(貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

某豬場PRRSV與PCV2雙重感染的診斷

徐 國，曾智勇*，代振江，葉百川，張愛瓊，咸 文，何小莉

(貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

2017年2月，貴州某豬場發(fā)生以仔豬皮炎和持續(xù)性腹瀉為特征的臨床病例。為查明病因，送檢發(fā)病保育仔豬2頭于實驗室進(jìn)行病原診斷。根據(jù)流行病學(xué)情況、臨床癥狀、病理解剖與PCR/RT-PCR檢測，確診該豬場送檢保育豬存在豬藍(lán)耳病病毒與豬圓環(huán)病毒2型的雙重感染。

PRRSV；PCV2；雙重感染

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒( PRRSV)引起的以豬發(fā)生呼吸道疾病和母豬發(fā)生繁殖障礙為特征的急性傳染病[1], 我國自1996年，郭寶清等[2]確定了本病在我國存在以來，全國多地相繼發(fā)生[3-5]。豬圓環(huán)病毒病感染是由豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染所引起的一系列豬傳染病的總稱，臨床特征多種多樣，主要特征為體質(zhì)下降、生長發(fā)育不良、腹瀉、呼吸困難，特別是腎臟、脾臟及全身淋巴結(jié)腫大、出血和壞死[6]。近年來，由PRRSV、PCV2感染后造成豬只免疫抑制，從而繼發(fā)其他病原感染呈上升趨勢，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。本文就貴州某豬場PRRSV與PCV2雙重感染的診斷作如下報道。

1 發(fā)病情況

該豬場存欄保育仔豬1 000余頭，保育豬腹瀉發(fā)病率約10%左右，部分發(fā)病仔豬有皮炎、丘疹，呼吸困難，大腿內(nèi)側(cè)、陰囊部及耳根有發(fā)紺現(xiàn)象，隨病情的加重病死率亦隨之升高，達(dá)10%左右。

2 病理解剖

送檢病仔豬解剖可見腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)與頜下淋巴結(jié)腫大、出血（圖1），脾臟大面積梗死、表面有淡黃色纖維素性滲出物覆蓋（圖2），腎臟可見白斑（圖3）；胸腔臟器黏連，肺臟間質(zhì)增寬且有彌散性出血,心包積有大量渾濁的淡黃色液體，心臟表面有大量纖維素性滲出物覆蓋，呈典型的“絨毛心”特征（圖4）。

3 病毒的PCR/RT-PCR檢測結(jié)果

根據(jù)臨床癥狀、病理解剖可初步診斷存在典型的副豬嗜血桿菌的感染，并疑似有豬瘟病毒（CSFV）、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）或豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）等病毒的混合感染。為確診感染的病毒性病原，應(yīng)用實驗室設(shè)計合成的針對CSFV、PRRSV和PCV2的特異性引物（見表1），對疑似病原進(jìn)行檢測。應(yīng)用TaKaRa MinBEST Viral DNA/ RNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒提取核酸，分別用表1中特異性引物與PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2試劑盒進(jìn)行PCR/RT-PCR擴增，反應(yīng)體系為：RNase Free dH2O 7.5 μL，2×1 Step Buffer 12.5 μL，上下游引物各0.5 μL，核酸模板3.0 μL，PrimeSc ript 1 Step Enzyme Mix 1.0 μL。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性60 s，57 ℃退火40 s，72 ℃延伸100 s，35個循環(huán)；72 ℃終延伸10 min。RTPCR反應(yīng)條件為：50 ℃逆轉(zhuǎn)錄40 min；95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)；72 ℃終延伸10 min；反應(yīng)結(jié)束后分別取5 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。檢測表明，PCV2陽性、PRRSV陽性，CSFV陰性，見圖5。

圖1 頜下淋巴結(jié)出血腫大

圖2 脾臟表面覆蓋有纖維素性滲出物

圖3 腎臟見有白斑

圖4 心臟嚴(yán)重纖維束性增生

圖5 送檢豬PCR/RT-PCR檢測結(jié)果

表1 擴增目的片段的引物

4 分析討論

通過流行病學(xué)情況、臨床癥狀、剖檢病理和病毒PCR/RT-PCR檢測結(jié)果，確診該養(yǎng)殖場仔豬存在PCV2與PRRSV雙重感染。由于病理解剖觀察到，心包積有大量渾濁的淡黃色液體，心臟表面有大量纖維素性滲出物覆蓋，呈典型的“絨毛心”基本特征，以及病原檢測結(jié)果表明，PCV2與PRRSV感染后會繼發(fā)副豬嗜血桿菌等其他病原的感染，所以臨床上見有類似疾病當(dāng)多角度分析病因。

因病毒性疾病主要依靠疫苗免疫，故建議在發(fā)生該類疾病的豬場緊急接種PCV2疫苗和PRRSV疫苗；其次，對發(fā)病豬進(jìn)行隔離飼養(yǎng)以防止散毒，病死豬及污染物徹底焚燒或深埋，對污染的圈舍和四周環(huán)境用2%的燒堿進(jìn)行嚴(yán)格消毒，對新購進(jìn)豬要進(jìn)行嚴(yán)格的隔離、檢疫，隔離期間定期進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測。另外，對于豬藍(lán)耳病與多種病原混合感染可采取全場用藥，用泰妙菌素150 g/t，阿散酸90 g/t，黃芪多糖2 kg/t，阿莫西林300 g/t，磺胺-6-甲氧嘧啶鈉1 kg/t(首次用量)，300 g/t(維持用量)，具有一定療效[3]。

[1] SUR J H, DOSTER A R, CHRISTIAN J S, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus replicates in testicular germ cells, alters spermatogenesis, and induces germ cell death by apoptosis[J]. Journal of Virology, 1997, 71(12)﹕9170-9179.

[2] 郭寶清, 陳章水, 劉文興,等. 應(yīng)用間接免疫熒光法從國內(nèi)生殖障礙綜合征豬群中檢測生殖和呼吸綜合征陽性抗體的研究[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué), 1996(3)﹕3-5.

[3] 孟婷,吳敏秋,徐小琴,等.一起豬藍(lán)耳病與多種病原混合感染的診治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2011(2)﹕81-82.

[4] 馮玉龍,孫曉亮,高存帥,等.豬藍(lán)耳病與圓環(huán)病毒病混合感染的診治[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2014(2)﹕72-73.

[5] 王洪光,湯德元,羅險峰,等.貴州省某豬場PRRSV,PCV-2和PRV混合感染的快速診斷[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2013(21)﹕108-110.

[6] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：231.

2017-03-29）

貴州省省校合作計劃項目“攜帶遺傳標(biāo)記的豬圓環(huán)病毒反向遺傳操作平臺的構(gòu)建”,黔科合LH字[2014]7670號

徐國，男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:576144546@qq.com

*通訊作者：曾智勇，男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動物傳染病病原分子生物學(xué)研究