魏 鳳，張文通，李 峰，沈志強(qiáng),

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

豬瘟疫苗免疫血清ELISA抗體測(cè)定及分析

魏 鳳1，張文通2，李 峰1，沈志強(qiáng)1,2

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

為掌握魯北區(qū)域豬瘟免疫情況，采用ELISA抗體檢測(cè)技術(shù)，對(duì)本單位于2016年收集1 902份豬血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示：魯北區(qū)域中大型規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟ELISA抗體陽性率高于小型養(yǎng)豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶。分析結(jié)果將為本區(qū)域防控豬瘟提供理論支撐。

豬瘟；ELISA抗體；檢測(cè)結(jié)果

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的，以淋巴結(jié)周邊出血、脾臟邊緣出血性梗死、回盲部淋巴紐扣狀腫和腎臟密集點(diǎn)狀出血等為特征性病理變化的豬的重大傳染病[1,2]。CSF被國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類動(dòng)物傳染病，我國將其列為一類動(dòng)物傳染病。目前，盡管豬瘟疫苗已普及使用，但在筆者所在單位門診接診的病例中仍檢測(cè)到較高比例的豬瘟病毒[3,4]。因此豬瘟現(xiàn)仍是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的最重要傳染病。合格的豬瘟疫苗，已被公認(rèn)能夠較好地預(yù)防豬瘟病毒。豬瘟病例仍大量發(fā)生，豬瘟疫苗免疫情況存疑。為弄清楚魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫效果情況，對(duì)2016年本單位收集的1 902份豬血清進(jìn)行檢測(cè)及分析，其目的是獲得該區(qū)域豬瘟疫苗免疫效果情況，為防控本區(qū)域CSF提供科學(xué)參考。

1 材料和方法

1.1 材料

豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購自武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分離

血液采集方法：所有采集血液的豬場(chǎng)或散養(yǎng)戶均免疫過豬瘟疫苗（免疫豬瘟脾淋苗或免疫豬瘟細(xì)胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的豬均為保育階段仔豬。

為便于統(tǒng)計(jì)與分析將血液來源豬場(chǎng)按規(guī)模分為四種類型：散養(yǎng)戶、小型養(yǎng)豬場(chǎng)、中型養(yǎng)豬場(chǎng)及大型養(yǎng)豬場(chǎng)。其中散養(yǎng)戶為年出欄商品豬100頭以下；小型養(yǎng)豬場(chǎng)為年出欄商品豬1 000頭以下；中型養(yǎng)豬場(chǎng)為年出欄商品豬5 000頭以下；大型養(yǎng)豬場(chǎng)為年出欄商品豬5 000頭以上。散養(yǎng)戶每戶采集5份血樣，小型養(yǎng)豬場(chǎng)每個(gè)豬場(chǎng)采集15份血樣，中型養(yǎng)豬場(chǎng)和大型養(yǎng)豬場(chǎng)每個(gè)豬場(chǎng)均采集30份血樣。

血清分離：采用頸部靜脈采集，血液37 ℃放置1 h，4 ℃靜置過夜；4 000 r/min離心10 min。

1.2.3 血清ELISA抗體測(cè)定

按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書對(duì)收集的1 902份血清進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟脾淋苗免疫ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

本組所采血樣的豬場(chǎng)均來自接種豬瘟脾淋苗豬場(chǎng)。按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：ELISA（S/ P值）大于0.17為免疫合格（血清ELISA抗體S/P值大于或等于0.17，相當(dāng)于豬瘟正向間接血凝抗體大于或等于25）。表1結(jié)果顯示大型和中型養(yǎng)豬場(chǎng)CSF病毒ELISA抗體免疫檢測(cè)合格的豬場(chǎng)數(shù)較高，分別達(dá)91.7%和70.0%；而小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場(chǎng)數(shù)較低，分別為50.0%和33.3%。大型養(yǎng)豬場(chǎng)血清總免疫合格率為85.0%；而中型豬場(chǎng)，小型養(yǎng)豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為56.3%、42.0%、45.6%。

2.2 豬瘟細(xì)胞毒苗免疫ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

本組所采血樣的豬場(chǎng)均來自接種豬瘟細(xì)胞毒苗豬場(chǎng)。試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)如2.1中所述。表2結(jié)果顯示大型和中型養(yǎng)豬場(chǎng)CSF病毒ELISA抗體免疫合格的豬場(chǎng)數(shù)較高，分別達(dá)91.7%和83.3%；而小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場(chǎng)數(shù)較低，分別為57.1%和50.0%。大型養(yǎng)豬場(chǎng)和中型養(yǎng)豬場(chǎng)血清總免疫合格率分別為93.9%和87.2%；而小型養(yǎng)豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為53.8%、54.2%。

表1 豬瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

表2 豬瘟細(xì)胞毒苗免疫血清ELISA抗體測(cè)定結(jié)果

3 分析與討論

本單位門診2016年接診來自魯北區(qū)域豬病病例403例，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到豬瘟野毒病例108例，比率為26.8%。這說明本區(qū)域豬瘟仍在不同程度的流行。為弄清楚豬瘟野毒發(fā)生率如此高的原因，對(duì)本區(qū)域免疫豬瘟疫苗的不同規(guī)模豬場(chǎng)免疫效果情況進(jìn)行調(diào)查。

現(xiàn)在市售豬瘟疫苗主要有豬瘟脾淋苗和豬瘟細(xì)胞毒疫苗，因此在檢測(cè)時(shí)特別區(qū)分了2種疫苗。并且還對(duì)不同規(guī)模豬場(chǎng)免疫豬瘟疫苗情況檢測(cè)時(shí)進(jìn)行了細(xì)分。從檢測(cè)結(jié)果看，不論是用脾淋苗還是細(xì)胞毒苗大型和中型豬場(chǎng)免疫效果均優(yōu)于小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶。從實(shí)際檢測(cè)豬場(chǎng)數(shù)或總血樣數(shù)，豬瘟細(xì)胞毒苗稍優(yōu)于豬瘟脾淋苗。

在上述檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上對(duì)免疫不合格的豬場(chǎng)進(jìn)行了詳細(xì)調(diào)查，并收集了12種豬瘟疫苗（其中豬瘟脾淋苗6種、豬瘟細(xì)胞毒苗6種）。對(duì)這12種豬瘟疫苗進(jìn)行了效力檢驗(yàn)（測(cè)疫苗兔體感染量），發(fā)現(xiàn)4種豬瘟脾淋苗和1種豬瘟細(xì)胞毒苗不合格。這說明豬瘟免疫失敗疫苗不合格是一個(gè)重要原因，但不可能是唯一原因。

該研究的分析結(jié)果提示魯北養(yǎng)豬行業(yè)在豬瘟防疫過程中，一方面要選擇合格豬瘟疫苗，另一方面要正確使用豬瘟疫苗。

[1] 單虎，李明義，沈志強(qiáng)．現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M]．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2011：304-307．

[2] 蔡寶祥．家畜傳染病學(xué)． [M]．3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000：147-151．

[3] 蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬．2001-2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J] ．養(yǎng)豬，2009(3)﹕73-74．

[4] 楊慧君．淺談豬瘟流行新特點(diǎn)與防治措施[J]．農(nóng)業(yè)科技與信息，2009(5)﹕50．

2017-01-15）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目 SDAIT-08-17

魏鳳，女（1979-），河南遂平人，碩士，助理研究員，主要從事獸用生物制品研究，E-mail：hzndzwt1@163.com