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大鼠脊髓右半橫斷損傷模型的制備及其評價(jià)

2017-07-31 09:48決利利
特別健康·下半月 2017年6期
關(guān)鍵詞:脊髓損傷模型

決利利

【摘要】目的:通過制備大鼠脊髓損傷模型,觀察其脊髓損傷后行為,為今后進(jìn)一步對脊髓損傷的研究提供較為可靠的實(shí)驗(yàn)用模型。方法:構(gòu)建大鼠脊髓損傷模型,隨機(jī)分為假手術(shù)組和脊髓右半橫斷損傷組。分別在損傷前、損傷后定期進(jìn)行BBB功能評分,連續(xù)觀察大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。結(jié)果:假手術(shù)組在不同的時(shí)間BBB評分均很高,而脊髓損傷組評分較低。結(jié)論:通過本研究所制備的大鼠脊髓右半橫斷損傷模型,操作簡便、穩(wěn)定可靠、易于復(fù)制,對脊髓損傷的研究具有一定的使用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】脊髓損傷;模型;BBB評分

【中圖分類號】R681 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851(2017)06-0-01

前言

脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重創(chuàng)傷,通過制備脊髓損傷模型來研究治療脊髓損傷疾病是臨床上常用的必要手段,而進(jìn)行脊髓損傷基礎(chǔ)研究的前提就是建立一個(gè)適宜的脊髓損傷模型[1]。本研究結(jié)合現(xiàn)在臨床治療脊髓損傷的需求,建立了脊髓右半橫斷損傷模型。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠共39只,雌雄不限,體重250~300g,由貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。

1.2 方法 將39只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、脊髓右半橫斷損傷1d、1w、2w、3w、4w共6組,每組6只,中間淘汰3只。實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間分別在脊髓損傷1d、1w、2w、3w、4w。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物購入后常規(guī)飼養(yǎng)1周,觀察其健康狀況及四肢活動(dòng)情況,無異常后,各脊髓損傷組大鼠腹腔注射5%水合氯醛(6ml/kg)麻醉,俯臥位固定于自制的木板上,常規(guī)消毒后剪去背部脊椎區(qū)毛。75%酒精消毒后,沿T9~T10背部正中線棘突作2~3cm長的切口,切開皮下脂肪和深筋膜直達(dá)棘突及棘上韌帶,將椎旁肌從棘突和椎板表面剝離牽開,咬除棘突和椎板。脊髓背部正中剪開長3.5mm長縱向切口,沿正中作3mm長縱向切口貫穿脊髓,橫向剪斷去除右側(cè)脊髓。大鼠迅速出現(xiàn)擺尾反射,右側(cè)后肢及軀體回縮撲動(dòng)后右后肢癱瘓,提示造模成功。仔細(xì)止血,生理鹽水、甲硝唑依次沖洗創(chuàng)腔,逐層縫合硬膜、椎旁肌、筋膜及皮膚,再次常規(guī)消毒皮膚,無菌紗布覆蓋。假手術(shù)組只咬除棘突和椎板不損傷脊髓,其他步驟同脊髓損傷組操作[2]。

1.3 形態(tài)學(xué)觀察 將各實(shí)驗(yàn)組SD大鼠在各時(shí)間點(diǎn)用5%水合氯醛經(jīng)腹腔麻醉后,切取以損傷處為中心長約1.5cm的脊髓組織,4%多聚甲醛固定24h,冰凍切片,經(jīng)Nissl染色后觀察脊髓損傷的病理變化。

1.4 行為學(xué)觀察 本實(shí)驗(yàn)采用BBB(Basso,Beattie,andBresnahanLocomotorRatingScale)[3]運(yùn)動(dòng)功能評分法分別對假手術(shù)組和脊髓損傷各組進(jìn)行脊髓神經(jīng)功能恢復(fù)情況的評價(jià)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,各組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(ANOVA),以P<0.05表示有顯著性差異,以P<0.01表示有非常顯著性差異。

