孟凡生，朱風(fēng)華，陳甫，鞏青軍，常順華，朱連勤*

（1.臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東臨沂276005；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島266109）

霉變飼料中添加酯化葡甘露聚糖對(duì)肉雞肝臟霉菌毒素含量和免疫功能的影響

孟凡生1，朱風(fēng)華2，陳甫2，鞏青軍2，常順華2，朱連勤2*

（1.臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東臨沂276005；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島266109）

本試驗(yàn)選取108羽1日齡AA肉雞，隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。第1組飼喂常規(guī)飼料；第2組飼喂霉變飼料；第3～5組分別飼喂添加0.05%、0.1%和0.2%酯化葡甘露聚糖（EGM）的霉變飼料；第6組飼喂添加0.1%霉可吸的霉變飼料，研究霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟霉菌毒素含量和免疫功能的影響。結(jié)果表明：與飼喂霉變飼料組相比，霉變飼料中添加0.1%、0.2%EGM和0.1%霉可吸，肉雞肝臟中黃曲霉毒素B1（AFB1）含量分別降低了62.02%、79.44%和57.27%，玉米赤霉烯酮（ZEN）含量分別降低了66.33%、70.72%和52.01%，嘔吐毒素（DON）含量分別降低了55.72%、81.33%和81.05%（P＜0.05）；肉雞血液新城疫（NDV）抗體水平分別提高了36.86%、66.27%和52.94%，傳染性法氏囊?。↖BDV）抗體水平分別提高了26.81%、46.81%和32.72%，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別提高了13.22%、14.83%和13.31%（P＜0.05）。霉變飼料中添加0.2%EGM時(shí)，肉雞肝臟AFB1、ZEN含量及血液NDV、IBDV抗體水平與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。綜上，EGM可以有效吸附AFB1、ZEN和DON，霉變飼料中適宜添加劑量為0.2%。

肉雞；酯化葡甘露聚糖；霉菌毒素；肝臟；免疫功能

霉菌毒素污染谷物和飼料，對(duì)動(dòng)物健康及生產(chǎn)效益造成嚴(yán)重危害，引起養(yǎng)殖業(yè)的高度關(guān)注。張丞等（2009）調(diào)查我國(guó)玉米和配合飼料霉菌毒素的污染情況發(fā)現(xiàn)，80%樣品含2種或2種以上霉菌毒素，70%樣品含4種及以上霉菌毒素，配合飼料中玉米赤霉烯酮（ZEN）和嘔吐毒素（DON）的平均含量分別為333 ng/g和1277 ng/g，最高含量分別為1579 ng/g和5117 ng/g。朱風(fēng)華等（2016）檢測(cè)玉米中黃曲霉毒素B1（AFB1）、ZEN和DON含量發(fā)現(xiàn)，55%玉米含有兩種以上霉菌毒素，玉米中AFB1、ZEN和DON超標(biāo)率分別是20%、15.79%和28.13%。張曉云（2009）報(bào)道，霉菌毒素可導(dǎo)致畜禽免疫抑制、繁殖障礙、肝腎出血和變性壞死等不同程度的損傷。因此，研制高效的霉菌毒素吸附劑具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。Aravind等（2003）報(bào)道，利用酵母細(xì)胞壁制備的酯化葡甘露聚糖（EGM）對(duì)霉菌毒素有很好的吸附作用，在霉菌毒素污染的飼料中添加EGM，可顯著提高動(dòng)物的增重和飼料報(bào)酬。于宗民（2007）、付學(xué)鋒（2008）、馬小明（2009）和李華（2009）等利用植物源葡甘露聚糖成功制備了EGM，并以小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行了EGM對(duì)黃曲霉毒素、T-2毒素、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素吸附能力的研究，均取得了較好的結(jié)果。本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究霉菌毒素污染飼料中添加不同水平的EGM對(duì)肉雞肝臟霉菌毒素含量和免疫功能的影響，確定EGM對(duì)霉菌毒素的吸附效果及適宜的添加劑量，為EGM在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物與處理選取108只1日齡的AA肉雞，隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；第2組為陽(yáng)性對(duì)照組，飼喂霉變飼料；第3～5組為試驗(yàn)組，在霉變飼料中分別添加0.05%、0.1%和0.2%的EGM，第6組為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組，在霉變飼料中添加0.1%霉可吸。試驗(yàn)期為30 d。

1.2基礎(chǔ)日糧和霉變飼料基礎(chǔ)日糧（肉小雞配合飼料-510和肉中雞配合飼料-511）購(gòu)自山東某飼料公司。霉變飼料由基礎(chǔ)日糧霉變而成。飼料中霉菌毒素含量見(jiàn)表1。

