弓素梅，郭紅斌

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)科教興農(nóng)中心，河北保定071001 ； 2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000)

中藥產(chǎn)后康防治奶牛產(chǎn)后癱對(duì)免疫機(jī)能的影響

弓素梅1，郭紅斌2

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)科教興農(nóng)中心，河北保定071001 ； 2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000)

為了研究“產(chǎn)后康”防治奶牛產(chǎn)后癱對(duì)免疫機(jī)能的影響，選擇了平均胎次為3，預(yù)產(chǎn)期為產(chǎn)前5 d的中國(guó)荷斯坦奶牛20頭，分為健康組，病理組，治療組和預(yù)防組4組，用試劑盒測(cè)定了血清中 IgM，IgA，IgG，IL-1β和TNF-α含量變化。結(jié)果表明,應(yīng)用“產(chǎn)后康 ”防治奶牛產(chǎn)后癱，奶牛血清中IgA和IgG濃度逐漸升高，IgM濃度變化不明顯，可顯著降低血清中 IL-1β 和 TNF-α 水平。結(jié)論：“產(chǎn)后康 ”用于防治奶牛產(chǎn)后癱具有提高血清IgA和IgG濃度，下調(diào)血清 IL-1β 和 TNF-α 的作用，在產(chǎn)后癱反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮著重要免疫調(diào)節(jié)作用。

中藥 ； 產(chǎn)后康 ； 奶牛 ； 產(chǎn)后癱 ； 免疫機(jī)能

產(chǎn)后癱是奶牛養(yǎng)殖中的常見(jiàn)病，其病因較多而復(fù)雜，主要由于母牛妊娠期間或分娩前后飼養(yǎng)管理不當(dāng)，營(yíng)養(yǎng)不全而導(dǎo)致，患產(chǎn)后癱的奶?？墒股a(chǎn)年限縮短四年左右，如得不到及時(shí)有效的治療，將導(dǎo)致機(jī)體多種功能減弱，生命活動(dòng)嚴(yán)重障礙，甚至死亡，給養(yǎng)殖者造成極大損失[1-3]。奶牛分娩后，機(jī)體從妊娠和分娩應(yīng)激中逐漸轉(zhuǎn)入高產(chǎn)應(yīng)激狀態(tài)，卵巢上既無(wú)黃體又無(wú)卵泡，免疫系統(tǒng)暫時(shí)失去了性腺激素的調(diào)節(jié)，加上乳房開(kāi)始泌乳，機(jī)體丟失大量免疫細(xì)胞和免疫球蛋白，可見(jiàn)，產(chǎn)后奶牛其天然的和獲得性的防御能力都被削弱[4]。在生產(chǎn)實(shí)踐中，通過(guò)辨證，應(yīng)用相應(yīng)中藥方劑治療奶牛產(chǎn)后癱，能夠發(fā)揮明顯的治療效果。本試驗(yàn)是在臨床應(yīng)用療效確切的基礎(chǔ)上，通過(guò)“產(chǎn)后康”防治奶牛產(chǎn)后癱，探討其對(duì)免疫機(jī)能的影響，為中藥防治奶牛產(chǎn)后癱探明機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選擇河北省沽源縣九連城盛豐牧業(yè)有限責(zé)任公司，平均胎次為3，預(yù)產(chǎn)期為產(chǎn)前5 d的中國(guó)荷斯坦奶牛20頭。

1.2 藥品及試劑 “產(chǎn)后康 ”(益母生化散)，購(gòu)自河北商宇有限責(zé)任公司 ，批號(hào):獸藥字(2011)0305951480。

免疫球蛋白M (IgM)，免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白G(IgG)，白細(xì)胞介素1β(IL-1β)ELISA，腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒，均為南京森貝伽生物科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 分組 分為4組，每組5頭。

健康組：產(chǎn)前5 d，機(jī)能狀態(tài)、生產(chǎn)性能良好，無(wú)任何臨床癥狀。

病理組：有患病臨床癥狀(反芻停止，食欲減退，體溫正?；蚵杂猩?，后肢僵硬，站著時(shí)頻繁倒腿，走路步態(tài)不穩(wěn)，有的患牛兩后肢向后移位而呈現(xiàn)出犬坐姿勢(shì))。

治療組：產(chǎn)前5 d，有患病臨床癥狀，治療時(shí)間為產(chǎn)前1 d，產(chǎn)前2 d，產(chǎn)后1～7 d，每天早晚各灌藥1次，每次2袋，每袋350 g。

