安徽醫(yī)科大學合肥第三臨床學院(合肥市第三人民醫(yī)院)影像中心(安徽 合肥 230022)

余 梁 含 笑 周麗芬王國亮 吳鴻峰 胡茂能

兔VX2肝癌模型改良制作及TAE前后CT與DSA影像學評估*

安徽醫(yī)科大學合肥第三臨床學院(合肥市第三人民醫(yī)院)影像中心(安徽 合肥 230022)

余 梁 含 笑 周麗芬王國亮 吳鴻峰 胡茂能

目的 進一步完善兔VX2肝癌模型的制作方法，并應(yīng)用CT及DSA檢查對腫瘤TAE前后進行影像學評估。方法 制作兔VX2肝癌模型20只并保種傳代，于接種后第7、14日行CT平掃+增強掃描；第15日行開腹門靜脈直接穿刺造影及經(jīng)導管股-肝動脈造影檢查，腫瘤供血動脈行碘油栓塞；第21日再次行CT平掃+增強掃描；第22天開腹行門靜脈及肝動脈直接穿刺DSA檢查。結(jié)果 種植2周時肝區(qū)腫瘤可全部清楚的展示，CT平掃可見肝區(qū)結(jié)節(jié)狀低密度病灶，增強掃描腫瘤在動脈期可呈明顯環(huán)形強化，門脈期呈低密度。3周時腫瘤壞死明顯。DSA顯示腫瘤富血供。結(jié)論 兔VX2肝癌模型改良制作成功率較高。TAE前后CT與DSA表現(xiàn)一致，且腫瘤的血供主要來自肝動脈，門靜脈不參與供血。

VX2腫瘤；肝癌模型；CT

原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，大多數(shù)很難早期診斷而失去手術(shù)機會[1]，經(jīng)肝動脈介入治療是不能手術(shù)切除的肝癌患者首選治療方式，而CT增強掃描是肝癌介入手術(shù)前后的重要診斷和評價依據(jù)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，肝癌經(jīng)肝動脈栓塞術(shù)(TAE)后，常伴隨著大量的腫瘤新生血管，導致腫瘤復發(fā)或進展，其機制仍不十分明確。兔VX2肝腫瘤模型其生長特性和血供與人類肝癌相似，并具有與人肝細胞癌類似的影像學表現(xiàn)[2]，適用于腫瘤影像學評價及介入診療研究。本實驗用改良方法接種兔VX2肝癌，建立動物模型，探討TAE前后腫瘤新生血管及殘癌組織血流變化。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：后腿皮下荷VX2瘤新西蘭種兔1只(購自蘇州大學第一附屬醫(yī)院)。健康新西蘭大白兔20只(安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供)，體重約1.8～2.5公斤，雌雄不限，普通飼料喂養(yǎng)。

1.1.2 主要設(shè)備、器材及實驗藥品：GE Bright Speed Elite多排螺旋CT，GE INNOVA-3100IQ DSA，自制兔手術(shù)臺，苯巴比妥鈉，超液態(tài)碘化油，碘佛醇，眼科剪，眼科鑷，動脈夾，穿刺針，經(jīng)皮肝穿擴張鞘管，微導管微導絲。

1.2 實驗兔接種方法荷瘤種兔經(jīng)耳緣靜脈推注苯巴比妥鈉(100mg/Kg)全麻后，切開表皮，剝離后肢皮下實體性腫塊，將周圍壞死組織剔除干凈，取腫塊邊緣生長旺盛的魚肉樣組織，分割為2mm3大小的瘤塊，同時以眼科鑷取2～3粒瘤塊送至健康兔后腿皮下，以保種傳代。將實驗兔用苯巴比妥鈉耳緣靜脈推注全麻后，固定在自制手術(shù)臺上，備皮、消毒并鋪巾，于劍突下正中偏左側(cè)縱向切開腹腔，暴露肝臟，以針頭刺破肝左葉包膜，將1～2粒瘤塊植入后即刻以明膠海綿條封閉穿刺通道，局部紗布壓迫，檢查無出血及瘤塊脫出后回納肝臟，縫合腹部切口。于術(shù)后連續(xù)3日肌注青霉素80萬單位預防感染。

