江興華 福州大北農生物技術有限公司福州350014

新-流二聯滅活疫苗不同方法免疫后抗體水平檢測

江興華 福州大北農生物技術有限公司福州350014

為探討雞新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二聯滅活疫苗與禽流感抗體不同組合方法免疫商品蛋雞和商品肉雞后抗體水平變化規(guī)律，試驗分別采用A、B、C三種方法免疫商品蛋雞與商品肉雞各40羽，A免疫方法為只接種新-流二聯滅活苗，B免疫方法為接種新-流二聯滅活苗的同時注射禽流感抗體，C免疫方法為接種新-流二聯滅活苗7 d后注射禽流感抗體，D組為空白對照組，各組均于免前及免后2 d、6 d、10 d、14 d、21 d、28 d、35 d采血檢測新城疫與禽流感抗體水平。結果發(fā)現，商品蛋雞與商品肉雞各免疫組，免后新城疫抗體均先開始下降，免后第10 d抗體開始上升，第14 d開始快速上升，第35 d達到最高，蛋雞組最高達8log2，而肉雞組最高達7log2。商品蛋雞組中配合注射禽流感抗體免疫組，禽流感抗體先上升，然后下降，再繼續(xù)上升，禽流感抗體保持較高的水平，不低于3log2。而未注射抗體組，禽流感抗體先下降，至第10 d下降至2log2以下，然后開始快速上升。而商品肉雞各組禽流感抗體免后均開始下降，未注射抗體組，下降至第10 d后開始上升，注射抗體組免后第10 d時下降的幅度比未注射抗體組小，且下降至第15 d后才開始上升。說明商品蛋雞免疫新-流二聯滅活疫苗時配合注射禽流感抗體，短期內對機體禽流感抗體水平提升明顯，而在商品肉雞上配合注射流感抗體對機體禽流感抗體水平提升不明顯。

雞新城疫-禽流感（新-流）二聯滅活疫苗免疫方法商品蛋雞商品肉雞抗體檢測

雞新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒引起的一種烈性病毒性傳染病，是全球范圍內重要的家禽傳染病之一。禽流感（Avian Influence，AI）是由正黏病毒科、流感病毒屬A型流感病毒引起的禽類的一種傳染性疾病，雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽及野生鳥類均可感染[1]。目前在我國流行的禽流感以低致病性禽流感H9N2亞型為主型,占禽流感陽性雞群總數的93.89%[2]。雞新城疫和禽流感是世界范圍流行的禽類疫病，給禽業(yè)生產造成巨大的經濟損失，免疫接種是控制雞新城疫和禽流感的有效方法[3]。雖然免疫接種是一種有效的方法，但是由于各種原因導致的免疫失敗還是時有發(fā)生。在疫苗免疫過程中存在免疫空檔期，對H9N2都采用滅活油苗免疫預防，免疫注射油苗僅僅產生循環(huán)抗體，且產生抗體的速度較慢，產生可以起到保護作用的抗體滴度一般需要2周以上，故存在短暫的免疫空檔期可能讓病毒入侵[4]。為了提高新-流二聯滅活疫苗免疫后的禽流感抗體滴度，縮短免疫空檔期，本試驗在免疫新-流二聯滅活疫苗時配合注射禽流感抗體，檢測、觀察機體禽流感抗體水平變化規(guī)律，從而為有效免疫預防新城疫與禽流感提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗用疫苗與禽流感抗體雞新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二聯滅活疫苗（簡稱新-流二聯滅活疫苗）由本公司生產；禽流感抗體由本公司從免疫禽流感試驗疫苗樣品（H9N2 HP株）試驗雞中提取，禽流感抗體效價達8log2。

1.2 試驗用雞7日齡商品蛋雞40羽，由福州市農工商種禽公司提供；7日齡商品肉雞40羽，由福建圣農集團孵化場提供。

1.3 試驗分組及免疫

1.3.1 商品蛋雞組選擇健康有活力的7日齡商品蛋雞40羽，隨機編為A、B、C、D組，每組各10羽，并分別打上翅標編號，A組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，B組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，同時肌肉注射0.5 mL禽流感抗體，C組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，于免后第7 d肌肉注射0.5 mL禽流感抗體，D組不免疫作為陰性對照組。

