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示我國(guó)肝癌發(fā)病率占全球總發(fā)病率的40%[2]，成為“全球第一大國(guó)”，且近年來(lái)肝癌在我國(guó)惡性腫瘤死亡率中從第3順位上升至第2順位[3]。從病因?qū)W來(lái)看，在全球范圍，丙型肝炎病毒（hepatitis c virus，HCV）感染是肝癌的主要病因，我國(guó)肝癌的病因因素主要有乙型肝炎病毒（hepatitis b virus，HBV）感染、食物黃曲霉毒素（aflatoxin，AF）污染、長(zhǎng)期酗酒以及農(nóng)村飲水藍(lán)綠藻類(lèi)毒素污染等，其中首要因素就是HBV的感染[4]。我國(guó)肝癌發(fā)病率及死亡率居高不下，且有上升趨勢(shì)，已經(jīng)嚴(yán)重危害著我國(guó)居民的身體健康，造成了巨大的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，防治形勢(shì)非常嚴(yán)峻。由于肝癌的早期診斷對(duì)于有效治療和長(zhǎng)期生存至關(guān)重要， 因此， 目前十分強(qiáng)調(diào)肝癌的早期篩查和早期監(jiān)測(cè)。

1 肝癌的診療現(xiàn)狀

1.1 HCC的診斷

HCC是根據(jù)臨床表現(xiàn)、檢查結(jié)果，針對(duì)不同情況進(jìn)行綜合診斷的，而這種診斷流程比較適用于有明顯臨床癥狀的中晚期肝癌患者，絕大多數(shù)無(wú)明顯臨床癥狀早期肝癌患者，我們只能進(jìn)行常規(guī)檢查來(lái)篩查。我們發(fā)現(xiàn)就目前的篩查方式來(lái)看，肝癌的早期診斷率仍然較低，絕大多數(shù)發(fā)現(xiàn)患病后已到中晚期。目前臨床上診斷肝癌的方法雖然較多，如核磁共振、超聲、CT、腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)等。但無(wú)論是超聲、核磁共振還是CT，對(duì)肝原發(fā)性病變的性質(zhì)有時(shí)難以肯定，肝硬化失代償期單純通過(guò)影像學(xué)資料來(lái)鑒定肝癌和肝硬化結(jié)節(jié)比較困難，同時(shí)，影像學(xué)檢查不易發(fā)現(xiàn)體積較小的腫瘤，所以存在較大的漏檢率，雖腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)對(duì)于發(fā)現(xiàn)早期肝癌相比影像學(xué)有優(yōu)勢(shì)，能比影像學(xué)提前3～5個(gè)月發(fā)現(xiàn)腫瘤或腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，但國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)，其對(duì)于診斷早期肝癌也存在一定的漏檢率[5]。

1.1.1 超聲

超聲作為一種無(wú)創(chuàng)、實(shí)時(shí)、便捷的影像檢查方法，在肝癌的診斷和治療領(lǐng)域已有廣泛的臨床應(yīng)用，但研究報(bào)告顯示，常規(guī)彩超對(duì)于肝癌的診斷確診率只有69.6%[6]，對(duì)于小肝癌（病灶大小≤2 ㎝）許-劉[7]等人研究顯示應(yīng)用超聲造影（CEUS）的診斷確診率可達(dá)87.3%，可以發(fā)現(xiàn)常規(guī)彩超對(duì)于肝癌確診率很低，雖CEUS對(duì)于早期肝癌的確診率較高，不容樂(lè)觀的是仍然有12.7%的早期肝癌患者得不到有效診治。

1.1.2 CT和MRI

國(guó)外有研究顯示，在不考慮肝癌病灶大小的情況下，MRI和CT的診斷確診率區(qū)間分別為77%～100%和77%～91%，當(dāng)病灶＞2 ㎝時(shí)，兩者確診率接近100%，而當(dāng)病灶≥1 ㎝且≤2 ㎝時(shí)，MRI的確診率降到45%～80%，C T的確診率降到40%～75%，當(dāng)病灶＜1 cm，病變性質(zhì)不能描述，建議隨訪[8]。我們發(fā)現(xiàn)病變大小是一個(gè)決定MRI和CT確診率的重要因素，病灶越小其確診率越低，故而對(duì)肝癌的早期診斷也不佳。

