晁魯平，黃旭東，金晶，倪佳丹，王楠，蔣益虹

（浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，馥莉食品研究院，浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省食品加工技術(shù)與裝備工程中心，浙江杭州310058）

不同產(chǎn)地蓮心功能性成分的評(píng)價(jià)

晁魯平，黃旭東，金晶，倪佳丹，王楠，蔣益虹*

（浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，馥莉食品研究院，浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省食品加工技術(shù)與裝備工程中心，浙江杭州310058）

測(cè)定了建寧、廣昌、寶應(yīng)、湖南、洪湖5個(gè)產(chǎn)地中蓮心的生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量。用乙醇超聲提取蓮心粉末，分光光度法，得到蓮心生物堿含量最高的是廣昌蓮心7.18 mg/g；蓮心中黃酮含量最高的是洪湖蓮心14.28 mg/g。利用有機(jī)溶劑提取法得到甾醇粗提物，經(jīng)過(guò)皂化，SPE柱萃取，衍生，氮吹后，GC-MS測(cè)定蓮心中甾醇含量，得到蓮心中甾醇含量最高的是寶應(yīng)蓮心0.40 mg/g，主要成分為β-谷甾醇。利用水蒸氣蒸餾法提取蓮心中的揮發(fā)油，并利用GC-MS測(cè)定揮發(fā)油的含量及成分，得到蓮心揮發(fā)油含量最高的是湖南蓮心0.60%，其中亞油酸及亞油酸酯類、棕櫚酸及棕櫚酸酯含量較多，還有少量的植醇、酚類及角鯊烯。本文通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地蓮心生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量，建立相應(yīng)數(shù)據(jù)庫(kù)，以及對(duì)不同產(chǎn)地蓮心進(jìn)行功能評(píng)價(jià)，可為蓮心資源的研究提供依據(jù)。廣昌蓮心各功能性成分含量均較高，開發(fā)利用廣昌蓮心資源具有較廣的應(yīng)用前景。

蓮心；生物堿；黃酮；甾醇；揮發(fā)油；氣相質(zhì)譜

蓮心，為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）成熟種子中的綠色幼葉及胚根。蓮心主產(chǎn)于湖南、湖北、福建、江蘇、浙江等地，為秋季采收蓮子時(shí)，從蓮子中剝?nèi)窀啥?，是藥食兩用且具有保健功能的天然產(chǎn)物[1]。蓮心中含有生物堿類化合物、黃酮類化合物、植物甾醇等功能性成分，具有降血壓、降血糖、清除自由基、抗心律失常、清熱降火等作用[2]。而蓮心揮發(fā)油中含有較多亞油酸、油酸、棕櫚酸、酚類物質(zhì)[3]等，具有較強(qiáng)的抗氧化性[4]，能預(yù)防和治療心血管疾病[5-6]，可以作為一種醫(yī)療保健油進(jìn)行開發(fā)。目前對(duì)蓮心生物堿和黃酮的提取多采用超聲波輔助提取法[7-8]，然后通過(guò)分光光度法檢測(cè)其含量。而對(duì)于甾醇和揮發(fā)油，一般通過(guò)超臨界CO2萃取法提取[9]，然后采用氣質(zhì)聯(lián)用的方法測(cè)定。

目前對(duì)蓮心中的蓮心堿、黃酮和揮發(fā)油的研究較多，而對(duì)蓮心中的甾醇研究較少，而且缺少對(duì)于不同產(chǎn)地蓮心不同功能性成分的綜合評(píng)價(jià)研究。本試驗(yàn)通過(guò)超聲波輔助法提取蓮心中生物堿和黃酮，皂化法提取蓮心甾醇，水蒸氣蒸餾法提取蓮心揮發(fā)油，然后測(cè)定含量。通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地（建寧、廣昌、寶應(yīng)、湖南、洪湖）蓮心中生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量，建立部分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)不同產(chǎn)地蓮心進(jìn)行功能評(píng)價(jià)，為研究蓮心藥理作用、作用機(jī)理提供依據(jù)，對(duì)蓮心的后續(xù)有效開發(fā)和充分利用其保健和醫(yī)藥價(jià)值具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

試驗(yàn)材料選自我國(guó)五大蓮品系：建寧蓮心、廣昌蓮心、寶應(yīng)蓮心、湖南蓮心、洪湖蓮心。樣品于2014年6月采集于各個(gè)地區(qū)。將新鮮的蓮心樣品充分烘干后粉碎，過(guò)80目篩，備用。

乙醇、三氯甲烷、冰醋酸、高氯酸、乙醚、正己鹽酸、氨水、香草醛（分析純）、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蓮心堿標(biāo)準(zhǔn)品、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品、豆甾醇標(biāo)準(zhǔn)品：阿拉丁試劑有限公司。

