李艷青，朱秀高

（1.濰坊科技學(xué)院生物研發(fā)中心，山東壽光 262700；2.武漢回盛生物科技股份有限公司，武漢 430042；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100000）

新生仔豬黃曲霉毒素與玉米赤霉烯酮中毒的處理

李艷青1，朱秀高2,3

（1.濰坊科技學(xué)院生物研發(fā)中心，山東壽光 262700；2.武漢回盛生物科技股份有限公司，武漢 430042；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100000）

霉菌毒素中毒在目前養(yǎng)豬生產(chǎn)中較為常見(jiàn)，通過(guò)臨床調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室分析，確認(rèn)華南地區(qū)某豬場(chǎng)出現(xiàn)的新生仔豬頭骨發(fā)育不全和陰戶紅腫是由黃曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮中毒引起，并針對(duì)此問(wèn)題提出換料、解毒等處理措施，這是近20年來(lái)我國(guó)首次報(bào)道在同一豬場(chǎng)同時(shí)出現(xiàn)黃曲霉毒素與玉米赤霉烯酮導(dǎo)致新生仔豬中毒且引起發(fā)育畸形的情況。

黃曲霉毒素；玉米赤霉烯酮；頭骨發(fā)育不全；陰戶紅腫；新生仔豬

飼料及其原料污染的霉菌在生長(zhǎng)過(guò)程中分泌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物——霉菌毒素被畜禽攝入后根據(jù)劑量的差異能夠造成程度不等的臨床癥狀，急性中毒多導(dǎo)致畜禽的直接死亡，慢性中毒的癥狀因毒素類(lèi)型不同而有不同表現(xiàn)。黃曲霉毒素（AFT）中毒多表現(xiàn)肝臟腫大、赭曲霉毒素（OTA）中毒經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)石灰尿、伏馬毒素（FB）毒會(huì)導(dǎo)致肺水腫、嘔吐毒素（DON）中毒表現(xiàn)為嘔吐、玉米赤霉烯酮（ZEA）中毒主要病變表現(xiàn)在生殖系統(tǒng)，此外還有一些普遍性癥狀，如免疫抑制、繁殖性能下降和增重緩慢等。每一種霉菌毒素均是由相應(yīng)的霉菌產(chǎn)生，臨床上飼料污染的霉菌經(jīng)常是多種混合出現(xiàn)，因此多種霉菌毒素的共同作用是臨床上處理霉菌毒素中毒時(shí)需要重點(diǎn)注意的問(wèn)題。2016年4月上旬，華南地區(qū)某存欄800多頭母豬的豬場(chǎng)負(fù)責(zé)人反應(yīng)場(chǎng)內(nèi)產(chǎn)房中近兩個(gè)月內(nèi)分娩仔豬存在問(wèn)題，經(jīng)過(guò)臨床調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確認(rèn)是由黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮共同中毒引起，現(xiàn)將情況報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

仔豬頭骨發(fā)育不全見(jiàn)圖1，產(chǎn)房仔豬陰戶紅腫見(jiàn)圖2。

該豬場(chǎng)屬于某養(yǎng)殖集團(tuán)的分場(chǎng)，存欄母豬800多頭，產(chǎn)房負(fù)責(zé)人反應(yīng)近期共分娩40多窩，共有6頭仔豬出現(xiàn)頭骨發(fā)育不全，每窩平均3頭母豬為陰戶紅腫?，F(xiàn)場(chǎng)觀察發(fā)現(xiàn)，頭骨發(fā)育不全的患豬主要表現(xiàn)為額骨縫沒(méi)有閉合、腦組織凸出于顱腔之外、突出的腦膜呈充血狀態(tài)（圖1）；小母豬表現(xiàn)為陰戶發(fā)紅腫脹（圖2），除頭骨發(fā)育不全的仔豬外，其他仔豬均能正常吃奶、精神狀態(tài)無(wú)異常。

圖1 仔豬頭骨發(fā)育不全

圖2 產(chǎn)房仔豬陰戶紅腫

在飼料房?jī)?nèi)發(fā)現(xiàn)料倉(cāng)內(nèi)的玉米霉變明顯，表現(xiàn)為破粒、碎粒多、雜質(zhì)多、玉米粒胚芽部分有明顯的發(fā)黑等情況，霉變率約占到15%。

2 診斷

采集該豬場(chǎng)的玉米、麩皮及妊娠母豬飼料各3份送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗(yàn)材料

飼料：玉米（1～3號(hào)）、麩皮（4～6號(hào)）和妊娠母豬料（7～9號(hào)）。

檢測(cè)試劑：AFB1ELISA檢測(cè)試劑盒、ZEA ELISA檢測(cè)試劑盒和OTA ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京柏發(fā)生物公司。