1.1.3 腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)

肝癌患者的血清學(xué)腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)是目前作為其早期診斷主要手段之一，其中應(yīng)用最廣泛的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）于肝癌的早期臨床檢測(cè)取得了顯著成效，但綜合多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)其敏感度只有39%～65%，特異度只有65%～94%，且約有10%～30%的肝癌患者AFP為陰性[9]。國(guó)外還有研究結(jié)果表明，甲胎蛋白異質(zhì)體3（hs-AFP-L3）可能是一個(gè)有價(jià)值的生物標(biāo)志物檢測(cè)早期肝癌，但其靈敏度和特異性也只有40.4%和81.1%[10]。雖高興的是有研究發(fā)現(xiàn)Des-γcarboxyprothrombin-1一羧基凝血酶原（DCP）、高爾基體糖蛋白73（GP73）、甲胎蛋白（AFP）三指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌的早期診斷的陽(yáng)性檢出率達(dá)到86.8%[11]，但還是有多達(dá)13.2%的患者不能檢出。綜上我們可以發(fā)現(xiàn)肝癌患者的早期診斷仍然是很困難的，所以早期的防治形勢(shì)很?chē)?yán)峻。

1.2 HCC的治療

肝癌的早期診斷率仍然較低，絕大多數(shù)發(fā)現(xiàn)患病后已到中晚期，其中只有有限的病人（少于30%），可以應(yīng)用包括手術(shù)切除、肝臟移植、射頻消融術(shù)、肝動(dòng)脈栓塞術(shù)/肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（transarterial embolization/ chemoembolization，TAE/TACE）、分子靶向治療、多學(xué)科綜合治療（multidisciplinary team，MDT）等治療方式進(jìn)行治療，且其預(yù)后及預(yù)期壽命都很難預(yù)測(cè)[12]。而其中這大部分已失去有效治療的中晚期患者，只能行對(duì)癥支持治療的姑息治療手段，以期改善臨終生活質(zhì)量，也就造成了醫(yī)療資源的極大浪費(fèi)，醫(yī)療成本的顯著增加。目前對(duì)于肝癌治療外科手術(shù)仍是首選，且研究發(fā)現(xiàn)小肝癌（早期肝癌）術(shù)后生存率（無(wú)瘤生存率）：5年為85.0%（64.3%），10年為67.9%（42.2%）[13]，因此肝癌早診斷于其防治意義特別重大。

考慮到肝癌的高度復(fù)雜性和高度異質(zhì)化，目前在肝癌的臨床治療中，特別強(qiáng)調(diào)規(guī)范化的多學(xué)科合作的綜合治療，同時(shí)在這基礎(chǔ)層面上，提出要針對(duì)于每個(gè)患者自身具體情況及某一患者的疾病不同階段進(jìn)行評(píng)估，以期達(dá)到精準(zhǔn)化的個(gè)體治療。本文通過(guò)對(duì)比肝癌常規(guī)診療方式，結(jié)合當(dāng)今先進(jìn)技術(shù)，提出高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)血腫瘤DNA在肝細(xì)胞癌的應(yīng)用一旦技術(shù)成熟，將極大提高肝癌的早期診斷率，甚至達(dá)到100%的早期診斷率，今后將會(huì)對(duì)于肝細(xì)胞癌的診治帶來(lái)極大的幫助。

