（中牧實(shí)業(yè)股份有限公司北京100070）

兩種氟苯尼考制劑產(chǎn)品比較藥動(dòng)學(xué)研究

萬進(jìn)，牛志強(qiáng)，徐瑞華，朱光山

（中牧實(shí)業(yè)股份有限公司北京100070）

健康杜長(zhǎng)大豬16頭（體重為18±1kg）隨機(jī)分為A、B兩組，以20mg/kg劑量單次灌服兩種氟苯尼考制劑（20%氟苯尼考粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑），并于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)從前腔靜脈采血，采用已建立的高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行血藥濃度測(cè)定，利用WinNonlin軟件的非房室模型擬合其血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)。方法學(xué)研究表明本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC方法專屬性良好，在目標(biāo)峰附近無雜質(zhì)干擾，線性良好，線性范圍為0.03～10μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.9994。20%氟苯尼考粉主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：Tmax=1.13± 0.64h，Cmax=9.61±2.65μg/mL，T1/2=3.84±1.56h，MRT=4.65±0.70h，AUC=52.56±16.99 h*μg/mL；2%氟苯尼考預(yù)混劑主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：Tmax=1.31±0.37h，Cmax=8.30±2.17μg/mL，T1/2=3.39± 0.35h，MRT=4.93±0.74h，AUC=49.84±17.54 h*μg/mL。比較藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明20%氟苯尼考粉相對(duì)于2%氟苯尼考預(yù)混劑的相對(duì)生物利用度為105.45%。經(jīng)T檢驗(yàn)和方差分析，二者主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無顯著差異，在豬體內(nèi)可視為有相似的藥動(dòng)學(xué)過程，但前者在飲水灌服給藥時(shí)能在更短的時(shí)間吸收分布、達(dá)到血藥峰濃度，且血藥峰濃度略高于2%氟苯尼考預(yù)混劑，故20%氟苯尼考粉起效更快、效果稍好于2%氟苯尼考預(yù)混劑。

氟苯尼考制劑、豬、口服、比較藥動(dòng)學(xué)

氟苯尼考是上世紀(jì)八十年代后期成功研制的一種新的獸醫(yī)專用酰胺醇類廣譜抗菌藥，對(duì)大部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有強(qiáng)效，多用于敏感細(xì)菌所致的豬、雞及魚的細(xì)菌性疾病，尤其對(duì)呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著。其抗菌機(jī)理為作用于細(xì)菌70s核糖體的50s亞基，抑制轉(zhuǎn)肽酶，使肽酶的增長(zhǎng)受阻，抑制了肽鏈的形成，從而阻止蛋白質(zhì)的合成，達(dá)到抗菌作用[1]。本藥口服吸收迅速、分布廣泛，半衰期長(zhǎng)，血藥濃度高且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)[2]。

目前市面上制劑類型眾多，有粉劑、預(yù)混劑和注射劑。為比較不同劑型氟苯尼考制劑在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，中牧南京動(dòng)物藥業(yè)有限公司與華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)課題組根據(jù)農(nóng)業(yè)部《獸用化學(xué)藥物臨床藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo)原則》[3]，對(duì)市售兩種類型氟苯尼考產(chǎn)品進(jìn)行了豬口服比較藥動(dòng)學(xué)的研究，以檢驗(yàn)氟苯尼考制劑不同工藝在豬體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，從而不斷改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量，滿足養(yǎng)殖業(yè)需求。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)：k0301305，規(guī)格：100mg，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

20%氟苯尼考粉（氟欣泰），批號(hào)：16072101，中牧南京動(dòng)物藥業(yè)有限公司。

2%氟苯尼考預(yù)混劑，市售。

1.2 試劑與耗材

甲醇，色譜純，批號(hào)：16015079，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

乙腈，色譜純，批號(hào)：16065015，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

乙酸乙酯，分析純，批號(hào)：20160321，國(guó)藥集團(tuán)股份有限公司。

1.3 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀，美國(guó)waters公司(waters2695)。電子天平，感量0.00001g，Shimadzu，日本島津公司。旋渦混合器，XW-80A，海門市其林貝爾公司。

氮吹儀，N-EVAPTM112，Organomation Associates,Inc。

高速冷凍離心機(jī)，HITACHI CR21GⅢ，日本日立公司。

超純水機(jī)，Milli-Q，美國(guó)Millipore公司。

電熱干燥箱，DGX-9243B-1，上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

超聲波儀，KQ3200型，昆山市超聲儀器有限公司。

振蕩器，THZ-H-1，Tokyo Rikakikai Co.Ltd.