RE-52AAA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海嘉鵬科技有限公司；EL20試驗(yàn)室pH計(jì)：METTLER TOLEDO（上海）有限公司；722E型紫外可見分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；B8/224S電子分析天平（萬(wàn)分之一）：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；SK8210HP超聲波清洗器：上?？茖?dǎo)（KUDOS）超聲儀器有限公司；F30400209水浴加熱器：意大利VELP公司；ProElutSilica500mg/6mL/30/pkg：迪馬科技有限公司；7890B氣相色譜儀、5977A質(zhì)譜儀：安捷倫科技有限公司。

1.2 生物堿和黃酮的測(cè)定

改進(jìn)孫俊杰[7]的方法，超聲輔助提取蓮心總堿，以蓮心堿為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（Y=10.343X+0.003 8，R2=0.998 1），測(cè)定樣品總生物堿的含量[7]。按照吳芳彤的方法，提取黃酮，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（Y=0.4022X-0.0025，R2=0.9994），測(cè)定樣品總黃酮含量[8]。

1.3 甾醇含量的測(cè)定

對(duì)國(guó)標(biāo)GB/T 25223-2010《動(dòng)植物油脂甾醇組成和甾醇總量的測(cè)定氣相色譜法》甾醇的測(cè)定前處理方法進(jìn)行改良，甾醇粗提物通過(guò)皂化、SPE柱萃取、衍生、氮吹后，氣質(zhì)進(jìn)樣，以豆甾醇為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（Y=17.638X-57.164，R2=0.997 0），GC-MS 法測(cè)定蓮心中總甾醇含量。圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)為NIST05版標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)。

1.4 揮發(fā)油的提取

采用水蒸氣蒸餾的方法提取蓮心中的揮發(fā)性成分，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，用峰面積歸一化法測(cè)定各個(gè)化合物在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量。改進(jìn)林文津[10]的方法，對(duì)樣品進(jìn)行進(jìn)樣。圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)為NIST05版標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地蓮心生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量分析

不同產(chǎn)地蓮心生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量見表1。

表1 不同產(chǎn)地蓮心生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油的含量Table 1 Contents of alkaloids，flavonoids，sterol，volatile oil in the Plumula nelumbinis of different origins

由表1可知，不同產(chǎn)地的蓮心生物總堿含量差異較大。生物總堿含量最高的是廣昌蓮心7.18 mg/g，含量最低的是湖南蓮心1.33 mg/g。蓮心中黃酮含量最高的是洪湖蓮心14.28 mg/g，含量最低的是湖南蓮心10.32 mg/g。不同產(chǎn)地蓮心中的甾醇含量無(wú)明顯差異，甾醇含量最高的是廣昌蓮心和寶應(yīng)蓮心0.40 mg/g，含量最低的是洪湖蓮心0.33 mg/g。根據(jù)GC-MS分析，蓮心中的甾醇主要為β-谷甾醇。

2.2 蓮心揮發(fā)油的成分含量分析

不同產(chǎn)地蓮心揮發(fā)油主要成分見表2，不同產(chǎn)地蓮心揮發(fā)油的GC-MS總離子圖見圖1。

圖1 不同產(chǎn)地蓮揮發(fā)油GC-MS總離子圖Fig.1 Total ion chromatogram of GC-MS of Plumula nelumbinis oil from different origins

表2 不同產(chǎn)地蓮心揮發(fā)油主要成分Table 2 Main constitute of volatile oil of Plumula nelumbinis from different origins

蓮心揮發(fā)油得率最高的是湖南蓮心0.60%，最低的是湖建寧蓮心0.44%。由圖1和表2得出，建寧、廣昌、寶應(yīng)、蓮心的揮發(fā)油主要成分較相似，主要成分為二十一烷，棕櫚酸乙酯，亞油酸乙酯等，而湖南和湖北洪湖蓮心的揮發(fā)油主要成分差異較大，但都含有棕櫚酸等。

表3 湖南蓮心揮發(fā)油成分Table 3 Volatile oil constitute of Hu Nan Plumula nelumbinis

湖南蓮心揮發(fā)油成分見表3。

從表3中，湖南蓮心揮發(fā)油共檢測(cè)到29個(gè)峰，占總揮發(fā)油的90.98%。鑒定得到的化合物中，烷烴類（C10～C25）占 28.48%，n-棕櫚酸及酯類 19.51%，亞油酸酯類27.31%，植醇4.6%，萘類化合物2.67%，芥酸酰胺2.55%，酚類2.34%，角鯊烯1.08%等。

3 討論與結(jié)論

陳笑用超聲結(jié)合回流提取湖南蓮心總堿的平均得率可達(dá)10.06 mg/g，而單一回流提取總堿得率為7.14 mg/g[11]。楊健用回流法提取，HPLC檢測(cè)，得到湖北洪湖的蓮心堿含量為0.748%[12]。潘楊用超聲提取，HPLC檢測(cè)不同產(chǎn)地蓮心蓮心堿的含量，得到湖南湘潭的為0.489%，江蘇寶應(yīng)的為0.115%～0.719%，江西廣昌的為0.612%，福建建寧為0.637%[13]。本文用乙醇超聲提取蓮心粉末，分光光度法，得到蓮心生物堿含量最高的是廣昌蓮心7.18 mg/g，最低的是湖南蓮心1.33 mg/g。湖南蓮心的蓮心堿含量較低，而湖北蓮心蓮心堿含量較高。處于長(zhǎng)三角地區(qū)的3種子蓮品種，江蘇寶應(yīng)紅蓮、江西廣昌贛蓮以及福建建蓮的蓮心堿含量都較高。