預(yù)防組：無(wú)臨床癥狀，預(yù)防用藥時(shí)間為產(chǎn)前1 d，產(chǎn)前2 d，產(chǎn)后1～7 d，每天早晚各灌藥1次，每次1袋。

1.3.2 血清的采集 按組分別于產(chǎn)前1天，產(chǎn)后第1天，第3天，第5天和第7天早晨空腹頸靜脈采血10 mL，室溫下靜置，自然析出血清，于離心機(jī)3 000 r/min離心10 min，分離血清標(biāo)號(hào)后，-20 ℃冰箱冷凍保存。1.3.3 項(xiàng)目的測(cè)定及方法 酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)試劑盒檢測(cè)血清中 IgM，IgA，IgG，IL-1β和TNF-α。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用 Excel 2003 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，應(yīng)用SAS-V8 軟件進(jìn)行方差分析 。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清IgM 含量 見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，血清中IgM含量，病理組在各天與健康組和預(yù)防組比較，差異顯著(P<0.05)，與治療組比較，在產(chǎn)前1 d和產(chǎn)后第1、3、5天，差異不顯著(P>0.05)，在產(chǎn)后第7天，差異顯著(P<0.05)；預(yù)防組和健康組之間比較差異不顯著(P>0.05)?？梢?jiàn)，“產(chǎn)后康”防治奶牛產(chǎn)后癱對(duì)IgM含量影響不太明顯。

2.2 血清IgA的含量 見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，血清中IgA含量，病理組產(chǎn)前和產(chǎn)后均低于健康組和預(yù)防組，且在各天中與健康組和預(yù)防組比較，差異極顯著(P<0.01)；治療組與健康組比較，在產(chǎn)前1天，產(chǎn)后第1天差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第3、5、7天，差異不顯著(P>0.05)，與預(yù)防組比較，在第1天差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第3、5、7天，差異顯著(P<0.05)；預(yù)防組與健康組比較，在產(chǎn)前1天，產(chǎn)后第1天差異不顯著(P>0.05)，在產(chǎn)后第3、5、7天，差異顯著(P<0.05)?？梢?jiàn)，中藥“產(chǎn)后康”預(yù)防和治療奶牛產(chǎn)后癱，可以升高血清中的IgA，發(fā)揮防治效果。

表1 血清IgM含量 (mg/mL)

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)大小寫(xiě)字母均不相同表示差異極顯著(P<0.01)，大寫(xiě)字母相同小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母完全相同表示差異不顯著(P>0.05)，下表同

表2 血清IgA含量 (μg/mL)

表3 血清IgG含量 (mg/mL)

2.3 血清IgG測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，血清中IgG含量，病理組產(chǎn)前和產(chǎn)后均低于健康組和預(yù)防組，且在各天中與健康組和預(yù)防組比較，差異極顯著(P<0.01)；預(yù)防組與健康組比較，在產(chǎn)前1 d，產(chǎn)后第1、3天差異不顯著(P>0.05)，在產(chǎn)后第5,7天，差異顯著(P<0.05)；治療組與健康組比較，在產(chǎn)前1 d，產(chǎn)后第1、3天差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第5、7天，差異不顯著(P>0.05)，與預(yù)防組比較，在產(chǎn)前第1天和產(chǎn)后第1、3天，差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第5、7天，差異顯著(P<0.05)?？梢?jiàn),“產(chǎn)后康”治療產(chǎn)后癱奶牛從產(chǎn)后第5天開(kāi)始可以升高血清中IgG含量，并且應(yīng)用“產(chǎn)后康”預(yù)防產(chǎn)后癱奶牛，血清中IgG含量高于健康組，說(shuō)明 “產(chǎn)后康”防治奶牛產(chǎn)后癱能夠升高IgG，增加機(jī)體的免疫力。

2.4 血清IL-1β含量 見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，血清中IL-1β含量，病理組在各天與健康組、預(yù)防組比較，差異極顯著(P<0.01)；預(yù)防組與健康組比較，各天均差異不顯著(P>0.05)，與治療組比較，在產(chǎn)前1 d，產(chǎn)后第1、3天，差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第5、7天，差異不顯著(P>0.05))；治療組與病理組比較，在產(chǎn)前1天，差異不顯著(P>0.05)，在產(chǎn)后第1、3天，差異顯著(P<0.05)，在產(chǎn)后第5、7天，差異極顯著(P<0.01)。