表1 飼料中霉菌毒素的含量μg/kg

1.3飼養(yǎng)管理試驗(yàn)肉雞均自由采食、飲水，籠養(yǎng)，舍內(nèi)通風(fēng)良好，溫度和濕度按照飼養(yǎng)規(guī)程進(jìn)行控制，并做好衛(wèi)生消毒工作。

1.4試驗(yàn)儀器設(shè)備和試劑

1.4.1儀器設(shè)備MK3型酶標(biāo)儀（賽默飛世爾公司）、TDL-5型臺(tái)式離心機(jī)、AR2140型電子分析天平。

1.4.2藥品和試劑EGM（植物源）為青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝病與中毒病實(shí)驗(yàn)室合成；霉可吸購(gòu)自北京奧特奇生物制品有限公司；檢測(cè)AFB1、ZEN和DON的ELISA試劑盒，購(gòu)自江蘇省蘇微微生物研究公司。

1.5檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1肝臟中毒素含量的測(cè)定試驗(yàn)第15天和30天時(shí)，每組隨機(jī)抽取3羽雞，撲殺后迅速取肝臟1 g左右制成勻漿，用ELISA試劑盒檢測(cè)AFB1、ZEN和DON等毒素的含量。

1.5.2免疫功能的檢測(cè)

1.5.2.1外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的檢測(cè)試驗(yàn)第15天和30天時(shí)，翅靜脈采血1 mL，肝素鈉抗凝。用MTT法（四甲基偶氮唑鹽）測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。

1.5.2.2血漿中抗體水平的檢測(cè)試驗(yàn)第15天和30天時(shí)，心臟采血10 mL，離心取血清，按照抗體檢測(cè)試劑盒上的步驟采用ELISA法檢測(cè)血漿中新城疫（NDV）抗體和傳染性法氏囊病（IBDV）抗體的水平。

1.5.2.3免疫器官指數(shù)的檢測(cè)試驗(yàn)第15天和30天時(shí)，從各組中隨即撲殺3羽雞，準(zhǔn)確稱量體重，迅速解剖，取胸腺、脾臟和法氏囊，剔除附著組織，稱其鮮重，并計(jì)算其指數(shù)。

計(jì)算公式：免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重（g）/體重（kg）。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2結(jié)果

2.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中霉菌毒素含量的影響

2.1.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中AFB1含量的影響由表2可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中AFB1含量比第2組分別降低了87.43%、8.78%、57.31%、86.21%和53.65%（P＜0.05），對(duì)照組和第4～6組顯著低于第3組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組顯著低于第4組和第6組（P＜0.05）。試驗(yàn)至30 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中AFB1含量比第2組分別降低了80.83%、23.77%、62.02%、79.44%和57.27%（P＜0.05），對(duì)照組和第4～6組顯著低于第3組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組顯著低于第4組和第6組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組差異不顯著（P＞0.05）。2.1.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中ZEN含量的影響由表3可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中ZEN含量分別比第2組降低了91.71%、34.42%、66.33%、70.72%和52.01%（P＜0.05）。對(duì)照組、第4～6組顯著低于第3組（P＜0.05），對(duì)照組、第4組和第5組顯著低于第6組（P＜0.05），對(duì)照組顯著低于第4組和第5組（P＜0.05）。試驗(yàn)至30 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中ZEN含量分別比第2組降低了87.59%、8.37%、49.70%、69.80%和58.44%（P＜0.05）。對(duì)照組顯著低于第4組和第6組（P＜0.05）。

表2 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中AFB1含量的影響pg/g

表3 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中ZEN含量的影響pg/g

2.1.3霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中DON含量的影響由表4可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中DON含量分別比第2組降低了91.74%、38.18%、55.72%、81.33%和81.05%（P＜0.05）。對(duì)照組、第4～6組顯著低于第3組（P＜0.05），對(duì)照組、第5組和第6組顯著低于第4組（P＜0.05）。試驗(yàn)至30 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞肝臟中DON含量分別比第2組降低了88.89%、31.21%、55.72%、55.31%和51.96%（P＜0.05）。對(duì)照組、第5組和第6組顯著低于第3組（P＜0.05），對(duì)照組顯著低于第5組和第6組（P＜0.05）。

