王君正，于長(zhǎng)平

(1.山東師范大學(xué)附屬中學(xué)，山東濟(jì)南 250014；2.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院山東省皮膚病性病防治研究所，山東濟(jì)南 250022)

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濟(jì)南市犬體表皮膚癬菌攜帶情況的調(diào)查

王君正1，于長(zhǎng)平2*

(1.山東師范大學(xué)附屬中學(xué)，山東濟(jì)南 250014；2.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院山東省皮膚病性病防治研究所，山東濟(jì)南 250022)

通過對(duì)濟(jì)南市犬體表皮膚癬菌的分離鑒定，了解皮膚癬菌在該地區(qū)犬體表的攜帶分布狀況，為人畜共患皮膚真菌病的防治提供一定流行病學(xué)依據(jù)。分別從116只犬體表的4個(gè)部位刷集毛樣，在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和皮膚癬菌試驗(yàn)培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)，行銅圈法小培養(yǎng)，并在尿素沙氏培養(yǎng)基、米飯培養(yǎng)基及馬鈴薯培養(yǎng)基上接種。根據(jù)菌落形態(tài)、小培養(yǎng)鏡下結(jié)構(gòu)及培養(yǎng)基色素變化鑒定種屬。結(jié)果表明，116只受試犬真菌鏡檢陽性率為31.89%，真菌培養(yǎng)陽性率為30.17%。共分離皮膚癬菌86株，其中犬小孢子菌占45.35%,石膏樣小孢子菌占32.56%，須癬毛癬菌22.09%。腹部分離的皮膚癬菌數(shù)最高占35.34%(P<0.05)，幼年犬皮膚癬菌攜帶陽性率高于成年犬只(P<0.05)，不同性別間皮膚癬菌攜帶陽性率無顯著性差異(P>0.05)。濟(jì)南市犬體表皮膚癬菌攜帶率相對(duì)較高，為避免造成人畜共患皮膚真菌病的發(fā)生，應(yīng)做好相應(yīng)防護(hù)工作。

皮膚癬菌；體表；調(diào)查;犬

隨著人們生活水平的提高，飼養(yǎng)犬的人群在逐年上升,調(diào)查顯示2003年-2013年10年間我國(guó)的寵物數(shù)量增長(zhǎng)了近900%，養(yǎng)狗的家庭增至約1.7%，是世界第3大寵物飼養(yǎng)國(guó)[1-2]，犬真菌性皮膚病的發(fā)病率亦越來越高，有報(bào)道其發(fā)生率約在4%～10%[3]。犬真菌性皮膚病病情頑固，容易復(fù)發(fā)，并可造成人畜交叉感染，不僅影響犬自身的生長(zhǎng)發(fā)育，也可能威脅人類健康。因而，犬皮膚真菌感染情況的流行病學(xué)調(diào)查具有較為重要的臨床意義。本文調(diào)查分析濟(jì)南市犬體表皮膚癬菌攜帶情況，以期對(duì)該地區(qū)犬皮膚真菌病的防控提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑 光學(xué)顯微鏡，Olympus(中國(guó))有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫培養(yǎng)箱，天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品；分析天平97G-328A 型，上海國(guó)營(yíng)長(zhǎng)江儀器廠生產(chǎn)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA含氯霉素及放線菌酮)、皮膚癬菌試驗(yàn)培養(yǎng)基(DTM)，貝瑞特生物技術(shù)(鄭州)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；尿素沙氏培養(yǎng)基、米飯培養(yǎng)基及馬鈴薯培養(yǎng)基自備。

1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 2016年7月～9月間取山東大學(xué)動(dòng)物中心17只、寵物美容醫(yī)院61只、多個(gè)居民小區(qū)38只飼養(yǎng)犬,共116只作為研究對(duì)象，。其中雌性犬45只，雄性犬71只，幼年犬(1歲以下)33只，成年犬(1歲以上)83只。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 每只犬用4支無菌硬牙刷，分別用力梳刷犬頭部、背部、腹部及尾部體表各1遍，盡可能使牙刷上粘有足夠量被毛和皮膚碎屑。用無菌紙袋將牙刷封好，分別標(biāo)記備用。