1.3.2 商品肉雞組選擇健康有活力的7日齡商品肉雞40羽，隨機編為A、B、C、D組，每組各10羽，并分別打上翅標編號，A組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，B組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，同時肌肉注射0.5 mL禽流感抗體，C組于7日齡頸部皮下注射新-流二聯滅活疫苗0.25 mL，于免后第7 d肌肉注射0.5 mL禽流感抗體，D組不免疫作為陰性對照組。

1.4 抗體檢測商品蛋雞與商品肉雞免疫組及對照組試驗雞分別于免疫前與免疫后2、6、10、14、21、28、35 d進行采血，檢測新城疫與禽流感抗體（結果取10羽雞的抗體幾何平均值）。

1.5 抗體檢測方法參考中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程2000年版，應用紅細胞凝集抑制試驗的方法。用PBS液將待檢血清做2倍系列稀釋，加入含4HAU的血凝素抗原液，并設PBS液和4HAU的血凝素抗原液對照，充分振搖后置室溫下20～40 min或2～8℃下40～60 min，當紅細胞對照孔中的紅細胞呈顯著鈕扣狀時判定結果。以使紅細胞凝集完全抑制的血清最高稀釋度作為判定終點。

2 結果與分析

2.1商品蛋雞組免后抗體水平檢測結果從表1-表2可知，各免疫組免后新城疫抗體均先開始下降，下降至第10 d后抗體開始上升，免后第14 d開始快速上升，至第35 d達到最高，達8log2以上（見表1）。免疫當天配合注射抗體免疫組，禽流感抗體先上升，然后下降，再繼續(xù)上升，在注射抗體后禽流感抗體保持較高的水平，最低在3log2以上；免疫7 d后注射抗體組，禽流感抗體先下降，至第6 d下降至2.9log2，6 d后開始上升；未注射抗體組，禽流感抗體先下降，至第10 d下降至2log2以下，然后開始快速上升，不同免疫組至第35 d抗體均升至8log2以上（見表2）。

表1 商品蛋雞組免后新城疫抗體水平檢測結果

表2 商品蛋雞組免后禽流感抗體水平檢測結果

2.2 商品肉雞組免后抗體水平檢測結果各免疫組免后新城疫抗體均先開始下降，下降至免后第10 d抗體開始上升，免后第14 d開始快速上升，至第35 d達到最高，達7log2以上（見表3）。各免疫組禽流感抗體免后均開始下降，未注射抗體組，下降至第10 d后開始上升，注射抗體組免后至第10 d時下降的幅度比未注射抗體組小，且下降至第15 d后才開始上升，兩組注射抗體組注射抗體后，禽流感抗體均未出現上升情況，只是下降的幅度較小、比較緩慢，與商品蛋雞組有較大的差別（見表4）。

表3 商品肉雞組免后新城疫抗體水平檢測結果

3 討論

表4 商品肉雞組免后禽流感抗體水平檢測結果

1）盡管大多數雞場使用有效疫苗對新城疫與禽流感進行了預防免疫，但由于多種原因導致的免疫失敗而造成這兩種疾病時有發(fā)生，目前對這兩種疾病尚無有效藥物治療，采取被動免疫預防不失為一種有效的措施[5]。劉春紅等[6]試驗表明：主動免疫和被動免疫同時作用對整個雞群具有一定的免疫保護作用。本試驗在免疫新-流二聯滅活疫苗時配合注射禽流感抗體，相當于主動免疫與被動免疫相結合，本試驗蛋雞組在免疫疫苗并注射抗體后，禽流感抗體在短期內升高明顯，在7 d左右保持較高，免后抗體最低均高于3log2，與單獨免疫組相比抗體高，從本試驗禽流感抗體結果看與以上觀點均相符。

2）從本試驗結果看出免疫后商品蛋雞與商品肉雞的禽流感抗體水平變化存在較大的差異，注射禽流感抗體后，蛋雞組禽流感抗體有短暫的上升，上升明顯，而肉雞組禽流感抗體未上升，只是免疫后至15 d內禽流感抗體比未注射抗體組高些，后期禽流感抗體上升也較慢，可能與商品肉雞生長速度快，生長周期短，免疫器官發(fā)育較遲緩有關，在劉英豪等[7]的研究中也提到這一觀點。