2 循環(huán)血腫瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）

研究發(fā)現(xiàn)，在分子層面上某些具有特殊功能基因的空間結(jié)構(gòu)的改變，是腫瘤發(fā)生的根源所在。這些結(jié)構(gòu)的改變是腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子基礎(chǔ)，一般表現(xiàn)在單一或多種基因突變、重組等，其結(jié)果是原癌基因的激活或抑癌基因的失活，同時(shí)在腫瘤不同生長(zhǎng)時(shí)期，自身原癌基因或抑癌基因的激活程度是有顯著差別的[14]。通常情況下從首發(fā)的基因空間結(jié)構(gòu)改變到最終發(fā)生臨床腫瘤，一般需要數(shù)年甚至數(shù)十年時(shí)間跨度。因此，如果我們可以在基因空間結(jié)構(gòu)改變到轉(zhuǎn)變成為腫瘤的這個(gè)時(shí)間跨度內(nèi)，設(shè)法篩檢到患者血液內(nèi)腫瘤自身產(chǎn)生的特異性核酸，那么以其為標(biāo)志物，我們就有期實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，從而可以有效的診斷和預(yù)測(cè)，設(shè)計(jì)良好的治療方案達(dá)到最優(yōu)療效[15]。大量研究發(fā)現(xiàn)，一些具有侵襲和微轉(zhuǎn)移生物學(xué)特性的腫瘤細(xì)胞，早期可以通過(guò)浸潤(rùn)和損害宿主結(jié)締組織進(jìn)入血管和淋巴管。此外，不恰當(dāng)?shù)脑\療操作也會(huì)促使腫瘤細(xì)胞人為因素?cái)U(kuò)散，從而進(jìn)入外周血液循環(huán)系統(tǒng)。通常我們把因自身擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，或著因診療操作誘發(fā)進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞稱(chēng)為循環(huán)血腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cell，CTC）[16]。如上述，技術(shù)上假如可以在早期腫瘤患者的外周血液中檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞，然后進(jìn)一步了解腫瘤細(xì)胞的基因突變情況，那么對(duì)于腫瘤病人的早期診斷以及個(gè)體化的精細(xì)治療是具有非常重要的意義17。但數(shù)據(jù)表明，在早期腫瘤患者的外周血中腫瘤細(xì)胞的數(shù)量是極少的，一般情況下在約1×108個(gè)白細(xì)胞或者5×1010個(gè)紅細(xì)胞中只有幾個(gè)至十幾個(gè)不等的腫瘤細(xì)胞，對(duì)于這些通過(guò)外周血液循環(huán)進(jìn)行轉(zhuǎn)移的細(xì)胞，現(xiàn)有常規(guī)的影像學(xué)及血清腫瘤標(biāo)記物等檢測(cè)方法，是無(wú)法直接觀測(cè)的。慶幸的是循環(huán)血腫瘤DNA是除循環(huán)腫瘤細(xì)胞外，實(shí)現(xiàn)腫瘤分子水平診斷的另一種更為行之有效的方法。循環(huán)血腫瘤DNA（ctDNA）是循環(huán)血中游離于細(xì)胞外的機(jī)體內(nèi)源性腫瘤DNA，一般認(rèn)為腫瘤游離DNA主要來(lái)源于凋亡與壞死的腫瘤細(xì)胞。