1.2.2 真菌鏡檢 用鑷子采取毛發(fā)和皮膚碎屑置載玻片上，滴加100 g/L氫氧化鉀溶液，加蓋玻片，微熱處理后顯微鏡下觀察菌絲及孢子形態(tài)。

1.2.3 真菌培養(yǎng) 培養(yǎng)基編號(hào)備用，將頭部、背部、腹部及尾部不同部位所取毛發(fā)和皮膚碎屑分別接種于SDA和DTM培養(yǎng)基各2管，置25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，分別于第7、14、21天觀察菌落生長(zhǎng)情況，3周內(nèi)未見菌落生長(zhǎng)者判為真菌培養(yǎng)陰性。

1.2.4 真菌鑒定 采用銅圈法進(jìn)行小培養(yǎng)，置25℃恒溫培養(yǎng)1周～2周觀察結(jié)果。根據(jù)鏡下結(jié)構(gòu)鑒定種屬，仍不能明確者，進(jìn)一步轉(zhuǎn)種于尿素沙氏培養(yǎng)基、米飯培養(yǎng)基及馬鈴薯培養(yǎng)基培養(yǎng)。根據(jù)菌落形態(tài)，小培養(yǎng)鏡下結(jié)構(gòu)，色素變化鑒定種屬[4]。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 SAS9.13統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，分別對(duì)不同年齡、不同性別犬只和犬只不同部位皮膚癬菌攜帶陽性率進(jìn)行比較，采用x2檢驗(yàn)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 受試犬體表真菌分離情況

受試犬體表真菌分離結(jié)果見圖1。116只受試犬中真菌鏡檢陽性犬37只，其真菌鏡檢陽性率為31.89%；真菌培養(yǎng)陽性犬35只，真菌培養(yǎng)陽性率30.17%。每只受試犬4個(gè)部位取材，在全部464份被毛樣本中共分離皮膚癬菌86株。

2.2 受試犬體表分離皮膚癬菌與性別及年齡關(guān)系

結(jié)果見表1。33只幼年犬中皮膚癬菌分離培養(yǎng)

陽性犬16只(48.48%)，83只成年犬中陽性犬19只(22.89%)，45只雌性犬中皮膚癬菌分離培養(yǎng)陽性犬13只(28.89%)，雄性犬中皮膚癬菌分離陽性犬22只(30.99%)。幼年犬皮膚癬菌攜帶陽性率高于成年犬只(P<0.05)，不同性別間皮膚癬菌攜帶陽性率無顯著性差異(P>0.05)。

2.3 受試犬體表真菌種類的分布情況

分離的86株皮膚癬菌中，犬小孢子菌占分離菌株的45.35%(39/86)，石膏樣小孢子菌株占32.56% (28/86),須癬毛癬菌占22.09%(19/86)，犬小孢子菌是犬體表攜帶最多的皮膚癬菌(表2)。腹部分離真菌41株，尾部分離真菌26株，頭部12株，背部7株。兩兩比較不同部位體表攜帶皮膚癬菌陽性率，其中腹部攜帶皮膚癬菌陽性率明顯高于其他部位，有顯著性差異(P<0.05)(表3)。

A.犬小孢子菌;B.石膏樣小孢子菌;C.須癬毛癬菌

A.Microsporumcanis; B.Microsporumgypseum;C.Trichophytonmentagrophytes

圖1 犬體表分離皮膚癬菌菌落形態(tài)及顯微鏡下小培養(yǎng)形態(tài)(400×)

注：與成年犬比較,*P<0.05;不同性別間比較，**P>0.05。

Note:Compare to Adult dog, *P<0.05；Compare between gender, **P>0.05.

表2 受試犬體表分離真菌的種類分布情況

表3 受試犬不同部位真菌分離情況

注:組間比較，P<0.05；a與b，P<0.05；a與c，P<0.05；a與d，P<0.05；b與c，P<0.05；b與d，P<0.05； c與d，P>0.05。

Note:Comparison among parts,P<0.05;a vs b,P<0.05;a vs c,P<0.05;a vs d,P<0.05;b vs c,P<0.05;b vs d,P<0.05;c vs d,P>0.05.

