陳 瑩，丘建芳，黃小強(qiáng)，許 文，2，李小艷，吳水生#（.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 35022；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心，福州 35022）

建澤瀉鹽炙工藝優(yōu)化及其HPLC指紋圖譜的建立Δ

陳 瑩1＊，丘建芳1，黃小強(qiáng)1，許 文1，2，李小艷1，吳水生1#（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心，福州 350122）

目的：優(yōu)化建澤瀉鹽炙工藝并建立其高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜。方法：以23-乙酰澤瀉醇B、總?cè)坪亢屯庥^性狀綜合評(píng)分為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，優(yōu)化建澤瀉鹽炙工藝中用鹽量、炒制溫度和炒制時(shí)間3個(gè)因素的水平。采用HPLC法分別在208、245 nm波長(zhǎng)下建立10批建澤瀉鹽炙品的指紋圖譜，經(jīng)軟件比較其與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度。結(jié)果：最優(yōu)工藝為每100 kg澤瀉加10 kg水溶解的2 kg鹽，悶潤(rùn)1 h，在100 ℃下炒制8min。驗(yàn)證試驗(yàn)中，3批鹽炙品外觀性狀均符合要求，綜合評(píng)分平均值為93.94（RSD＝6.63%，n＝3）；23-乙酰澤瀉醇B和總?cè)坪糠€(wěn)定，RSD分別為7.41%、7.39%（n＝3）。在208、245 nm波長(zhǎng)下分別標(biāo)定了建澤瀉鹽炙品的17、10個(gè)共有峰；10批樣品指紋圖譜相似度均大于0.9。結(jié)論：優(yōu)化的建澤瀉鹽炙工藝合理可行、重現(xiàn)性好；建立的指紋圖譜共有峰穩(wěn)定，可用于建澤瀉鹽炙品的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

建澤瀉；鹽炙工藝；正交試驗(yàn)；高效液相色譜；指紋圖譜；23-乙酰澤瀉醇B；三萜類化合物

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉[Alisma orientale（Sam.）Juzep.]的干燥塊莖，別名水瀉、水澤等，味甘、性寒，歸腎、膀胱經(jīng)，是具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂作用的傳統(tǒng)中藥材[1]。澤瀉在福建地區(qū)具有悠久的栽培歷史[2]，宋代《本草圖經(jīng)》和明代《本草乘雅半偈》均記載福建產(chǎn)澤瀉、清代《本草精匯品要》記載閩產(chǎn)澤瀉為道地藥材，稱“建澤瀉”。從古至今澤瀉有多種炮制方法，如《雷公炮炙論》首載的酒浸法[3]及后炙、鹽水伴、鹽水炒焦、麩炒、土炒等炮制方法[4]。其中鹽澤瀉能引藥下行，具有增強(qiáng)滋陰、利水的作用，為目前臨床使用的主要澤瀉炮制飲片[5]?，F(xiàn)代化學(xué)和藥理研究表明，澤瀉利尿、降血脂的主要有效成分為原萜烷型四環(huán)三萜[6]。目前對(duì)澤瀉炮制工藝的研究以鹽炙為主，已有以23-乙酰澤瀉醇B為指標(biāo)對(duì)澤瀉鹽炙工藝進(jìn)行優(yōu)化的文獻(xiàn)報(bào)道[7]，但是已有研究表明不同炮制溫度和時(shí)間下澤瀉三萜成分易發(fā)生相互轉(zhuǎn)化[8]，故單一指標(biāo)難以全面反映澤瀉鹽炙品的內(nèi)在品質(zhì)。同時(shí)建澤瀉作為道地藥材，以成品的外觀性狀作為炮制工藝的參考指標(biāo)難以做到客觀、可控、穩(wěn)定和可重復(fù)，且其鹽炙炮制工藝和鹽炙品指紋圖譜均少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，故有必要開(kāi)展建澤瀉規(guī)范化炮制工藝及其炮制品指紋圖譜的評(píng)價(jià)研究。