儀器：DYF-400A搖擺式高速粉碎機(jī)、SCQ-5201B超聲波提取儀、Thermo Multiskan FC型酶標(biāo)儀。

2.1.2 試驗(yàn)方法

AFB1檢測(cè)：分別取9種樣品各500 g粉碎后過(guò)20目篩，稱取每種各5 g樣品分別放于9個(gè)100 mL具塞三角瓶，向其中加入25 mL甲醇水溶液（1 ? 1），振蕩15 min、過(guò)濾，棄去1/4初濾液后收集濾液作為樣品提取液，用樣品稀釋液將樣品提取液稀釋后制成待測(cè)液，取待測(cè)液50 μL加入微孔中進(jìn)行ELISA測(cè)定，在450 nm處測(cè)定各孔的吸光度，按說(shuō)明書(shū)中的方法計(jì)算各樣品中AFB1的含量。

ZEA檢測(cè)：從上述粉碎樣品中秤取每種各5 g樣品分別放于9個(gè)150 mL具塞三角瓶，向其中加入25 mL甲醇水溶液（6 ? 4），用超聲波提取10 min，靜置5 min，用定量濾紙快速過(guò)濾、收集濾液。取5 mL濾液用樣品稀釋液做10倍稀釋制成待測(cè)液，取待測(cè)液50 μL加入微孔中進(jìn)行ELISA測(cè)定，在450 nm處測(cè)定各孔的吸光度，按說(shuō)明書(shū)中的方法計(jì)算各樣品中ZEA的含量。

OTA檢測(cè)：從上述粉碎樣品中秤取每種各5 g樣品分別放于9個(gè)150 mL具塞三角瓶中，向其中加入25 mL甲醇水溶液（7 ?3），用超聲波提取10 min，靜置5 min，用定量濾紙快速過(guò)濾、收集濾液。取5 mL濾液用樣品稀釋液做7倍稀釋制成待測(cè)液，取待測(cè)液50 μL加入微孔中進(jìn)行ELISA測(cè)定，在450 nm處測(cè)定各孔的吸光度，按說(shuō)明書(shū)中的方法計(jì)算各樣品中OTA的含量。

2.2 試驗(yàn)結(jié)果

送檢飼料的霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1可以看出，AFB1的檢測(cè)中玉米的結(jié)果低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，而麩皮和母豬飼料的結(jié)果高于國(guó)標(biāo)，且母豬飼料中的結(jié)果超過(guò)國(guó)標(biāo)最高達(dá)100倍；ZEA的檢測(cè)中玉米和母豬飼料的結(jié)果高于國(guó)標(biāo)，最高分別為2倍和5倍，麩皮的結(jié)果低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)；OTA檢測(cè)中3種樣品的結(jié)果均低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)上述結(jié)果，能夠確定該豬場(chǎng)飼料中霉菌毒素嚴(yán)重超標(biāo)，玉米的ZEA、麩皮的AFB1超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的限量要求，使用此兩種原料配制的妊娠母豬全價(jià)料中AFB1和ZEA含量均顯著超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，最高分別為100倍和5倍。

表1 送檢飼料的霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果μg·kg-1

3 處理與分析

根據(jù)臨床調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，確認(rèn)本次發(fā)病是由母豬飼料中AFB1和ZEA中毒引起。建議豬場(chǎng)采取以下措施進(jìn)行處理：立即停用被污染飼料及原料，更換為檢測(cè)合格的飼料；飲水中加入葡萄糖，連續(xù)飲水15 d；飼料中加入含酵母細(xì)胞壁和改性蒙脫石的脫霉劑以及含多種維生素和必需氨基酸添加劑。