循環(huán)血腫瘤DNA是一種無(wú)細(xì)胞狀態(tài)的胞外腫瘤DNA，廣泛存在于人體體液中，主要包括在血液、腦脊液以及滑膜液等體液中，其存在方式有兩種形式，其一是游離DNA，包括單鏈DNA結(jié)構(gòu)或雙鏈DNA結(jié)構(gòu)以及單鏈與雙鏈DNA混合結(jié)構(gòu)三種類(lèi)別，其二是DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。早在1947年Mandel和Metais就發(fā)現(xiàn)了循環(huán)核酸。經(jīng)過(guò)一段時(shí)期，Leon等人在1977年第一次發(fā)現(xiàn)了腫瘤患者血清或血漿中的ctDNA濃度值較高，大約是正常人10～100倍，這一結(jié)論的問(wèn)世，為后續(xù)對(duì)腫瘤分子診斷研究，帶了前所未有的新思路和新方法18。目前，對(duì)于腫瘤患者外周血循環(huán)ctDNA升高的原因有多種解釋?zhuān)毡榻邮艿挠^點(diǎn)有以下3種：a、外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其局部或遠(yuǎn)處微轉(zhuǎn)移灶的裂解；b、原發(fā)腫瘤內(nèi)的腫瘤細(xì)胞的壞死或程序性凋亡；c、增生旺盛的腫瘤細(xì)胞自發(fā)性釋放核苷酸[19]。據(jù)文獻(xiàn)研究報(bào)告，上述對(duì)于外周血循環(huán)ctDNA升高的原因中，增生旺盛的腫瘤細(xì)胞自發(fā)性釋放核苷酸及原發(fā)腫瘤內(nèi)的腫瘤細(xì)胞的壞死或程序性凋亡，能更好的解釋外周血ctDNA濃度的升高，因?yàn)?，如果用外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其局部或遠(yuǎn)處微轉(zhuǎn)移灶的裂解來(lái)解釋太過(guò)牽強(qiáng)，依據(jù)我們檢測(cè)到的腫瘤患者外周血ctDNA濃度來(lái)推算，若要滿(mǎn)足這一測(cè)值要求，那么血液中應(yīng)含腫瘤細(xì)胞至少要達(dá)到1000～10000個(gè)/mL，而實(shí)際能檢測(cè)到腫瘤細(xì)胞＜10個(gè)/mL，顯然這一觀點(diǎn)不是最優(yōu)的解釋20。鑒于ctDNA與腫瘤的相關(guān)性高，具有顯著的特異性，同時(shí)相比于從數(shù)量龐大的血細(xì)胞中檢測(cè)出數(shù)個(gè)腫瘤細(xì)胞，往往更容易從高濃度的外周血中發(fā)現(xiàn)ctDNA，同時(shí)對(duì)比于影像學(xué)、血清學(xué)等常規(guī)檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)的腫瘤組織發(fā)生階段，外周血ctDNA濃度的變化要遠(yuǎn)早于其發(fā)現(xiàn)的階段，甚至在腫瘤剛剛萌發(fā)的時(shí)候ctDNA濃度就有改變。因此ctDNA更加適合作為腫瘤早期診斷的標(biāo)志物。時(shí)至今日，通過(guò)對(duì)腫瘤患者外周血循環(huán)核酸中ctDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量和定性檢測(cè)，將有望應(yīng)用在臨床腫瘤的早期診斷、判斷療效、評(píng)估預(yù)后、隨訪跟蹤等方面，從而成為一種新的特異、快捷、方便、微創(chuàng)或無(wú)創(chuàng)的腫瘤分子生物學(xué)檢測(cè)方法。

3 ctDNA突變基因檢測(cè)

雖然ctDNA相對(duì)于循環(huán)腫瘤細(xì)胞在血液中的含量較高，但在循環(huán)核酸總量中所占比例是非常低的，因?yàn)檠褐薪^大多數(shù)循環(huán)核酸是來(lái)源于正常細(xì)胞凋亡所釋放的（稱(chēng)之為野生型），僅少數(shù)來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的核酸即ctDNA（稱(chēng)之為突變型）。數(shù)據(jù)表明，在腫瘤患者早期其ctDNA占循環(huán)核酸總量?jī)H有0.01%～1.7%，即使在中晚期腫瘤患者中其所占的比例也只有8%～10%[21]。此外，突變型與野生型結(jié)構(gòu)上并沒(méi)有顯著差別，通常只有一個(gè)或數(shù)個(gè)堿基的差別，因此基因帶來(lái)的理化特性變化很小，無(wú)疑使得ctDNA檢測(cè)變得極為困難，這也就對(duì)于其檢測(cè)的技術(shù)提出了更高的要求，要求具有更高的靈敏度和特異度。當(dāng)今，ctDNA檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”是核酸序列分析技術(shù)，即DNA測(cè)序技術(shù)，常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)，這種測(cè)序技術(shù)僅能檢測(cè)到樣本中比例高于20%的突變型，但由于外周血中大量野生型的存在，故難以滿(mǎn)足檢測(cè)外周血循環(huán)核酸中低含量突變型核酸（ctDNA）的要求[22]?，F(xiàn)如今隨著測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展，二代測(cè)序技術(shù)即高通量測(cè)序技術(shù)，為這種檢測(cè)提供了可能。