本試驗(yàn)以2015年版《中國(guó)藥典》（一部）澤瀉項(xiàng)下指標(biāo)23-乙酰澤瀉醇B及建澤瀉4種主要三萜（23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇C，以下稱總?cè)疲┑目偤?、外觀性狀為綜合指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和多指標(biāo)正交試驗(yàn)法，考察炮制用鹽量、溫度和時(shí)間3個(gè)因素的最優(yōu)水平，優(yōu)化建澤瀉鹽炙工藝，并在此基礎(chǔ)上建立建澤瀉鹽炙飲片高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，分別對(duì)208 nm和245 nm波長(zhǎng)下的共有峰進(jìn)行標(biāo)定和指認(rèn)，從多指標(biāo)和整體成分群定性的角度綜合評(píng)價(jià)建澤瀉鹽炙品，為其炮制和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AT HPLC儀（日本島津公司）；FY135中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）；DV215CD十萬(wàn)分之一分析天平（美國(guó)奧豪斯公司）；KQ-500E臺(tái)式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；CCFG-160B電炒鍋（福建省邵武市永樂(lè)無(wú)線電廠）；M illi-Q超純水機(jī)（美國(guó)默克密理博公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

10批生澤瀉飲片（購(gòu)于福建省金山醫(yī)藥實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，來(lái)自福建建甌澤瀉藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范基地，批號(hào)分別為：130110、130115、130121、130127、130211、130219、130227、130309、130316、130325，編號(hào)為S1～S10）經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)范世明高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為澤瀉科植物澤瀉[Alisma orientale（Sam.）Juzep.]的干燥塊莖，樣本存放于福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物標(biāo)本室；23-乙酰澤瀉醇B對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111846-201102，純度：≥98.5%）；澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇C對(duì)照品（批號(hào)分別為：YAO02、YAO03、YAO08，純度：＞98.5%）和澤瀉醇F、11-去氧澤瀉醇B、16-羰基澤瀉醇A、16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉烯醇對(duì)照品（批號(hào)分別為：YAO046、YAO07、YAO11、YAO12、YAO13、YAO04）均由福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院制備，供指紋圖譜定性對(duì)比使用；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純，鹽為食用級(jí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 4種三萜類化合物含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Ultimate XB-C1（8150mm× 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（73∶27）；流速：1.0 m L/m in；檢測(cè)波長(zhǎng)：208、245 nm；柱溫：30；進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 分別取23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇C對(duì)照品適量，精密稱定，加入乙腈溶解并定容，分別制備成質(zhì)量濃度為151.7、152.5、196.0、156.5μg/m L的單一對(duì)照品貯備液。試驗(yàn)所用其他質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液分別由乙腈稀釋貯備液得到。

2.1.3 供試品溶液的制備 取過(guò)40目篩的澤瀉樣品粉末（批號(hào)：130110）約0.5 g，精密稱定并置于具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25m L，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（功率：250W，頻率：50 kHz）提取30m in，放冷，再稱質(zhì)量，用乙腈補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液備用，即得。

2.1.4 專屬性考察 取上述對(duì)照品和供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，2個(gè)波長(zhǎng)下色譜峰分離良好，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.1.5 線性關(guān)系考察 分別取“2.1.2”項(xiàng)下方法制備的各對(duì)照品貯備液，用乙腈稀釋，制備成7個(gè)系列質(zhì)量濃度的各對(duì)照品溶液。精密吸取10μL，進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（y）對(duì)分析物質(zhì)量濃度（x）作線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 4種三萜類成分線性關(guān)系考察結(jié)果Tab 1 Results of linear relationship of 4 kinds of triterpenoids

2.1.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率試驗(yàn) 按相關(guān)方法進(jìn)行考察。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中4種成分峰面積的RSD均未超過(guò)1.47%（n＝6），表明精密度良好；重復(fù)性試驗(yàn)中4種成分含量的RSD均未超過(guò)1.63%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中4種成分峰面積的RSD均未超過(guò)1.56%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定；加樣回收率試驗(yàn)中4種成分的平均回收率分別為100.18%、96.59%、97.56%、97.79%（RSD均未超過(guò)2.70%，n＝6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.1.7 含量測(cè)定方法 分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算含量。