表4 血清IL-1β含量 (ng/L)

表5 血清TNF-α含量 (ng/L)

2.5 血清TNF-α含量 見(jiàn)表5。由表5可見(jiàn)，血清中TNF-α含量，病理組比健康組和預(yù)防組均高，且差異極顯著(P<0.01)；預(yù)防組和健康組比較，在各天差異均不顯著(P>0.05)，與治療組比較，在產(chǎn)前1 d，產(chǎn)后第1、3天，差異極顯著(P<0.01)，在產(chǎn)后第5、7天，差異不顯著(P>0.05))；治療組與病理組比較，在產(chǎn)前1 d，差異不顯著(P>0.05)，在產(chǎn)后第1、3天，差異顯著(P<0.05)，在產(chǎn)后第5、7天，差異極顯著(P<0.01)。

3 討論

“產(chǎn)后康 ”(益母生化散)由益母草、當(dāng)歸、 川芎、桃仁、炮干姜、炙甘草組成，主治奶牛產(chǎn)生惡露不行，血瘀腹痛，胎衣滯留，產(chǎn)后癱瘓[5]。據(jù)現(xiàn)代臨床及動(dòng)物試驗(yàn)證明，方中益母草含有多種微量元素，硒具有增強(qiáng)免疫細(xì)胞活力及提高機(jī)體防御疾病功能體系之作用；當(dāng)歸中的當(dāng)歸多糖對(duì)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)有明顯的刺激作用，對(duì)免疫功能低下的機(jī)體也有免疫調(diào)節(jié)和恢復(fù)作用。白術(shù)有影響非特異性免疫功能，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活力的作用，影響特異性免疫功能，促進(jìn)細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)體液免疫的功能，能使血清IgG含量顯著上升[6]。

IgM在體內(nèi)產(chǎn)生時(shí)間早，持續(xù)時(shí)間短，參與了機(jī)體免疫的第一道防御過(guò)程。IgA 其分子上含有多個(gè)抗原結(jié)合部位，是一種高效能的抗體，在免疫調(diào)節(jié)方面也起到重要作用。IgG 不僅是動(dòng)物血清中含量最豐富的免疫球蛋白，而且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是動(dòng)物機(jī)體抗感染免疫和血清學(xué)診斷的主要抗體[7]。試驗(yàn)中，應(yīng)用“產(chǎn)后康 ”防治產(chǎn)后癱，奶牛血清中IgA和IgG濃度逐漸升高，且極顯著高于患病奶牛組，說(shuō)明“產(chǎn)后康 ”用于防治奶牛產(chǎn)后癱可以提高血清中IgA和IgG濃度，提高機(jī)體的免疫力；“產(chǎn)后康 ”用于防治奶牛產(chǎn)后癱血清中IgM濃度變化不明顯，可能是由于IgM 在體內(nèi)持續(xù)時(shí)間短，其機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。

細(xì)胞因子是免疫細(xì)胞分泌的一類(lèi)具有調(diào)節(jié)活性的低分子量蛋白物質(zhì)的統(tǒng)稱(chēng)，其主要功能是介導(dǎo)免疫細(xì)胞間的相互作用。IL-1β 和 TNF-α 屬于前炎癥細(xì)胞因子，它們參與許多炎癥等相關(guān)的免疫過(guò)程中[8]。本研究中“產(chǎn)后康”防治奶牛產(chǎn)后癱可以顯著降低血清中 IL-1β 和 TNF-α 水平，說(shuō)明“產(chǎn)后康 ”具有下調(diào)患有產(chǎn)后癱奶牛血清 IL-1β 和 TNF-α 的作用，在產(chǎn)后癱反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮著重要免疫調(diào)節(jié)作用。

綜上，應(yīng)用中藥“產(chǎn)后康 ”防治奶牛產(chǎn)后癱，能夠提高機(jī)體中的IgA和IgG濃度，從而提高機(jī)體的免疫力，能夠降低血清中 IL-1β 和 TNF-α 水平，減少骨質(zhì)吸收和骨質(zhì)破壞作用，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，發(fā)揮良好的防治效果。

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2016-07-07

弓素梅(1972-)，女，副教授，碩士，從事中獸醫(yī)學(xué)科研與教學(xué)工作，E-mail：hbndgsmgsm@126.com

S815.2

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0529-6005(2017)04-0059-03