2.結(jié)果

2.1 術(shù)后一般情況

術(shù)后所有大鼠手術(shù)切口處皮膚愈合良好,無感染,縫線大多在2~3周內(nèi)自行脫落,大鼠右側(cè)后肢肌肉有不同程度萎縮,左側(cè)后肢術(shù)后行動(dòng)不便者也大約在1周內(nèi)恢復(fù)。脊髓損傷組個(gè)別大鼠發(fā)生右側(cè)足趾被自行咬傷,甚至造成足趾脫落,與右側(cè)脊髓半橫斷損傷后右側(cè)后肢癱瘓及感覺異常有關(guān)。極少數(shù)大鼠還會出現(xiàn)腹腔積液的表現(xiàn),推測可能是由于尿潴留或者手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致的急性腎衰所致。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中大鼠死亡多因麻醉意外,而感染、自傷、失血過多等原因則少見。故在手術(shù)過程中,應(yīng)嚴(yán)格控制麻醉劑量,根據(jù)大鼠術(shù)前興奮的程度酌情增減麻藥的劑量,另外在手術(shù)過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌操作原則,避免粗暴的動(dòng)作和過多損傷動(dòng)物的組織結(jié)構(gòu),術(shù)后給予精心的護(hù)理,分籠飼養(yǎng),常換籠中墊料等。

2.2 術(shù)后后肢功能觀察

術(shù)后假手術(shù)組雙后肢功能正常,脊髓損傷組大鼠雙后肢均出現(xiàn)癱瘓,1周內(nèi)損傷處皮下瘀血消除,左側(cè)后肢功能一般能恢復(fù)正常;術(shù)后1周內(nèi)活動(dòng)較少,1周以后可用雙前肢拖曳身體及后肢行走,以后右側(cè)后肢自主活動(dòng)隨著損傷時(shí)間的延長有不同程度的恢復(fù)。

2.3 脊髓損傷后形態(tài)學(xué)變化

經(jīng)Nissl染色后觀察,假手術(shù)組染色結(jié)果無差異,可見尼氏體分布均勻、豐富、顆粒狀且染色較深。脊髓損傷后1d組可見損傷處尼氏體較少,甚至溶解消失;脊髓損傷后1w至4w時(shí)損傷處尼氏小體胞質(zhì)內(nèi)開始出現(xiàn)小空泡或顆粒樣變性;在脊髓損傷2w至4w,損傷處開始有囊腔形成,隨著脊髓損傷時(shí)間的延長在囊腔的邊緣尼氏小體數(shù)量增多且集中,而囊腔內(nèi)的尼氏小體數(shù)量極少。

2.4 運(yùn)動(dòng)功能評價(jià)

脊髓損傷后各實(shí)驗(yàn)組的BBB評分結(jié)果見附表。每組隨機(jī)分為6只進(jìn)行BBB評分。BBB評分結(jié)果顯示(見附表),假手術(shù)組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能于1d后基本正常恢復(fù)21分;脊髓損傷1d時(shí)各實(shí)驗(yàn)組大鼠的后肢BBB評分均為0分,傷后1w功能有恢復(fù),隨后的觀察時(shí)間點(diǎn)評分逐漸增高,4w時(shí)評分達(dá)到最高值。從附表可見到傷后4w的BBB評分恢復(fù)明顯高于傷后1d至1w(P<0.05)。

3.討論

根據(jù)脊髓局部解剖的連續(xù)性和完整性特征,我們可將常見的實(shí)驗(yàn)性脊髓損傷模型分為非橫斷性和橫斷性SCI模型兩種。非橫斷性SCI模型沒有明顯的脊髓解剖連續(xù)性和完整性的中斷,常用于急、慢性脊髓損傷機(jī)制及藥物干預(yù)的研究[4-5]。Allen打擊脊髓損傷模型被認(rèn)為是一種簡便易行、控制性好,可定量且與臨床脊髓損傷機(jī)制相似的經(jīng)典方法,從而廣泛應(yīng)用于脊髓損傷的各項(xiàng)研究當(dāng)中[6],然而它也有一定的局限性[7]。脊髓缺血性損傷模型、鉗夾模型、脊髓壓迫動(dòng)物模型,因其操作難度或應(yīng)用范圍較小而未獲得廣泛的應(yīng)用。橫斷性脊髓損傷模型有明顯的脊髓解剖連續(xù)性和完整性的中斷,見于嚴(yán)重的鈍性打擊傷、切割傷及火器傷。目前對脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)所進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,主要是采用銳利的刀片選擇性的對脊髓進(jìn)行全橫切和半橫切,從而觀察損傷區(qū)域軸突再生、突觸重建及有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞移植、神經(jīng)營養(yǎng)因子等對這一過程的影響及作用。

脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能評分是評估脊髓損傷程度、觀察脊髓損傷后損傷脊髓自我修復(fù)與再生能力的重要措施。BBB評分是目前應(yīng)用最廣泛的脊髓損傷評價(jià)方法,可作為評價(jià)大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)評分方案之一,其評價(jià)內(nèi)容包括身體協(xié)調(diào)性和后肢運(yùn)動(dòng)幅度等多個(gè)方面。但此方法易因?yàn)橹饔^因素使其結(jié)果失真,所以本研究利用雙盲、雙人獨(dú)立評分并取其平均值的方法,盡可能提高運(yùn)動(dòng)功能評價(jià)的準(zhǔn)確性。

目前,國內(nèi)外學(xué)者針對治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究很多,涉及到的研究面很廣,主要有干細(xì)胞移植[8]、局部植入神經(jīng)支架[2]及藥物治療[9]等,但至今未找到行之有效的治療方法。因此建立一種可靠、簡單、實(shí)用的脊髓損傷模型是研究脊髓損傷的先決條件。本實(shí)驗(yàn)通過制備與臨床上脊髓損傷患者相似的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,在一定程度上模擬人類脊髓損傷后的病理改變和臨床表現(xiàn)。為研究脊髓受損后神經(jīng)修復(fù)及運(yùn)動(dòng)功能改善提供實(shí)驗(yàn)用模型。

綜上所述,在制備脊髓損傷模型時(shí),研究者應(yīng)根據(jù)其實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮途唧w實(shí)驗(yàn)條件做出科學(xué)的選擇。通過本實(shí)驗(yàn)方法建立大鼠脊髓右半橫斷損傷模型,制作過程簡單且易于復(fù)制,可用于臨床治療脊髓損傷的相關(guān)研究。今后,如何能制造出更加接近臨床狀態(tài)、更加可靠、標(biāo)準(zhǔn)化的脊髓損傷模型,仍是我們今后努力研究的方向。

參考文獻(xiàn)

[1]郝琴,韓繼明等.脊髓損傷動(dòng)物模型的制備[J].山東醫(yī)藥,2014,54(39):100-102.

[2]孫慶治等,局部植入神經(jīng)干細(xì)胞/膠原支架復(fù)合體對大鼠脊髓損傷的修復(fù)作用觀察[J].山東醫(yī)藥,2016,56(43):44-46.

[3]Basso DM,Beattie MS,Bresnahan JC.A sensitive and reliable locomotor rating scale for open filed testing in rats.J Neurotrauma,1995,12(1)1-21.

[4]宗少暉,韋波,曾高峰,等.白介素-1受體拮抗劑對大鼠急性脊髓損傷后BDNF表達(dá)的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(2):205-206.

[5]周開鋒,蔣贊利,茅祖斌,等.17β-雌二醇對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)保護(hù)作用的研究[J].中國脊柱脊髓雜志,2007,17(8):623-627.

[6]Khan T,Havey RM,Sayers ST,et al.Animal models of spinal cord contusion injuries[J].Lab Anim Sci.1999,49(2):161-172.

[7]Dimar JR,Glassman SD,Raque GH,et al.The influence of spinal canal narrowing and timing of decompression on neurologic recovery after spinal cord contusion in a rat model[J].Spine 1999,24(16):1623-1633.

[8]馬珊珊,渠瑞娜等.臍帶沃頓膠干細(xì)胞移植對脊髓損傷大鼠炎癥因子表達(dá)的影響[J].中國組織工程研究,2015,19(27):3729-3735.

[9]楊函,王松等.抑制鈣蛋白酶對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能保護(hù)作用研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,41(8):813-817.

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