2.2 單因素試驗(yàn)考察鹽炙工藝

2.2.1 綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 以23-乙酰澤瀉醇B、總?cè)坪繛閮?nèi)在指標(biāo)，外觀性狀為外在指標(biāo)，應(yīng)用綜合加權(quán)評(píng)分法處理數(shù)據(jù)。中藥飲片的外觀性狀評(píng)分參照《中國(guó)藥典》對(duì)鹽澤瀉性狀的要求[1]，即外觀性狀總分為飲片表面色澤、質(zhì)地與氣味評(píng)分之和，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。

表2 外觀性狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab2Appearanceandcharacterscoringcriterion

[9]，確定各指標(biāo)權(quán)重為23-乙酰澤瀉醇B含量50%、總?cè)坪?5%、外觀性狀15%。評(píng)分方法：各項(xiàng)評(píng)分均為y＝xi/xmax×權(quán)重系數(shù)×100（xmax為各項(xiàng)指標(biāo)中含量或外觀性狀評(píng)分最高值，xi為對(duì)應(yīng)各項(xiàng)指標(biāo)或外觀性狀評(píng)分值），總分為各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分的總和。

2.2.2 用鹽量的考察在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別稱取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4g鹽，分別加入4g水溶解，悶潤(rùn)澤瀉，使鹽水滲入澤瀉飲片內(nèi)部，飲片潤(rùn)濕程度基本相同。取澤瀉5份，每份40g，悶潤(rùn)1h后，100下炒制12 min，考察用鹽量。將上述澤瀉鹽炙品粉碎后過(guò)40目篩，評(píng)價(jià)各指標(biāo)。結(jié)果，用鹽量為0.8g時(shí)，綜合評(píng)分最高，隨后逐漸下降，詳見(jiàn)表3。

表3 單因素試驗(yàn)考察結(jié)果Tab3Resultsofsinglefactortest

2.2.3 炒制溫度的考察2015年版《中國(guó)藥典》（四部）0213炮制通則規(guī)定鹽炙法以文火加熱，將待炮炙品炒至規(guī)定程度。已有報(bào)道指出文火溫度為80～120[10]，而溫度過(guò)高澤瀉易出現(xiàn)焦斑，故選擇80～160考察炒制溫度。取澤瀉5份，各40g，分別用4g水溶解0.8g鹽量制備的鹽溶液悶潤(rùn)1h后，經(jīng)不同溫度（80、100、120、140、160）炒制12min后取出，放涼。將上述澤瀉鹽炙品粉碎后過(guò)40目篩，評(píng)價(jià)各指標(biāo)。結(jié)果，隨著炒制溫度的升高，綜合評(píng)分值先上升后下降，100時(shí)最高，詳見(jiàn)表3。

2.2.4 炒制時(shí)間的考察取澤瀉5份，各40g，分別用4 g水溶解0.8g鹽量制備的鹽溶液悶潤(rùn)1h，炒制溫度為100，分別炒制不同時(shí)間（4、8、12、16、20min），取出放涼。將上述澤瀉鹽炙品粉碎后過(guò)40目篩，評(píng)價(jià)各指標(biāo)。結(jié)果，炒制時(shí)間為12min時(shí)綜合評(píng)分值最高，詳見(jiàn)表3。但考慮到4min炮制時(shí)間過(guò)短，飲片外觀性狀不佳，結(jié)合此結(jié)果，選擇將正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中時(shí)間的3個(gè)水平分別設(shè)為8、10、12min。

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化鹽炙工藝

根據(jù)單因素試驗(yàn)考察結(jié)果，確定A（用鹽量，g）、B（炒制溫度，）、C（炒制時(shí)間，min）3因素為正交試驗(yàn)考察因素，每個(gè)因素?cái)M定3個(gè)水平，以綜合評(píng)分為指標(biāo)，采用L（934）正交表設(shè)計(jì)試驗(yàn)。因素與水平見(jiàn)表4，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析結(jié)果見(jiàn)表6。