3 討論

皮膚病是犬類的常見病和多發(fā)病，發(fā)病率可占犬臨床疾病的20%左右。犬皮膚病臨床上分為15類，真菌性皮膚病是3類最為常見的皮膚病之一。其發(fā)病除與致病真菌毒力、犬自身免疫功能有關(guān)外，犬品種、性別、年齡、生活地域與環(huán)境等的不同，皮膚病的發(fā)生率也存在很大的差異[5]。致病真菌通過黏附于犬的皮膚，侵入皮膚毛發(fā)或趾甲，寄生或腐生于表皮、毛發(fā)、甲板的角質(zhì)蛋白組織中大量繁殖，導(dǎo)致皮膚發(fā)生一系列器質(zhì)性病變。發(fā)病特點(diǎn)是病程長(zhǎng)、治愈難、易復(fù)發(fā)，并可在動(dòng)物間，人與人、人與動(dòng)物間互相傳播。研究表明，高達(dá)90%的兒童真菌性皮膚病系與患病動(dòng)物接觸而感染[6]。寵物一旦感染真菌，其豢養(yǎng)者的感染率明顯增高，可高達(dá)50%～70%以上[7-8]。而動(dòng)物皮膚真菌病病原菌的種類、分布、流行地區(qū)及趨勢(shì)的相關(guān)研究，可為有效預(yù)防皮膚真菌病等人畜共患疾病提供可靠的流行病學(xué)依據(jù)，減少人畜共患真菌病的發(fā)生。

上海地區(qū)犬常見皮膚病的發(fā)病調(diào)查報(bào)告顯示，1 303例皮膚病犬只中，真菌性皮膚病占27.09%[9]。廣州惠州市200余只寵物犬的真菌分離培養(yǎng)陽性率為16.23%[10]，其中犬小孢子菌感染占91.89%，石膏樣小孢子菌5.41%，須癬毛癬菌占2.70%。丁明星等[11]調(diào)查北京地區(qū)健康犬的皮膚絲狀真菌帶菌率為2.78%，健康貓的皮膚絲狀真菌帶菌率高于犬，達(dá)到9.4%。河南信陽市犬真菌性皮膚病的病原真菌主要是犬小孢子菌、石膏樣小孢子菌及須癬毛癬菌，分別占統(tǒng)計(jì)結(jié)果的33.25%、24.94%、22.34%，而該地區(qū)犬真菌性皮膚病的夏季發(fā)病率為49.21%[12]。張兆霞[13]報(bào)道北京地區(qū)犬真菌性皮膚病主要是以馬拉色菌和犬小孢子菌為主，其次是須癬毛癬菌和石膏樣小孢子菌。國(guó)外文獻(xiàn)[14-17]報(bào)道所調(diào)查的1 209只健康犬和292只健康貓的皮膚癬菌攜帶陽性率分別為20.93%和37.33%[14]，其中犬小孢子菌培養(yǎng)分離率最高，可達(dá)60%。對(duì)濟(jì)南市犬體表真菌攜帶情況進(jìn)行調(diào)查，在116只研究犬只中，選取動(dòng)物中心犬17只，約占15%，其余取自寵物美容醫(yī)院及多個(gè)分散居民小區(qū)的飼養(yǎng)犬，研究對(duì)象分布地點(diǎn)較廣，選取研究對(duì)象具有一定代表性。結(jié)果顯示，116只受試犬真菌鏡檢陽性率31.89%，真菌培養(yǎng)陽性率為30.17%，犬小孢子菌攜帶比例最高，占45.35%。國(guó)內(nèi)外寵物帶菌率的調(diào)查結(jié)果有一定差別，可能與收集的標(biāo)本來源及地域不同有一定關(guān)系，但犬體表真菌攜帶率較高，且犬小孢子菌是首要的致病真菌在相關(guān)報(bào)道中是一致的。濟(jì)南市犬體表皮膚癬菌攜帶率相對(duì)較高，為避免造成人畜共患皮膚真菌病的發(fā)生，應(yīng)做好相應(yīng)防護(hù)工作。