4 高通量測(cè)序技術(shù)（High-throughput sequencing）

隨著技術(shù)的發(fā)展，自2005年以來(lái)，以Roche公司為首的454技術(shù)、Illumina公司的Solexa技術(shù)和ABI公司的SOLiD技術(shù)為標(biāo)志的高通量測(cè)序技術(shù)相繼誕生，極大的改善了之前的這種困境。雖然高通量測(cè)序技術(shù)建立的時(shí)間不長(zhǎng)，但發(fā)展非?？臁Ｒ呀?jīng)應(yīng)用于基因組，包括測(cè)序和表觀基因組學(xué)以及功能基因組學(xué)研究的許多方面[23]。時(shí)至今日，由于DNA測(cè)序技術(shù)的進(jìn)一步改進(jìn)（Schuster，2008），測(cè)序的規(guī)模也從以往每天只能測(cè)定幾十到幾千個(gè)堿基序列發(fā)展到了如今的一次進(jìn)行成千上萬(wàn)個(gè)序列精確測(cè)定的水平，使得基因方面的研究逐步進(jìn)入了基因組和后基因組時(shí)代（Pan等，2008）。這種以一次并行對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子的序列測(cè)定和一般讀長(zhǎng)較短等為標(biāo)志的技術(shù)稱(chēng)為高通量測(cè)序技術(shù)又稱(chēng)“下一代”測(cè)序技術(shù)（"Next-generation" sequencing technology）[24]。目前，通常所說(shuō)的高通量測(cè)序技術(shù)主要是指454 Life Sciences公司、ABI公司和Illumina公司推出的第二代測(cè)序技術(shù)以及Helicos HeliscopeTM和Pacific Biosciences推出的單分子測(cè)序技術(shù)，當(dāng)今一些主流的測(cè)序平臺(tái)歸納如下（表1）。

表1 主流測(cè)序平臺(tái)一覽

5 高通量測(cè)序技術(shù)在肝癌中的應(yīng)用

5.1 肝癌的早期篩查

研究表明肝癌的發(fā)病機(jī)制是涉及多個(gè)基因突變的復(fù)雜過(guò)程，目前已發(fā)現(xiàn)了眾多癌基因與肝癌易感性關(guān)聯(lián)度大，經(jīng)查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，截至到2015為止其易感基因有201個(gè)之多，其中國(guó)內(nèi)外學(xué)者做過(guò)薈萃分析的有以下34個(gè)基因，分別是:CYP1A1、CYP2E1、EGF、EPHX1、ERCC2、GSTM1、GSTP1、GSTT1、HFE、HLA-DQ、HLA-DQB1、HLA-DRB1、IFNL3、IL10、IL1B、IL6、KIF1B、MDM2、MIR146A、MIR196A2、MIR499A、MTHFR、NAT2、OGG1、PNPLA3、PTGS2、SOD2、STAT4、TGFB1、TNF、TP53、UGT1A7、XRCC1、XRCC3。我國(guó)有學(xué)者有研究發(fā)現(xiàn)與肝癌高度相關(guān)的關(guān)鍵基因有11個(gè)，分別是：TP53、IL6、TGFB1、TNF、ESR1、VEGFA、HIF1A、STAT1、IFNG、SOD2、GTNNB1[25]。從這些數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)肝癌不是一個(gè)單基因突變的惡性腫瘤，且到目前為止也沒(méi)有很明確位點(diǎn)，但是隨著研究的深入，我們可以將一些研究透徹的關(guān)鍵性的基因作為篩查的靶點(diǎn)基因，然后將其制備成DNA文庫(kù)（CDNA）作為篩查的探針用，同時(shí)基于在早期肝癌患者的血液中即有CtDNA存在的分子基礎(chǔ)，隨后應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)患者血液中是否存在肝癌相關(guān)的CtDNA，以期早期診斷。同時(shí)我們還可以利用該技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的與肝癌相關(guān)的癌基因，從而進(jìn)一步擴(kuò)充CDNA，以不斷提高篩查的準(zhǔn)確度，不斷向著確診率100%的目的前進(jìn)，最終以希成為除了組織病理病檢之外的另一金標(biāo)準(zhǔn)，我們可以將其稱(chēng)為病檢的另一種形式“液體活檢”。見(jiàn)圖1。