霉菌毒素被豬攝入后因毒素類(lèi)型不同而產(chǎn)生不同的癥狀。本病例中初生仔豬的陰戶紅腫是由ZEA中毒引起，該毒素具有類(lèi)雌激素的作用，被豬攝入后會(huì)引起以生殖系統(tǒng)為主的一系列病變，母豬表現(xiàn)為外觀可見(jiàn)的陰戶紅腫、乳房腫脹等類(lèi)似母豬發(fā)情時(shí)的癥狀，公豬會(huì)由于睪丸間質(zhì)細(xì)胞的機(jī)能和結(jié)構(gòu)受到損傷而主要表現(xiàn)為睪丸萎縮、精子質(zhì)量下降和性欲降低等[1-5]。懷孕母豬飼料中ZEA含量超標(biāo)后嚴(yán)重的可引起流產(chǎn)、死胎，常見(jiàn)的多為初生仔豬陰戶紅腫。如果哺乳母豬日糧中存在ZEA的過(guò)量則會(huì)通過(guò)乳汁繼續(xù)傳給仔豬引起癥狀的加劇。AFB1具有明顯的“三致”（致癌、致畸、致突變）作用，主要靶器官是肝臟，引起肝細(xì)胞變性、壞死，膽管增生和肝功能障礙，臨床表現(xiàn)為生長(zhǎng)速度下降，嚴(yán)重的可導(dǎo)致肝癌。史瑩華等用0.1 mg·kg-1的添加量給仔豬飼喂AFB1約90 d后發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)豬的日增重與對(duì)照豬相比降低了12.9%、料重比提高了7.54%，實(shí)驗(yàn)豬組織學(xué)病變主要為肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的顆粒變性和脂肪變性，肝竇內(nèi)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，小葉中央靜脈周?chē)渭?xì)胞凝固性出血和壞死，肝臟顯著結(jié)節(jié)性增生，肝壞死[6]。此外，肝臟中大量與肝功能相關(guān)的胞內(nèi)酶外流到血液中，如堿性磷酸酶（ALP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶（GST），使肝臟的代謝功能下降，其中GST與肝臟解毒功能密切相關(guān)，肝臟中GST水平的下降，大大降低了肝臟的解毒能力，進(jìn)一步加重了AFB1對(duì)肝細(xì)胞的損害[7]。目前有關(guān)AFB1致畸的報(bào)道不多，本案例中所見(jiàn)到的頭骨發(fā)育不全，這種畸形從營(yíng)養(yǎng)角度分析與VA缺乏有關(guān)，根據(jù)營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配合飼料額外添加滿足需要量的VA，不會(huì)出現(xiàn)外源性VA供應(yīng)不足，有資料報(bào)道黃曲霉毒素中毒可導(dǎo)致內(nèi)源性VA的缺乏，可以判斷畸形是由AFB1中毒和VA的內(nèi)源性缺乏共同作用引起，其中AFB1中毒是主要因素。

4 結(jié)論

處理霉菌毒素引起的中毒時(shí)應(yīng)該遵循解毒和脫離中毒環(huán)境即換用沒(méi)有毒素污染的飼料兩條主要原則。生產(chǎn)中的應(yīng)用和研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)脫霉劑對(duì)控制飼料中的霉菌毒素具有良好的有效的作用，因此養(yǎng)豬生產(chǎn)中要向飼料內(nèi)加入脫霉劑以減輕霉菌毒素對(duì)豬只的損害，同時(shí)對(duì)于中毒豬要及時(shí)通過(guò)增強(qiáng)肝臟的代謝功能來(lái)減輕毒素對(duì)機(jī)體的損害。

[1]楊在賓,姜淑貞,楊維仁.玉米赤霉烯酮對(duì)斷奶仔豬毒性機(jī)理研究進(jìn)展[C].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展,2012,28（2）:89-91.

[2]王青,周丹朝,趙煜,等.玉米赤霉烯酮的生殖毒性研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2014,33（4）:32-35.

[3]鄭王龍,劉青,王亞軍,等.玉米赤霉烯酮對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體的損傷作用[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,34（7）:1 157-1 161.

[4]鄭王龍,劉青,王亞軍,等.玉米赤霉烯酮對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)StAR蛋白及類(lèi)固醇合成關(guān)鍵酶表達(dá)的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,45（7）:1 091-1 096.

[5]王宜安,黃沁怡,徐輝,等.玉米赤霉烯酮對(duì)TM3細(xì)胞原癌基因及細(xì)胞間隙連接通訊的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2015,35（3）:467-471.

[6]史瑩華,姚惠霞,張偉毅,等.黃曲霉毒素對(duì)豬生長(zhǎng)性能及內(nèi)臟器官的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2011,31（2）:249-252.

[7]史瑩華,方麗云,孫宇,等.黃曲霉毒素對(duì)豬生長(zhǎng)性能及肝臟功能的影響[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2007,35（6）: 55-59.

Treatment of Aflatoxin and Zearalenone Poisoned Newborn Piglets

LI Yanqing1,ZHU Xiugao2,3

（1.Weifang Institute of Technology,Bioresearch Center,Shouguang 262700,Shandong China; 2.Wuhan Hui Sheng Biotechnology Co.,Ltd.,Wuhan 430042,China; 3.College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 430042,China）

The mycotoxin poisoning was common in pig feeding production.The newborn piglets skull hypopla?sia and vulva swelling were caused by aflatoxin B1and zearalenone poisoning in southern China through the clinical in?vestigation and analysis of laboratory.And put forward refueling and detoxification treatment measures to solve this problem.Aflatoxin and zearalenone in newborn piglets poisoning leaded to deformity in the same farm,which was re?ported for the first time in recent 20years.

aflatoxin;zearalenone;skull hypoplasia;vulva swelling;newborn piglets

S 828；R379

A

1001-0084（2017）05-0029-03

2017-03-22

李艷青（1983-），女，山東泰安人，博士，副教授，研究方向?yàn)楂F醫(yī)病理。