機(jī)體抵抗力降低是發(fā)生真菌感染的前提，犬的防御屏障機(jī)能遭到破壞，抗病能力降低時(shí)，寄生或腐生于畜禽表皮角質(zhì)、毛發(fā)中的致病菌，在皮膚上大量繁殖，通過機(jī)械性刺激和有害代謝產(chǎn)物的作用，引起局部的炎癥和病變，從而引發(fā)真菌性皮膚病。我們的調(diào)查及國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道均顯示真菌性皮膚病在幼年犬的發(fā)病顯著高于成年犬[16-19]，這很可能與成年動(dòng)物防御機(jī)能發(fā)育健全，通過免疫系統(tǒng)及皮膚局部皮脂腺和頂泌汗腺分泌不飽和脂肪酸,一定程度上抑制皮膚真菌侵害有著密切的關(guān)系。本文分別對(duì)不同性別和不同年齡皮膚癬菌攜帶陽性百分率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，并對(duì)體表不同部位(腹部、頭部、尾部、背部)皮膚癬菌攜帶陽性百分率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。不同性別間皮膚癬菌攜帶陽性率比較無顯著性差異(P>0.05)。幼年犬皮膚癬菌攜帶陽性率高于成年犬只(P<0.05)，對(duì)4個(gè)部位皮膚癬菌攜帶陽性率進(jìn)行兩兩比較，腹部皮膚癬菌攜帶陽性率最高，與其他部位比較均有顯著性差異(P<0.05)。腹部是犬真菌性皮膚病最易發(fā)生的部位，本文調(diào)查結(jié)果與該類文獻(xiàn)報(bào)道相一致[18-19]。這可能與犬喜臥于地面，增加了腹部與不潔環(huán)境中真菌接觸的機(jī)會(huì)有關(guān)。因此，對(duì)于犬只的飼養(yǎng)生活環(huán)境需保持通風(fēng)、清潔、干燥，特別是幼年犬，以減少真菌的滋生繁殖，減少真菌感染的發(fā)生。

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A Survey of Dermatophytes on Dog Hair in Jinan City

WANG Jun-zheng1,YU Chang-ping2

(1.HighSchoolaffiliated,ShandongNormalUniversity，Jinan,Shandong，250014，China; 2.ShandongProvincialInstituteofDermatologyandVenereology，Jinan,Shandong，250022，China)

The dermatophytes on dog hair were cultivated and identified to investigate carrier rate of canines dermatophytes in Jinan for providing new epidemiological information to decrease pet-transmitted dermatomycosis.Samples from four parts of 116 dogs were obtained to inoculated on Sabouraud dextrose agar(SDA) and dermatophytes test medium(DTM).Each of the fungal isolate was identified based upon its colony characteristics and hyphal and conidial cells produced by small training methods,and identified further through three kinds agars(including chritensen urea agar,rice grain medium and potato dextrose medium).The results showed that the positive rate of direct microscopic examination and fungal cultural examination respectively were 31.89% and 30.17%.In all strains,Microsporumcaniswas 45.35%,Microsporumgypseumwas 32.56%,andTrichophytonmentagrophyteswas 22.09%.The abdomen was the most commonly carrier position，accounting for 35.34%(P<0.05).The incidence of carrier rate of canine dermatophytes showed no gender deference(P>0.05).The incidence of carriage in juvenile dogs was higher than that of adult dogs(P<0.05)．The incidence of carrier rate of canine dermatophytes was relatively higher in Jinan,therefore,proper care should be taken during management of pet animals to minimize human dermatomycosis.

dermatophyte; hair; survey;dog

2016-10-21

王君正(2000-)，男，山東濟(jì)南人，主要從事藥物化學(xué)與微生物的學(xué)習(xí)。*通訊作者

S853.55;S858.292

B

1007-5038(2017)07-0130-04