1.3 CT掃描及DSA檢查方法實驗兔20只，于接種后第7日、第14日行CT平掃+增強掃描；第15日行開腹門靜脈直接穿刺造影及經(jīng)導管股動脈-肝動脈造影檢查，腫瘤供血動脈行碘油栓塞；于第21日再次行CT平掃+增強掃描；第22天開腹行門靜脈及肝動脈直接穿刺DSA檢查。

1.3.1 CT掃描：掃描條件為120KV，200mA，螺距1.375:1，層厚2.5mm，F(xiàn)OV25。增強掃描經(jīng)耳緣靜脈連接高壓注射器，造影劑總量為10mL（7mL碘佛醇＋3mL生理鹽水），注藥速率1mL/s。掃描完畢后將數(shù)據(jù)傳入ADW工作站行后期重建，了解肝癌瘤體一般情況及CT表現(xiàn)。

1.3.2 經(jīng)股動脈選擇性肝動脈造影：將實驗兔全麻后固定在手術(shù)臺，備皮、消毒、鋪巾，切開右側(cè)腹股溝皮膚，游離股動脈約2cm長度，用絲線提拉近端暫時阻斷血流，遠端用眼科剪剪開一小口，插入微導管，在微導絲指引下將導管超選至肝總動脈，連接高壓注射器，造影劑總量5～6mL、速度2～3mL/s行DSA，造影結(jié)束后根據(jù)實驗設(shè)計要求超選擇至靶血管行碘油栓塞。最后結(jié)扎股動脈并縫合切口。

1.3.3 門靜脈直接穿刺造影：打開兔上腹部，暴露腹腔，顯示門靜脈后用彎折的5號輸液針頭直接穿刺并固定，連接高壓注射器，造影劑總量8～10mL、速度3～5mL/s行DSA。

1.3.4 肝動脈直接穿刺造影：術(shù)前準備完善后開腹，暴露腹腔，小心游離出肝固有動脈，血管夾夾閉近端血管，用彎折的5號輸液針頭直接穿刺并固定，連接高壓注射器，造影劑總量5～6mL、速度2～3mL/s行DSA。

2 結(jié) 果

2.1 實驗兔接種結(jié)果接種新西蘭大白兔20只，建立腫瘤模型全部成功，CT檢查均可見肝區(qū)移植腫瘤形成。其中2只于碘油栓塞后死亡，有1只在CT影像及剖腹探查時發(fā)現(xiàn)腹水，1只出現(xiàn)肝內(nèi)轉(zhuǎn)移征象。

2.2 腫瘤CT特點腫瘤于接種后生長迅速，1周時經(jīng)CT掃描可發(fā)現(xiàn)大部分病灶，病灶直徑較小，一小部分病灶于第2周回顧性讀片時亦可診斷。2周時肝區(qū)腫瘤可全部清楚的展示：平掃可見肝區(qū)結(jié)節(jié)狀低密度病灶，邊界清，部分病灶可見分葉征象。增強掃描腫瘤在動脈期可呈明顯環(huán)形強化，中央壞死區(qū)呈低密度，無明顯強化，病灶與周圍肝實質(zhì)對比，分界更加清晰(見圖1)；門脈期腫瘤為低密度。行碘油栓塞腫瘤供血血管后于第3周掃描，腫瘤直徑進一步增大，病灶中央可見典型的低密度的壞死區(qū)域，碘油呈不規(guī)則環(huán)狀及小片狀致密沉積，腫瘤殘存區(qū)域未見碘油存留，增強掃描可見腫瘤周邊由肝動脈發(fā)出新生的細小供血血管。

