李鳳元+宋淑英

摘要：在遼寧選取3個使用不同廠家豬瘟疫苗的生豬養(yǎng)殖場，對受試場的豬瘟疫苗免疫效果進行評估，比較疫苗免疫效果。結(jié)果表明，在遼寧地區(qū)使用的強制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗，免疫效果較好，其抗體生成率較高，可在遼寧地區(qū)生豬飼養(yǎng)場推廣應(yīng)用，以確保遼寧地區(qū)豬瘟的綜合防控效果。

關(guān)鍵詞：豬瘟疫苗；免疫；效果；遼寧地區(qū)

中圖分類號：S858.28；S851 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2017）05-0007-02

豬瘟（CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV）引起的一種傳染病。該病具有傳染性強、高度接觸性、熱性等特點[1]。豬是豬瘟病毒的惟一天然宿主，該病毒能夠引起各年齡階段豬發(fā)病。由于具有較高的傳染性和致死性，該病被歸類為一類動物疫病[2，3]。

由于我國對豬瘟實施了較長時間的強制免疫，因此該病在我國的流行和發(fā)病特點均已出現(xiàn)了較大的變化。目前，該病的發(fā)病多為隱性感染，感染病豬多無明顯發(fā)病癥狀。亞臨床感染或隱性感染病豬多表現(xiàn)為非典型癥狀[4]，但隱性感染病豬可常期帶毒，并向周圍環(huán)境排出病毒。隱性感染的母豬可將攜帶的病毒垂直傳播給新生的仔豬，造成木乃伊胎、死胎或仔豬帶毒。當機體在其他因素作用下出現(xiàn)抵抗能力降低時易造成豬瘟的大規(guī)模暴發(fā)[5]。給生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。疫苗免疫仍是豬瘟防控的首選方案，但目前市場上的豬瘟疫苗品種繁多，各種疫苗免疫效果參差不齊，給豬瘟的防控帶來不確定因素[6]。本試驗在遼寧選取了3個使用不同廠家豬瘟疫苗的生豬養(yǎng)殖場，對受試場的豬瘟疫苗免疫效果進行評估，比較疫苗免疫效果，為遼寧地區(qū)豬瘟防控提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試豬場 分別在遼寧撫順、錦州、阜新地區(qū)選取3家規(guī)?；i飼養(yǎng)場，每場選取4窩16頭仔豬（公母各半）進行豬瘟疫苗免疫效果比較試驗。

1.1.2 受試疫苗 撫順豬場使用本省豬瘟強制免疫疫苗；錦州豬場使用杭州某疫苗公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗；阜新豬場使用北京某疫苗公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗。

1.1.3 主要材料 豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒購于深圳康百德生物科技有限公司；無菌注射器、真空采血管、電熱恒溫培養(yǎng)箱（CDF-DX006）、恒溫數(shù)顯水浴鍋（BC303）、多道可調(diào)微量移液器（Eppendorf）、單道可調(diào)微量移液器（Thermo fisher）等由遼寧省重大動物疫病應(yīng)急中心提供。

1.2 方法

1.2.1 血液樣品采集 第1次采血：在仔豬23日齡（首免前2 d）時，對受試仔豬進行前腔靜脈采血，用于測量母源抗體。第2次采血：在首免后30 d對各組受試仔豬進行第2次采血。第3次采血：在加強免疫后30 d進行第3次采血。

1.2.2 疫苗免疫 第1次免疫：在仔豬25日齡時，于頸側(cè)部注射豬瘟疫苗，注射劑量按照說明書參考劑量進行。第2次免疫：在首輪免疫后30 d，仔豬55日齡時，在頸部肌肉進行豬瘟疫苗加強免疫。