表4 因素與水平Tab4Factorsandlevels

表5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab5Designandresultsoforthogonaltest

表6 方差分析結(jié)果Tab6Resultsofvarianceanalysis

表5結(jié)果表明，對(duì)綜合評(píng)分影響大小依次為B（炒制溫度）＞A（用鹽量）＞C（炒制時(shí)間）。方差分析結(jié)果表明，因素B對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，而A和C無(wú)顯著影響。選取最優(yōu)鹽炙工藝為A2B2C1，即每40g澤瀉加4g水溶解的0.8g鹽（每100kg澤瀉加10kg水溶解的2kg鹽），悶潤(rùn)1h，在100下炒制8min。

2.4 中試驗(yàn)證試驗(yàn)

取3份大小均勻的干燥生澤瀉飲片，每份40kg，在中試設(shè)備上按上述優(yōu)化的鹽炙工藝條件制備3批鹽澤瀉飲片，驗(yàn)證工藝的可靠性。結(jié)果制備的3批鹽澤瀉外觀性狀均符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)，各指標(biāo)綜合評(píng)分均大于87，批間RSD小于7.41%（n＝3）。另外，對(duì)每批鹽澤瀉的指標(biāo)均平行測(cè)定3次，結(jié)果，批次內(nèi)的澤瀉指標(biāo)含量相對(duì)接近，批內(nèi)RSD小于3%（n＝3）；且外觀性狀評(píng)分穩(wěn)定，RSD小于4%（n＝3），均符合《中國(guó)藥典》要求。這表明優(yōu)化的工藝穩(wěn)定可行，得到的成品質(zhì)量穩(wěn)定。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 7 Resu ltsof verification test（n＝3）

2.5 建澤瀉鹽炙品指紋圖譜研究

2.5.1 色譜條件 色譜柱：Ultimate XB-C1（8150 mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～5min，35%A；5～20min，35%A～55%A；20～35m in，55%A～65%A；35～45m in，65%A～75%A；45～55m in，75%A～85%A；55～65m in，85%A）；流速：1m L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：208、245 nm；柱溫：30；進(jìn)樣量：10μL。

2.5.2 供試品溶液的制備 按優(yōu)化的建澤瀉鹽炙工藝制備10批鹽澤瀉飲片，精密稱取過(guò)40目篩鹽炙品粉末2.0 g，置于50m L具塞錐形瓶中，其余操作同“2.1.3”項(xiàng)。

2.5.3 混合對(duì)照品溶液的制備 取23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇C、澤瀉醇F、11-去氧澤瀉醇B、16-羰基澤瀉醇A、16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉烯醇對(duì)照品適量，精密稱定，分別加入乙腈溶解并稀釋制備成約1.0μg/m L對(duì)照品溶液并混合，供定性分析使用。