2.3 腫瘤DSA特點第1、2周肝動脈造影均可見肝區(qū)腫瘤染色征象，基本表現(xiàn)為腫瘤周邊環(huán)狀強化向中央部位過渡，部分可見腫瘤呈結(jié)節(jié)狀染色。腫瘤血供較為豐富，局部供血動脈雜亂、血管網(wǎng)增多，伴大量細小的異常血管，一起勾畫出腫瘤輪廓(見圖2)。碘油栓塞后于第3周肝動脈直接穿刺造影，腫瘤供血血管較前明顯減少，部分可見截斷征象，但與栓塞前對比，腫瘤周邊可見一些細小新生血管形成，部分新生血管繞過碘油區(qū)域包繞腫瘤。經(jīng)門靜脈造影顯示門靜脈走行及分支正常，未見明顯異常征象(圖3)。

3 討 論

圖1 VX2瘤兔行CT增強掃描，腫瘤在動脈期明顯強化。圖2 行DSA檢查，腫瘤血供豐富，局部供血動脈增多、雜亂，可見腫塊染色征象。圖3 經(jīng)門靜脈造影，顯示門靜脈及分支走行正常。圖4 外科分離肌肉及筋膜，見股動、靜脈及股神經(jīng)三者伴行于肌間。

兔VX2肝癌模型病理上與人類原發(fā)性肝癌類似，且血供豐富，適合作為腫瘤影像學評價及介入診療研究的動物模型。目前兔VX2腫瘤模型的制作方法主要分為瘤細胞懸液接種法與瘤塊接種法，包括經(jīng)皮穿刺及開腹接種兩種途徑[3-5]。前者存在的主要問題是懸液為液體，種植過程中懸液流動有可能造成腫瘤向四周的廣泛種植。經(jīng)皮穿刺一般是影像設(shè)備引導下直接穿刺種植，但因兔肝臟較小，實際操作過程中有可能造成肝外種植，影響實驗結(jié)果。我們采用的是開腹直接接種，利用經(jīng)皮肝穿擴張鞘管，以45°鈍性刺入肝葉中心較厚部位，并用泰爾茂血管鞘套裝中交換導絲的柔軟端，將預填入鞘管中的瘤塊及明膠海綿條推入。此種方法避免了刺穿肝葉造成出血或瘤塊脫落，另外明膠海綿條可封堵穿刺點，避免瘤塊逸出造成異位種植，將瘤塊種植在肝葉深部，易于獲得良好的血供。同時肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生率和死亡率也大大降低[6]。關(guān)于經(jīng)股動脈選擇性肝動脈造影，因兔股動脈細小，操作不慎有可能造成血管撕裂導致大出血。根據(jù)我們的經(jīng)驗，切開腹股溝皮膚后鈍性分離肌肉及筋膜，可以看到股動靜脈及股神經(jīng)三者伴行于肌間(圖4)，此時應(yīng)鈍性游離，切不可粗暴操作；插管前將眼科鑷墊于股動脈下方，用眼科剪尖端小心剪出一小口，看到血液溢出即可，切口不可過大，以免推送導管時造成血管斷裂。

目前，對兔VX2肝癌模型的影像學監(jiān)測手段主要有CT、MR、DSA及超聲。CT掃描是肝臟腫瘤首選檢查方法。結(jié)合CT多期對比劑增強掃描，可確定腫瘤生長的位置、大小、形狀、血供情況及中心有無壞死，用以區(qū)分病灶的良惡性、評價腫瘤血管及對療效的反應(yīng)[7]。DSA通過血管內(nèi)直接注射對比劑，形成良好的組織對比，通過染色征象顯示腫瘤血管特征，對肝臟腫瘤的供血血管及TAE后新生血管展示清晰、直觀。

