汪 霞 滕岳臻

（1 遼陽市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 遼陽 111000；2 遼陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，遼寧 遼陽 111000）

氣質(zhì)聯(lián)用法測定蔬菜中44種農(nóng)藥多殘留的QuECHERS方法研究

汪 霞1滕岳臻2

（1 遼陽市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 遼陽 111000；2 遼陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，遼寧 遼陽 111000）

目的 建立了蔬菜中44種農(nóng)藥的QuECHERS前處理方法。方法 樣品采用乙腈提取，經(jīng)液液萃取凈化，用氣相色譜-質(zhì)譜在選擇離子（SⅠM）模式下分析。以保留時間和特征離子定性定量。結(jié)果 方法在0.05、0.1、0.5 mg/kg添加回收率為71.4%～108.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜20%，最低檢測限在0.002～0.2 mg/L。結(jié)論 符合蔬菜的多殘留分析要求。

蔬菜；農(nóng)藥；多殘留；QuECHERS

農(nóng)藥殘留分析中，為應(yīng)對日益增多的檢測項目和嚴(yán)格的限量要求，應(yīng)用GC-MS進(jìn)行多組分分析已成為研究和應(yīng)用的熱點(diǎn)[1]。本文將44種農(nóng)藥分為有機(jī)氯、有機(jī)磷、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯4大類，由于農(nóng)藥種類多，干擾物質(zhì)多，前處理的提取和凈化就更加重要。本文采用QuECHERS法通過對提取、凈化、濃縮等前處理條件的優(yōu)化[2-4]，找出最佳的前處理方法，適用于蔬菜中44種農(nóng)藥多殘留的檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器條件：Agilent6890氣相色譜儀，Agilent的四極桿5973質(zhì)譜儀（配HP7683自動進(jìn)樣器）。選配毛細(xì)管柱HP-5MS（0.25 mm×30 m ×0.25 μm）及質(zhì)譜工作站，RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Satorius 1602型萬分之一電子分析天平（德國制造）；BF2000氮吹儀（北京八方世紀(jì)）；KQ-300DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器；勻漿機(jī)。

1.2 主要試劑：乙腈、正己烷、丙酮、石油醚均為農(nóng)殘級試劑；氯化鈉、無水硫酸鈉為分析純（用前經(jīng)馬弗爐高溫灼燒）；載氣為高純氦氣（純度為99.999%），農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所研制，用標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)識的溶劑逐級稀釋，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.3 氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）條件 GC：色譜柱為HP-5MS（0.25 mm ×30 m×0.25 μm）；載氣為氦氣（純度為99.999%），流速1.0 mL/min；柱溫：初溫70 ℃，保持1 min，以25 ℃/min 的速率升溫至200 ℃，以2 ℃/min的速率升溫至210 ℃，以10 ℃/min的速率升溫至260 ℃，以5 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持10 min；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量2 μL；進(jìn)樣口溫度250 ℃。MS：電子轟擊離子源，轟擊電壓70 eV；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃，調(diào)諧方式為自動調(diào)諧。

1.4 樣品的提取與凈化：首先將樣品切成小塊，放入食物粉碎機(jī)中充分粉碎，準(zhǔn)確稱取10.0 g，加入30 mL乙腈，超聲提取20 min。稱取5 g氯化鈉放入分液漏斗中，將勻漿好的樣品過濾至漏斗中，劇烈振蕩5 min，靜置20 min。待乙腈相與水相分層后，準(zhǔn)確移取乙腈相10 mL轉(zhuǎn)移于雞心瓶中，用無水硫酸鈉除水后，在50 ℃下用氮?dú)鈱⑻崛∫捍抵两?。加? mL（V正己烷：V丙酮=1∶1），定容至1 mL，供GCMS分析。

2 結(jié)果與討論

本實驗所針對的目標(biāo)農(nóng)藥共有44種分為有機(jī)氯、有機(jī)磷、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯4大類，每一類農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)與極性都非常類似，所以從每一類農(nóng)藥中選出一種進(jìn)行研究，這樣可以省略大量的數(shù)據(jù)處理工作，并且能得到正確的結(jié)果。選擇代表農(nóng)藥的結(jié)果如下：有機(jī)磷農(nóng)藥及其類似物中選擇甲拌磷為代表農(nóng)藥；六六六及其類似物中選擇β-666為代表農(nóng)藥；DDT及其類似物中選擇p，p’-DDT為代表農(nóng)藥；氨基甲酸酯類農(nóng)藥選擇敵百蟲為代表農(nóng)藥；擬除蟲菊酯類農(nóng)藥選擇聯(lián)苯菊酯為代表農(nóng)藥；具有代表性的農(nóng)藥還有百菌清和滅幼脲。農(nóng)藥的添加濃度均為0.1 mg/kg。