表4 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中DON含量的影響pg/g

2.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞免疫功能的影響

2.2.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞血液抗體水平的影響

2.2.1.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞血液中NDV抗體水平的影響由表5可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組、第4～6組肉雞血液中NDV抗體水平顯著高于第2組和第3組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組顯著高于第4組（P＜0.05），對(duì)照組顯著高于第6組（P＜0.05），第5組和對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)至30 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞血液中NDV抗體水平分別比第2組提高了77.64%、27.84%、36.86%、66.27%和52.94%（P＜0.05），對(duì)照組、第5組和第6組顯著高于第3組和第4組（P＜0.05），對(duì)照組顯著高于第6組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組差異不顯著（P＞0.05）。

表5 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞血液NDV抗體水平的影響

2.2.1.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞血液中IBDV抗體水平的影響由表6可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞血液中IBDV抗體水平顯著高于第2組（P＜0.05），對(duì)照組、第5組和第6組顯著高于第3組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)至30d，對(duì)照組和第3～6組肉雞血液中IBDV抗體水平比第2組分別提高了49.09%、20.45%、26.81%、46.81%和32.72%（P＜0.05），對(duì)照組和第5組顯著高于第3組、第4組和第6組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組差異不顯著（P＞0.05）。

表6 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞血液IBDV抗體水平的影響

2.2.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞外周血液LTR的影響由表7可以看出，試驗(yàn)至15 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞外周血液LTR顯著高于第2組（P＜0.05），第3組顯著高于第2組（P＜0.05）。試驗(yàn)至30 d，對(duì)照組和第3～6組肉雞外周血液LTR比第2組分別提高了14.92%、10.11%、13.22%、14.83%和13.31%（P＜0.05），對(duì)照組和第5組顯著高于第3組、第4組和第6組（P＜0.05），對(duì)照組和第5組差異不顯著（P＞0.05）。

表7 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞LTR的影響%

2.2.3霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.2.3.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞胸腺指數(shù)的影響由表8可以看出，試驗(yàn)至30 d，第2組、第3組和第4組肉雞的胸腺指數(shù)顯著低于對(duì)照組、第5組和第6組（P＜0.05），對(duì)照組、第5組和第6組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2.3.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞脾臟指數(shù)的影響由表9可以看出，試驗(yàn)至15 d和30 d，各組間肉雞脾臟指數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。

2.2.3.3霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)的影響由表10可以看出，試驗(yàn)至15 d，第2組、第3組和第4組肉雞的法氏囊指數(shù)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），對(duì)照組、第5組、第6組間差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)至30 d，第2組肉雞的法氏囊指數(shù)顯著低于對(duì)照組、第4組和第5組（P＜0.05），對(duì)照組、第4組和第5組間差異不顯著（P＞0.05）。

表8 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞胸腺指數(shù)的影響g/kg

表9 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞脾臟指數(shù)的影響g/kg

表10 霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)的影響g/kg

3討論

3.1霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞肝臟中霉菌毒素含量的影響AFB1在消化道吸收后主要分布于肝臟，有“肝臟毒”之稱。劉艷麗等（2007）報(bào)道，給7日齡櫻桃谷鴨飼喂含150 μg/kg AFB1的全價(jià)飼料，7 d后檢測(cè)肝臟中毒素含量達(dá)到53.4 ng/g。Banlunara（1998）等研究表明，向受霉菌毒素污染的小鴨飼料中添加EGM可有效減輕AFB1引起的肝臟損傷。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，霉變飼料中添加0.1%的EGM和0.1%霉可吸組，肝臟中AFB1的含量差異不顯著，說(shuō)明植物源和微生物來(lái)源的EGM對(duì)于AFB1的吸附作用是相當(dāng)?shù)?。霉變飼料中添?.2%EGM組肉雞肝臟中AFB1的含量與對(duì)照組差異不顯著，并且這兩組肉雞肝臟AFB1含量顯著低于其余各組，表明在霉變的飼料中添加0.2%EGM對(duì)于AFB1的吸附效果最好。

ZEN主要在肝臟中進(jìn)行分解代謝，肝臟也是ZEN主要損傷的靶器官之一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在霉變飼料中添加0.1%、0.2%EGM和0.1%霉可吸與霉變飼料組相比，可以顯著降低肝臟中ZEN的含量。對(duì)照組肉雞肝臟ZEN含量顯著低于0.1%EGM組和0.1%霉可吸組。對(duì)照組與添加0.2%EGM組相比，肉雞肝臟ZEN含量差異不顯著。表明在霉變飼料中添加0.2%EGM對(duì)ZEN的吸附效果更好。