2.5.4 方法學(xué)考察 （1）系統(tǒng)適用性及專屬性試驗(yàn)。精密吸取混合對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果在2個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)下各化合物與其相鄰峰的分離度均大于1.5，拖尾因子為0.95～1.05，理論板數(shù)以各色譜峰計(jì)均大于10 000，表明該條件下方法專屬性良好。（2）精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)。取批號(hào)為130110的澤瀉鹽炙品供試品溶液，按相關(guān)方法進(jìn)行考察。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.16%～0.34%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD為0.45%～3.87%（n＝6），表明儀器精密度良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.12%～0.27%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD為1.13%～4.99%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；重復(fù)性試驗(yàn)中各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.04%～0.12%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD為2.81%～4.96%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.5.5 澤瀉鹽炙品指紋圖譜建立 （1）參照峰的選擇。取“2.5.2”項(xiàng)制備的10批澤瀉鹽炙品供試品溶液各10 μL，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，得到10批澤瀉鹽炙品的HPLC圖譜。選擇指紋圖譜中保留時(shí)間適中且峰面積較穩(wěn)定的色譜峰為參照峰。結(jié)果表明，在208 nm波長(zhǎng)下13號(hào)峰（23-乙酰澤瀉醇B）和245 nm波長(zhǎng)下6號(hào)峰（23-乙酰澤瀉醇C）與相鄰色譜峰分離良好、基線穩(wěn)定，并且在澤瀉中含量較高，故分別確定為208 nm和245 nm波長(zhǎng)下的參照峰。（2）共有峰的標(biāo)定及指認(rèn)。將10批（S1～S10）澤瀉鹽炙品HPLC圖譜導(dǎo)入中國(guó)藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”軟件（2004A版）中進(jìn)行色譜峰匹配，經(jīng)多點(diǎn)校正后進(jìn)行峰自動(dòng)匹配，計(jì)算并生成對(duì)照?qǐng)D譜R。圖譜在208 nm波長(zhǎng)下共標(biāo)定17個(gè)共有峰，經(jīng)對(duì)照品定性，指認(rèn)6個(gè)峰，其中5、6、8、10、13、15號(hào)峰分別為澤瀉醇F、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B；245 nm波長(zhǎng)下共標(biāo)定10個(gè)共有峰，指認(rèn)5個(gè)峰，其中1、2、3、4、6號(hào)峰分別為16-羰基澤瀉醇A、16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、23-乙酰澤瀉醇C。2個(gè)波長(zhǎng)下共有峰峰面積總和均占各自波長(zhǎng)下所有檢出色譜峰峰面積總和的95%以上。（3）相似度評(píng)價(jià)。應(yīng)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”軟件（2004A版），將10批澤瀉鹽炙品的HPLC圖譜導(dǎo)入并計(jì)算相似度。結(jié)果，10批澤瀉鹽炙品相似度在208 nm波長(zhǎng)下分別為0.999、0.999、0.999、0.997、0.998、0.998、0.994、0.998、0.998、0.999，在245 nm波長(zhǎng)下分別為0.993、0.999、0.994、0.998、0.985、0.996、0.996、0.997、0.991、0.946，均大于0.9，表明各批藥材質(zhì)量穩(wěn)定，批次間差異較小。生成的對(duì)照?qǐng)D譜和雙波長(zhǎng)HPLC指紋圖譜見(jiàn)圖2。

3 討論

建澤瀉是閩產(chǎn)道地藥材之一，為臨床常用大宗中藥，文獻(xiàn)記載有酒制、鹽制、清蒸、麩制、土制等諸多炮制方法，“健脾生用或酒炒用，滋陰利水鹽水炒”[11]。澤瀉甘寒，入腎、膀胱經(jīng)；鹽味咸，引藥入腎與膀胱，能夠增強(qiáng)澤瀉的利水滲濕、泄熱通淋之功。因而開(kāi)展?jié)蔀a的鹽制炮制機(jī)制研究、制定鹽制工藝標(biāo)準(zhǔn)有積極的現(xiàn)實(shí)意義。

3.1 工藝優(yōu)化指標(biāo)的選擇

首先，澤瀉化學(xué)成分主要為三萜類成分[12]，是其利尿[13]、降脂[14]、降糖[15]等作用的有效物質(zhì)基礎(chǔ)。《中國(guó)藥典》將23-乙醇澤瀉醇B作為指標(biāo)性成分[1]，因此，本試驗(yàn)將其作為炮制工藝優(yōu)化的指標(biāo)之一。其次，澤瀉三萜化合物性質(zhì)不穩(wěn)定，具體表現(xiàn)在產(chǎn)地加工、炮制等過(guò)程中會(huì)發(fā)生化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化，因此選擇4種三萜化合物的總含量[16]作為總?cè)圃u(píng)價(jià)指標(biāo)。此外，由于外觀性狀評(píng)價(jià)與炮制程度有相關(guān)性[4]，筆者同時(shí)參考文獻(xiàn)[6]，設(shè)置了色澤、質(zhì)地、粉性、焦斑情況及味咸情況等外觀性狀指標(biāo)。