2.1 樣品前處理方法的優(yōu)化

2.1.1 樣品的采集、粉碎及取樣量：綜合文獻(xiàn)資料、國家無公害蔬菜的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)和實驗室實際情況等因素，本次實驗選擇了20 g樣品量。這一采樣量可以在滿足樣本容量不會造成采樣歧視，同時保證數(shù)據(jù)在統(tǒng)計學(xué)上可靠性和盡可能的減少樣品制備步驟。

2.1.2 關(guān)于提取劑的選擇和用量

2.1.2.1 冰乙酸添加量的選擇：根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)中需要一次性提取農(nóng)藥多殘留的要求，選擇乙腈作為提取劑，但是有些農(nóng)藥，例如百菌清，在乙腈中不穩(wěn)定，所以應(yīng)加入適量的冰乙酸，使其在提取過程中不會分解。本實驗設(shè)置了三組實驗值：冰乙酸添加量分別為0.05%、0.1%和1%。通過添加回收率可以看出，在冰乙酸與乙腈的體積比是0.1%時，各代表農(nóng)藥的回收率均在85%～90%，比較理想，因此，選取了回收率較好的0.1%冰乙酸-乙腈為提取劑。

2.1.2.2 提取劑用量的選擇：提取劑的體積應(yīng)保證完全浸泡樣品，但用量太多又會造成浪費(fèi)且在濃縮過程中造成較大的損失。本實驗選取了三組實驗值：20 mL、30 mL和50 mL。通過回收率試驗可以看出，提取劑為30 mL時，農(nóng)藥提取較充分且提取劑用量較少。

2.1.3 關(guān)于凈化條件的選擇

2.1.3.1 QuEChERS方法填料的選擇：本實驗采用的QuEChERS方法是將凈化劑PSA直接加入到提取液中，與傳統(tǒng)的固相萃取法相比可節(jié)約大量柱活化和淋洗所需的溶劑，并可節(jié)省裝柱時間。與C18、NH2多種吸附劑相比，PSA能更有效地凈化提取液。與經(jīng)典的乙睛提取、弗羅里硅土柱凈化法相比較，以30 mL乙睛作提取劑可節(jié)省溶劑，減少環(huán)境污染。同時，加入石墨化碳黑后用乙睛提取可以避免樣品基質(zhì)中蠟質(zhì)、脂肪和一些親醋性色素的干擾，大大減少了提取液中的雜質(zhì)。

2.1.3.2 QuEChERS方法填料用量的選擇：石墨化碳黑的用量應(yīng)保證盡量除去雜質(zhì)，但用量太多又會造成浪費(fèi)且在測定過程中造成較大的干擾。本實驗選取了三組實驗值：加入量分別為0.01 g、0.05 g和0.1 g。由SⅠM圖可以看出，在石墨化碳黑的加入量為0.01 g時，樣品中的雜質(zhì)較多，基質(zhì)干擾較大，而加入量為0.05 g和0.1 g時樣品較干凈，基質(zhì)干擾基本消除。綜合考慮，確定在提取凈化的過程中石墨化碳黑的加入量為0.05 g。

2.1.4 關(guān)于濃縮條件的選擇：本實驗主要考察了旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和氮?dú)獯蹈蓛煞N濃縮方法，在50 ℃條件下，對比了各自回收率。通過實驗可以看出，氮?dú)獯蹈傻幕厥章事愿哂谛D(zhuǎn)蒸發(fā)的回收率，但是對于15 mL的提取液，用氮?dú)獯蹈珊臅r較多。因此，在濃縮時先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮到3 mL左右后再轉(zhuǎn)用氮?dú)獯蹈伞?/p>

2.2 準(zhǔn)確度、靈敏度和不確定度：向白菜、胡蘿卜、芹菜、番茄、黃瓜五種蔬菜中分別添加濃度為0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.5 mg/kg的44種農(nóng)藥的混合標(biāo)樣，然后進(jìn)行提取、凈化。大多數(shù)農(nóng)藥的平均回收率在71.4%～108.3%，回收率的變異系數(shù)在10.62%～0.32%，本方法的最低檢出限在0.002～0.2 mg/kg，能夠達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)的要求。以甲拌磷為例，取包含因子k=2，方法的擴(kuò)展不確定度u=k×U總=2× 0.073=0.146。

2.3 參考譜圖，見圖1。

圖1 44種農(nóng)藥選擇離子監(jiān)測圖

[1] 高陽,徐應(yīng)明.QuEchERS提取法在農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境學(xué)報,2014,31(2):110-117.

[2] 胡西洲,程運(yùn)斌,胡定金.QuEchERS法測定蔬菜中有機(jī)磷類農(nóng)藥多殘留分析[J].中國測試技術(shù),2006,32(3):132～133.

[3] 王建忠,郭春景,李娜,等.改進(jìn)的QuEchERS方法結(jié)合UPLCMS/MS同時快速檢測8種蔬菜中77種農(nóng)藥殘留[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014(4):93-95.

[4] 劉勝男,衛(wèi)星,鞏衛(wèi)東.QuEchERS方法在檢測分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā),2013(10):36-38.

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