肝癌具有很強的誘導血管生成能力，其血管生成程度與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預后密切相關(guān)[8-9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，肝癌經(jīng)肝動脈栓塞術(shù)(TAE)后，殘癌組織周圍常生成大量的新生血管，導致腫瘤復發(fā)或進展，其機制仍不十分明確。血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)可能與腫瘤血管生成即腫瘤微血管密度(MVD)、腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移有關(guān)。有學者認為[10]術(shù)后腫瘤細胞VEGF表達明顯上升，VEGF與MVD呈正相關(guān)；而另一些研究[11]通過CT灌注掃描研究則表明栓塞治療后腫瘤灌注參數(shù)、VEGF表達及MVD計數(shù)均降低。本研究主要從影像學角度探討TAE前后腫瘤新生血管及殘癌組織血流變化：TAE前后CT與DSA影像學表現(xiàn)基本一致，主要表現(xiàn)為由肝動脈供血的肝區(qū)腫塊，增強掃描可有明顯的強化表現(xiàn)，腫瘤內(nèi)含豐富滋養(yǎng)血管，無明顯的血竇腔，直徑較大的腫瘤中央常伴較明顯的壞死灶,DSA造影顯示腫瘤染色豐富，據(jù)此我們認為主要為肝動脈供血的富血供腫瘤。國內(nèi)部分研究結(jié)果也表明兔VX2肝癌為富血供腫瘤[12-13]。DSA下門靜脈造影顯示門靜脈分支及走行正常，未見明顯染色征象，提示無明顯門靜脈參與腫瘤供血。碘油栓塞后腫瘤周邊可見雜亂細小的新生血管形成，表現(xiàn)為腫瘤周圍不規(guī)則的染色，無明顯門靜脈參與供血征象，與人原發(fā)性肝癌的DSA表現(xiàn)相[14]。

本實驗通過改良的模型制作及對瘤兔介入性操作方法，經(jīng)CT及DSA影像學評估，證實兔VX2肝癌TAE前后及殘存腫瘤組織血供主要來自肝動脈。同時可以從不同角度對介入治療惡性腫瘤做出較為準確的評估，有利于真實反映腫瘤的血供情況，對介入治療效果做出全面評估，并進一步指導完善介入操作，提出針對性改進意見。

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(本文編輯:謝婷婷)

Improvement of Rabbit VX2 Liver Cancer Model and Imaging Evaluation of CT and DSA Before and After TAE*

YU Liang, HAN Xiao, ZHOU Li-fen, et al．, Department of Image Center, Hefei Third People's Hospital, Hefei Third Clinical College, Medical University Of Anhui, Hefei 230022, Anhui Province, China

ObjectiveTo improve the production methods of rabbit VX2 liver cancer model, and applications of DSA and CT before and after tumor TAE radiologic evaluation． Methods Production and storage of rabbit VX2 liver cancer model 20 batches．In7,14 days after inoculation CT scan and enhanced scan． 15th of line open portal vein puncture angiography and directly after catheter-hepatic artery angiography examination, the tumor blood supply artery iodine oil embolization． 21 days CT scan and enhanced scanning again． 22 days open lines of portal vein and hepatic artery puncture DSA examination directly． Results When planting 2 weeks liver area tumor can all show clearly, CT scan shows nodular liver area low density lesions, enhanced scanning tumor in can show clear ring arterial enhancement,portal venous phase in low density． 3 weeks when tumor necrosis is obvious． DSA shows the rich blood supply of the tumor． Conclusion Improved the rabbit VX2 liver cancer model success rate is higher． CT and DSA was consistent before and after TAE, and the flow of blood to the tumor mainly comes from the hepatic artery, the portal vein is not involved in blood supply．

VX2 Tumor; Liver Cancer Model; CT; DSA

R73；R97

A

合肥市第四屆醫(yī)學重點?？平ㄔO(shè)基金，編號：衛(wèi)科（2014-239號）

10.3969/j.issn.1672-5131.2017.08.025

2017-07-11

胡茂能