3.2 2個(gè)試驗(yàn)中色譜條件及方法學(xué)考察項(xiàng)目的區(qū)別

圖2 高效液相指紋圖譜Fig 2 HPLC fingerprint

在4種成分的含量測(cè)定和建澤瀉鹽炙品指紋圖譜的建立中，流動(dòng)相分別采用了等度洗脫和梯度洗脫。等度洗脫可將4個(gè)化合物進(jìn)行分離和洗脫，但在建立指紋圖譜時(shí)，由于澤瀉中成分復(fù)雜，等度洗脫不能達(dá)到較多成分基線分離的效果，而梯度洗脫則可，并可得到更多分離度良好的色譜峰，故后者采用梯度洗脫。另外，在指紋圖譜的建立中，方法學(xué)考察的項(xiàng)目主要是根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局印發(fā)的《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》和文獻(xiàn)[17]設(shè)立的，而含量測(cè)定的方法學(xué)考察項(xiàng)目則是根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》方法學(xué)驗(yàn)證指導(dǎo)原則設(shè)立的，故二者考察項(xiàng)目不同。

3.3 建澤瀉鹽炙品的指紋圖譜研究

本試驗(yàn)在優(yōu)化建澤瀉鹽炙工藝的基礎(chǔ)上，首次研究并建立了福建道地藥材澤瀉鹽炙品的雙波長(zhǎng)（208 nm和245 nm）指紋圖譜，各共有峰穩(wěn)定性較好，相似度分別在0.994和0.946以上，符合指紋圖譜建立的要求，故該方法可以對(duì)建澤瀉鹽炙品進(jìn)行有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

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Technology Optim ization of Stir-bake w ith Saltwater Processing for Fujian A lismatis Rhizoma and Establishm ent of Its HPLC Fingerprint

CHEN Ying1，QIU Jianfang1，HUANG Xiaoqiang1，XU Wen1，2，LIXiaoyan1，WU Shuisheng1（1.School of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122，China；2.Biomedical Research and Development Center，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122，China）

OBJECTIVE：To optim ize the stir-bake w ith saltwater processing technology for Fujian A lismatis rhizoma，and establish its HPLC fingerprint.METHODS：Using 23-acetyl alisol B，total triterpenoids contents and appearance as comprehensive indexes，single factor experiment and orthogonal testwere employed，3 factors’levels including the quantity of salt，processing temperature and time were optimized.HPLC was used to develop fingerprints of 10 batches of Fujian Alismatis rhizoma atwavelength of 208，245 nm；the sim ilarity between fingerprints and control profile was compared by using software.RESULTS：The optimal technology was as follow as 2 kg salt dissolved w ith 10 kg water for each 100 kg Fujian A lismatis rhizoma，moistening for 1 h，stir-frying for 8 minutes under 100 ℃.In verification test，the appearance of 3 batches of processed products were all in line w ith requirements，average comprehensive score was 93.94（RSD＝6.63%，n＝3）；23-acetyl alisol B and total triterpenoids contents were stable（RSD＝7.41%，7.39%，n＝3），respectively.Totally 17 and 10 common peaksweremarked in 208 nm and 245 nm respectively；sim ilarities of 10 batches of samples’fingerprintswere higher than 0.9.CONCLUSIONS：Optim ized stir-bake w ith saltwater technology is reasonable，feasible，and reproducible；the stability of common peaks of established fingerprints can conduct effective quality evaluation for Fujian Alismatis rhizoma processed by saltwater.

Fujian A lismatis rhizoma；Stir-bake w ith saltwater technology；Orthogonal test；HPLC；Fingerprint；23-acetyl alisol B；Triterpenoids

R283

A

1001-0408（2017）16-2244-05

2016-09-01

2016-10-17）

（編輯：劉 萍）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.U1205022）；國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（No.2011BAI01B06）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局國(guó)家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目（No.ZYB2H-Y-FJ-09）；福建省教育廳中青年教師教育科研項(xiàng)目（No.JA15242）

＊碩士研究生。研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制。電話：0591-22861135。E-mail：chenying578119815@163.com

#通信作者：教授。研究方向：中藥復(fù)方藥效物質(zhì)及其作用機(jī)制。電話：0591-22861135。E-mail：wushuishengwss@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.16.23