DON隨飼料被消化吸收后，分布于機(jī)體各個(gè)臟器和組織，其中以肝臟中含量最高，對(duì)肝臟造成的損傷較嚴(yán)重。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在霉變飼料中添加吸附劑可以顯著降低肉雞肝臟中DON的含量，添加0.2%EGM和0.1%霉可吸效果比較好，但是這兩組肉雞肝臟毒素含量仍然顯著高于對(duì)照組，這可能與EGM對(duì)DON吸附能力相對(duì)較弱有關(guān)。Murthy等（2002）報(bào)道，EGM能吸附肉雞腸道中黃曲霉毒素高達(dá)75%～90%，T-2毒素僅為30%～35%?？梢?jiàn)，EGM對(duì)不同種類霉菌毒素的吸附能力有明顯差異。

綜上所述，EGM對(duì)霉菌毒素的吸附效果與霉可吸相當(dāng)。在霉變飼料中添加植物源EGM可以降低肉雞肝臟中AFB1、ZEN和DON的含量，最佳添加劑量為0.2%。

3.2霉變飼料中添加EGM對(duì)肉雞免疫功能的影響黃凱等（2015）體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DON能降低脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、以及基質(zhì)中IL-2、IL-4、IL-6、IL-12和INF-γ水平。黃凱等（2016）給肉雞腹腔注射含50、100 μg/mL DON溶液1 mL，肉雞血液IL-4、IL-6、Ig A、Ig M、NDV抗體和IBDV抗體水平顯著降低。Vlata等（2006）發(fā)現(xiàn)，高濃度的ZEN（30 μg/mL）能夠抑制T和B淋巴細(xì)胞的增殖。Basmacioglu等（2005）在黃曲霉毒素污染的飼料中添加0.1%EGM發(fā)現(xiàn)，可以扭轉(zhuǎn)其降低血液總蛋白和淋巴細(xì)胞數(shù)的不利影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飼喂霉變飼料組肉雞法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以及血液NDV抗體和IBDV抗體水平降低。霉變飼料中添加EGM和霉可吸組，肉雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)以及血液中NDV抗體、IBDV抗體水平均顯著提高，說(shuō)明添加吸附劑可以減輕霉菌毒素對(duì)免疫器官的損害。添加0.1%EGM與添加0.1%霉可吸組相比，肉雞法氏囊指數(shù)顯著提高，肉雞胸腺指數(shù)以及NDV抗體、IBDV抗體水平顯著降低，脾臟指數(shù)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率沒(méi)有明顯差異，EGM和霉可吸吸附霉菌毒素的能力相仿。添加0.2%EGM組的肉雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以及血液中NDV抗體和IBDV抗體水平顯著高于其余各組。添加0.2%EGM組和0.1%霉可吸組肉雞胸腺指數(shù)與對(duì)照組差異不顯著。表明霉變飼料中添加0.2%EGM可更有效吸附霉菌毒素，降低霉菌毒素對(duì)肉雞體液免疫和細(xì)胞免疫的不利影響。

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This experiment was to study the effect of esterified glucomannan（EGM）added in the moldy feed on the content of toxin in liver and the immune function of the broiler chickens.A total of 108 one-old-day AA broiler chickens were randomly divided into 6 groups.The first group was fed with basal diet，the second group was fed with the moldy feed，the third，the forth and the fifth groups were fed the moldy feed added with 0.05%，0.1%and 0.2%EGM respectively，the sixth group was fed the moldy feed added with 0.1%mycosorb.The results showed that：Compared with feeding moldy feed group，the content of aflatoxin B1（AFB1）in liver of broiler chickens of the group which fed moldy feed added with 0.1%EGM，0.2%EGM and 0.1%mycosorb was reduced by 62.02%，79.44%and 57.27%；the content of zearalenone（ZEN）was reduced by 66.33%，70.72%and 52.01%；the content of deoxynivalenol（DON）was reduced by 55.72%，81.33%and 81.05%（P＜0.05）；the level of newcastle disease virus（NDV）antibody was increased by 36.86%，66.27% and 52.94%；the level of infectious bursal disease virus（IBDV）antibody was increased by 26.81%，46.81%and 32.72%，and the lymphocyte transformation rate was increased by 13.22%，14.83%and 13.31%（P＜0.05）.The content of AFB1and ZEN of liver，and the level of NDV antibody and IBDV antibody of broiler chickens in the fifth group was not significantly difference compered with the basal diet group（P＞0.05）.It can be seen that EGM can effectively adsorb AFB1，ZEN and DON，and adding with 0.2%EGM in moldy feed is appropriate.

broiler chickens；esterified glucomannan；mycotoxins；liver；immune function

S816.7

A

1004-3314（2017）12-0032-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171209

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（SDAIT-11-17，SDAIT-13-011-07）

*通訊作者