圖1 高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析和臨床診斷流程

5.2 依據(jù)檢測(cè)出來(lái)的靶點(diǎn)指導(dǎo)治療

隨著高通量測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展及應(yīng)用的進(jìn)一步成熟，那么對(duì)于肝癌早期診斷將變得很簡(jiǎn)單，也就越來(lái)越多的肝癌患者在很早期就被診斷出來(lái)，此時(shí)癌腫的原發(fā)灶都還處于微型病灶，對(duì)于現(xiàn)在常規(guī)治療肝癌方法中的“手術(shù)切除、射頻消融術(shù)、TAE/TACE”針對(duì)實(shí)體腫瘤的這些方式將很少使用了，更多可能是針對(duì)靶點(diǎn)的藥物治療，就目前研究來(lái)看，針對(duì)肝癌的藥物治療有以索拉菲尼為代表的分子靶向治療及以?shī)W沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶/亞葉酸鈣（FOLFOX）方案為代表的化學(xué)治療。我們發(fā)現(xiàn)目前分子靶向治療藥物還只是針對(duì)中晚期肝癌的病人進(jìn)行治療，且價(jià)格昂貴，但在可預(yù)期的未來(lái)，隨著高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)血腫瘤DNA在肝癌中的臨床應(yīng)用不斷成熟，越來(lái)越多的肝癌相關(guān)的關(guān)鍵性的靶點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)，以及針對(duì)靶點(diǎn)藥敏性不斷研究，我們相信會(huì)有越來(lái)越多的靶向治療藥物問(wèn)世并將會(huì)逐步應(yīng)用于早期肝癌的治療，同時(shí)可能聯(lián)合化療藥物一并使用，那么對(duì)于肝癌患者的生存時(shí)間將會(huì)帶來(lái)極大的提高。

6 展 望

雖然目前在臨床上尚沒(méi)有高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)循環(huán)血腫瘤DNA在肝細(xì)胞癌的臨床應(yīng)用，但隨著技術(shù)的發(fā)展，隨著測(cè)序成本的不斷降低及對(duì)龐大的測(cè)序數(shù)據(jù)處理能力的進(jìn)一步提高，相信在不久的將來(lái)高通量測(cè)序技術(shù)將會(huì)成為一種腫瘤常規(guī)的臨床檢測(cè)手段，并為肝細(xì)胞癌的早期診治帶來(lái)革命性的變革。這些革命性的變革主要會(huì)表現(xiàn)在以下幾方面：第一、應(yīng)用上述技術(shù)通過(guò)對(duì)大樣本的肝癌患者的全景基因分析，將會(huì)有越來(lái)越多的肝癌主流治療方式，將進(jìn)一步向藥物治療靠攏。第三、根據(jù)肝癌患者檢測(cè)到的不同突變靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)不同的治療方式，完全達(dá)到個(gè)體化精準(zhǔn)治療目標(biāo)。第四、可探究不同作用靶點(diǎn)藥物之間聯(lián)合用藥的臨床藥效關(guān)系，從而規(guī)范用藥方針。鑒于該領(lǐng)域的無(wú)限前景，本文嘗試綜述之。

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本文編輯：趙小龍

The application of circulating tumor DNA detections based on Highthroughput sequencing in hepatocellular carcinoma

YAN Hai-Qiang1,2, SUN Zhi-wei2, MENG Chun-cheng2, CHEN Ye-sheng2, ZHANG Li-ju2, LU Hong-qiao2
（1.College of traditional Chinese medicine in yunnan province,kunming,yunnan 6505042,China;2. The liver and gallbladder surgery,the first people's hospital of yunnan province of yunnan kunming 650034,China)

Hepatocellular carcinoma is one of the most common malignant tumors in the world. China is the world's first "liver cancer", which seriously endangers the health of people all over the world. As the current conventional imaging and serological examination of early diagnosis is low, combined with high degree of malignancy of hepatocellular carcinoma, poor prognosis and other characteristics, the majority of patients diagnosed in the advanced stage, the loss of surgical opportunities, prevention and treatment situation is very grim. Current studies have shown that hepatocellular carcinoma and DNA defects are closely related, early liver cancer patients can detect circulating tumor DNA. With the rapid development of sequencing technology, high-throughput sequencing technology for the determination of circulating tumor DNA provides technical support, this paper summarizes the recent high-throughput sequencing technology based on detection of circulating tumor DNA in hepatocellular carcinoma of the basic and clinical Application experience, with a view to the diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma can bring useful help.

High-throughput sequencing; Circulating tumor DNA; Hepatocellular carcinoma

R735.7

A

ISSN.2095-8242.2017.020.3950.04

云南省教育廳科學(xué)研究基金（NO.2015Z053）

孫志為