肖貴平以建蓮蓮心為原料，用正交確定最佳條件：浸提溫度90℃、浸提時(shí)間45min、料液比3∶100（g/mL），水浸提取黃酮，得到蓮心黃酮含量為0.988 2%[14]。吳芳彤用最優(yōu)提取工藝參數(shù)：乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比3∶100（g/mL），超聲波功率500 W，提取時(shí)間25 min，超聲輔助提取建寧蓮心黃酮類，提取率為1.893%[8]。本文通過(guò)超聲輔助提取建寧蓮心黃酮，得率為1.051%，與以上結(jié)果一致。黃酮含量最高的是洪湖蓮心14.28 mg/g。

不同產(chǎn)地蓮心中的甾醇含量差異不大，且主要成分都是β-谷甾醇。廣昌、建寧、寶應(yīng)蓮心中的揮發(fā)油差異不大，主要成分含量主要成分二十一烷，棕櫚酸乙酯，亞油酸乙酯等，而湖南和湖北蓮心揮發(fā)油主要成分含量差異較大。

研究結(jié)果表明，蓮心的這些功能性成分含量差異受到地域的影響，湖南和湖北的蓮心功能性成分差異較大，江蘇寶應(yīng)蓮心和福建建寧蓮心的各功能性成分含量相近，但與江西廣昌蓮心的差異較大。各功能性成分含量均較高，蓮心堿含量最高，黃酮、甾醇、揮發(fā)油含量也都較高，因此開發(fā)利用廣昌蓮心具有較廣的前景。

本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地蓮心的生物堿、黃酮、甾醇、揮發(fā)油含量的差異，對(duì)不同產(chǎn)地蓮心功能性成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，建立了不同產(chǎn)地蓮心的部分功能性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，為研究蓮心藥理作用、作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)，對(duì)蓮心的后續(xù)有效開發(fā)和充分利用其保健和醫(yī)藥價(jià)值具有積極意義。而廣昌蓮心各功能性成分含量均較高，因此開發(fā)利用廣昌蓮心資源具有較廣的應(yīng)用前景。

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Evaluation of Functional Components of Plumula nelumbinis from Different Regions

CHAO Lu-ping，HUANG Xu-dong，JIN Jing，NI Jia-dan，WANG Nan，JIANG Yi-hong*
（College of Biosystems Engineering and Food Science，Zhejiang University，F(xiàn)uli Institute of Food Science，Zhejiang Key Laboratory for Agri-Food Processing，Zhejiang R&D Center for Food Technology and Equipment，Hangzhou 310058，Zhejiang，China）

This research studied the contents of alkaloids，flavonoids，sterol as well as volatile oil from the Plumula nelumbinis of the five origins of Jian Ning，Guang Chang，Bao Ying，Hu Nan，Hong Hu.With ethanol as extraction solvent，we extracted physiologically active substances from Plumula nelumbinis powders by ultrasonic extraction way，and measured with spectrophotometry.The highest content of alkaloids in Plumula nelumbinis was Guang Chang Lotus 7.18 mg/g.The highest content of flavonoids in Plumula nelumbinis was Hong Hu Lotus 14.28 mg/g.Extract by organic solvents，saponification，solid phase extraction，derivation，and nitrogen blow，and then detect the content of sterol in the Plumula nelumbinis by Gas Chromatography-Mass Spectrometer.The highest content of sterol in Plumula nelumbinis was Bao Ying Lotus 0.40 mg/g，and the main kind of sterol was β-sitosterol.Extract the volatile oil by steam distillation，and detect it by Gas Chromatography-Mass Spectrometer.The highest content of volatile oil in Plumula nelumbinis was Hu Nan Lotus 0.60%.The content of linoleic acid and linoleic acid esters，palmitic acid and palmitic acid ester played a major part，and the content of phytol，phenols，and squalene accounted for a minor place.This article established the database and conducts functional evaluation of Plumula nelumbinis of different areas for further study of Plumula nelumbinis resource，by detecting the contents of alkaloids，flavonoids，sterols and volatile oil of Plumula nelumbinis in five origins.Guang Chang Plumula nelumbinis had a relative high functional ingredients，it is promising to develop and use Guang Chang Plumula nelumbinis resource.

Plumula nelumbinis；alkaloids；flavonoids；sterol；volatile oil；gas chromatography mass spectrometry

2016-10-16

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.14.006

晁魯平（1991—），女（漢），碩士，研究方向：天然產(chǎn)物的研究開發(fā)。

*通信作者：蔣益虹，副教授。