1.2.3 豬瘟抗體ELISA檢測

（1）血清制備。將采集的血液按照常規(guī)血清制備方法室溫放置，當析出血清后離心。血清應(yīng)清亮、無溶血。

（2）洗滌液制備。將濃縮的洗滌液于恒溫水浴鍋中使其保持在25 ℃，搖動使沉淀的鹽溶解后用無菌去離子水進行20倍稀釋，稀釋后的洗滌液于4 ℃保存。

（3）樣品稀釋。在血清稀釋板中，按1∶40的體積比稀釋待檢血清。同時按照1∶40的體積比稀釋陽性對照和陰性對照。

（4）加樣方法。取預(yù)包被的檢測板，將稀釋好的待檢血清100 μL加入檢測板孔中。陰性對照和陽性對照各加2個孔，每孔加入100 μL。輕輕振勻孔中的樣品，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中溫育30 min。

甩掉孔中的溶液，用洗滌液洗板5次，每孔加入洗滌液200 μL，每次靜置3 min，在干凈的吸水紙上拍干。

每孔加入羊抗豬酶標二抗100 μL，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育30 min。洗滌5次并在吸水紙上拍干。

每孔先加底物液A 50 μL，再加底物液B 50 μL，混勻后室溫避光顯色10 min。

每孔加入終止液50 μL，并在10 min內(nèi)進行結(jié)果測定。

（5）結(jié)果判定。在酶標儀中測量各孔OD630 nm。試驗成立條件為陽性對照孔平均OD630 nm≥1.0，陰性對照孔平均OD630 nm<0.30。樣品OD630 nm>0.35為陽性，否則為陰性。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒檢測，3不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的豬瘟疫苗免疫后抗體生成率具體情況見表1。由表1可知，受試養(yǎng)殖場豬瘟母源抗體水平均較低，其中阜新場母源抗體水平最低，為0；撫順受試場較高，為6.25%；錦州受試場母源抗體水平最高，為18.75%；首免后，撫順受試場強制免疫疫苗抗體生成水平最高，檢測抗體陽性率為100%；北京某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（阜新受試場）抗體檢測陽性率次之，為87.50%；杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（錦州受試場）抗體檢測陽性率最低，為81.25%。加強免疫后，杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（錦州受試場）抗體檢測陽性率最高，為100%；強制免疫疫苗（撫順受試場）的抗體生成水平次之，檢測抗體陽性率為93.75%；北京某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（阜新受試場）抗體檢測陽性率最低，為75.00%。

綜合分析表1的3種疫苗抗體檢測結(jié)果，遼寧地區(qū)使用的豬瘟強制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗在此次試驗中豬瘟抗體陽性率相對較好。強制免疫疫苗在首免后，疫苗保護率可達100%，加強免疫后抗體保護率可達93.75%；杭州某公司生產(chǎn)的疫苗可在加強免疫后達到100%的抗體保護率，且首免后抗體保護率也相對較高，達到81.25%。因此這兩種疫苗抗體水平和保護率較為理想。

3 討論

豬瘟為OIE規(guī)定的A類傳染病，是國際貿(mào)易中重要的檢查傳染病。該病最早在1833于美國發(fā)現(xiàn)，初稱為豬霍亂[7]。最初許多歐洲國家如荷蘭、比利時、意大利等已宣布消滅該病，但有報道指出上述國家又相繼暴發(fā)豬瘟。在我國，豬瘟流行特點變化較大，主要以隱性感染和慢性感染為主，易造成母豬帶毒，使仔豬先天性感染，對豬群健康造成潛在風險，是影響生豬養(yǎng)殖業(yè)的主要疫病之一，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[8-10]。

目前，豬瘟的防控主要是以疫苗免疫為主。但目前市售豬瘟疫苗種類眾多，免疫效果也不盡相同。因此選擇免疫效果好、抗體保護率高的疫苗，對豬瘟進行有效地綜合防控具有較為實際的應(yīng)用意義。本試驗對遼寧地區(qū)使用較多的3種豬瘟疫苗的免疫效果進行了評估，結(jié)果表明，在遼寧地區(qū)使用的強制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗其免疫效果較好，抗體生成率較高，可在遼寧地區(qū)生豬飼養(yǎng)場推廣應(yīng)用，以確保遼寧地區(qū)豬瘟的綜合防控效果。

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