3）試驗中配合注射流感抗體組，禽流感抗體最低值為3log2，而未注射抗體組最低為2log2，雖然提高了兩倍，但是該禽流感抗體水平未必能獲得有效的保護。有資料表明，要使雛雞對禽流感的攻毒獲得完全保護的臨界值應在4log2～6log2[8]，所以，還得想辦法使免后禽流感抗體最低值保持在4log2以上，才會有更好的免疫保護效果。

4）試驗針對新-流二聯滅活苗使用不同組合方法免疫后的抗體水平變化進行研究，要觀察各組的免疫效果的差別，不僅要看抗體水平的高低，筆者認為還應結合攻毒保護率進行綜合分析，至于攻毒保護效果還有待進一步研究。

4 結論

本試驗條件下，免疫新-流二聯滅活疫苗配合注射禽流感抗體組與單獨免疫新-流二聯滅活疫苗組對比，配合注射禽流感抗體組在免后早期、短期內禽流感抗體有一定的提升，商品蛋雞組禽流感抗體提升較明顯，而在商品肉雞組禽流感抗體提升不明顯。

[1]殷震,劉景華.動物病毒學[M].2版.北京:科學出版社,1997: 704-705.

[2]唐秀英,田國斌,趙傳珊,等.中國禽流感流行株的分離鑒定[J].中國畜禽傳染病,1998,20(1):1-5.

[3]曹繪,李寶臣,李漫,等.雞新城疫和禽流感（H9型）二聯滅活疫苗不同佐劑的免疫效果試驗[J].浙江畜牧獸醫(yī),2015 (6):1-3.

[4]孫海龍,左紹航,王林果,等.當前養(yǎng)禽業(yè)中禽流感的流行及免疫現狀[J].獸醫(yī)導刊,2012(2):30-32.

[5]張桂枝,靳雙星.抗新城疫、禽流感（H5、H9）多價二聯卵黃抗體的研制及應用[J].廣東農業(yè)科學,2009(9):157-158.

[6]劉春紅,余興龍,李波,等.禽流感高效價卵黃抗體的制備和應用[J].湖北畜牧獸醫(yī),2010(6):6-7.

[7]劉英豪,陸桂麗,沙依蘭古麗,等.新疆商品代AA肉雞接種禽流感疫苗的免疫效力觀察[J].新疆畜牧業(yè),2009(1):11-13.

[8]吳庭才,張春杰,郭向鵬.禽流感母源抗體消長規(guī)律和免疫保護抗體臨界值的測定[J].洛陽農業(yè)高等?？茖W校學報, 2002,22(3):223-224.

Comparision of antibody levels against different inoculating methods of bivalent inactivated vaccines containing newcastle disease virus and avian influenza virus

Jiang Xinghua
(Fuzhou Dabeinong Biotechnology Co.Ltd.,Fuzhou 350014)

Respectively,forty commodity layers and forty commercial broilers were inoculated by A,B,C three methods to compare antibody levels against newcastle disease virus（NDV）and avian influenza virus(AIV).A stood for only inoculating bivalent inactivated vaccines containing NDV and AIV(NDV-AIV vaccines).B stood for inoculating antibodies against AIV at once when inoculating NDV-AIV vaccines.C stood for inoculating antibodies against AIV on 7th day after inoculating NDV-AIV vaccines.D group is for control.Antibody levels against NDV and AIV of all groups were detected before inoculating and on 2,6,10,14,21,28,35 day post-immunization,respectively.The results showed that antibody levels against NDV of all immune groups decreased in the early stage,and began to increase since 10th day,respectively ending up with 8log2 in commodity layers and 7log2 in commercial broilers on 35th day,and that antibody levels against AIV of immunized commodity layers by B,C methods increased in advance and then decreased and then increased,and the least antibody levels were more than 3log2,and that antibody levels against AIV of immunized commodity layers by A method decreased in advance and began to increase rapidly since 10th day,and that antibody levels against AIV of all immunized commercial broilers decreased in advance,differently,began to increase since 10th day by A method and began to increase since 15th day by B,C methods.In conclusion,antibody levels against AIV of immunized commodity layers observably increased in a short time by inoculating both NDV and AIV vaccines and antibodies against AIV,but antibody levels against AIV of immunized commercial broilers increased indistinctively.

Bivalent inactivated vaccines containing NDV and AIV Inoculating methods Commodity layers Commercial broilers Detection of antibodies

A

1003-4331（2017）04-0013-03