電子秤，TCS-150，永康市江南衡器廠。

1.4 溶液配制

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取10 mg氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇稀釋成適宜濃度的氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)工作液。置2-8℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 試驗(yàn)動(dòng)物和飼料

16頭公母各半的60日齡體重為（18±1）kg的健康杜長(zhǎng)大豬（杜洛克×長(zhǎng)白×大白），從華中農(nóng)業(yè)大學(xué)種豬場(chǎng)購買后在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)場(chǎng)地飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周。適應(yīng)環(huán)境期間的飼養(yǎng)環(huán)境溫度為18～25℃，相對(duì)濕度為50～65%，自由飲水，飼養(yǎng)期間飼喂未添加任何藥物的飼料。飼料由武漢市春龍實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料機(jī)械經(jīng)營(yíng)部加工生產(chǎn)，配方為玉米粉：53%；豆粕：24%；三等粉：8%；麩皮：8%；魚粉：4%；鹽：1%；預(yù)粉料：2%。

2 試驗(yàn)方法

2.1 高效液相色譜法(HPLC)的檢測(cè)條件

色譜柱：C18(Dim：250×4.6 mm，ID：5 μm)；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：20 μL；流動(dòng)相：水/乙腈（68/32，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：224 nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)工作液適量配制成濃度為0.03、0.05、0.1、0.5、0.8、1、5和10 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用建立的HPLC方法進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定三次，利用平均峰面積與相應(yīng)濃度作線性回歸，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

2.3 樣品前處理

取0.5 mL血漿于10 mL EP管中，加1.5 mL乙酸乙酯，渦旋5 min，4 000 r/min離心10 min，取上層乙酸乙酯上清液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，氮?dú)獯蹈?，殘留物?.25 mL的初始流動(dòng)相溶解，渦旋5 min，12 000 r/min離心5 min，過0.22 μm濾膜，上樣進(jìn)行測(cè)定。

2.4 HPLC方法考察

圖8 給出了各個(gè)算法的同步誤差性能與信標(biāo)節(jié)點(diǎn)和普通接收節(jié)點(diǎn)同步過程中消息總數(shù)的關(guān)系[12].從圖中可以看出,對(duì)于每種算法,隨著消息總數(shù)的增加,算法的同步誤差都在減小,但是不同算法的誤差下降幅度是不一樣的.CB-Sync算法在消息總數(shù)小于20時(shí),較其他算法有較好的同步性能;在消息總數(shù)大于25時(shí),CB-Sync算法與其他算法的同步誤差性能接近.換言之,CB-Sync較CCS-Sync,DA-Sync,D-Sync算法可以以更少的能量消耗得到更高的同步精度.

對(duì)所建HPLC方法的專屬性、檢測(cè)限和定量限、準(zhǔn)確度和精密度、穩(wěn)定性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和考察。

2.5 藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)

選取適應(yīng)環(huán)境的健康杜長(zhǎng)大豬16頭，隨機(jī)分成2組、每組8頭，禁食12 h后分別按20 mg/kg劑量（溶解和混懸于140 mL1%羧甲基纖維素鈉）單次灌服20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑，并于給藥后于0.083、0.25、0.51、1.5、2、4、6、8、12、18、24 h從前腔靜脈采血5 mL，分離血漿、提取、按建立的HPLC方法進(jìn)行血藥濃度的測(cè)定。試驗(yàn)期間飼喂不含任何藥物的飼料，自由飲水。根據(jù)試驗(yàn)中測(cè)得的每頭豬的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，繪制每組的平均藥時(shí)曲線。

2.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

利用WinNonlin非房室模型處理血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，然后利用SPSS方差分析比較藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的差異。

3 .結(jié)果

3.1 所建HPLC方法色譜圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及線性范圍

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.03～10 μg/mL范圍內(nèi)，各濃度與其響應(yīng)值（峰面積）成線性相關(guān)，對(duì)濃度(X)與峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得出氟苯尼考線性方程為：y=21.641x-413.66，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。HPLC檢測(cè)方法在豬血漿的最低檢測(cè)限為0.05 μg/mL，定量限為0.1 μg/mL。

3.3 豬灌服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑后各采血點(diǎn)血藥濃度（見表1）

圖1 氟苯尼考的液相色譜圖：A：溶劑；B：空白血漿；C：氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品(0.1μg/mL)；D：空白血漿添加氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品(0.1 μg/mL)

表1

圖2 豬口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑(20mg/kg)的血藥濃度-時(shí)間曲線(Mean±SD，n=8）

豬口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑(20mg/kg)的血藥濃度-時(shí)間曲線(Mean±SD，n=8）

3.4 經(jīng)WinNonlin軟件非房室模型處理血藥濃度-時(shí)間后得到的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（見表2）

表2

經(jīng)上述所得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分析，得知20%氟欣泰可溶粉相對(duì)于2%氟苯尼考預(yù)混劑的相對(duì)生物利用度為105.45%

4 .討論

4.1 方法和主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的特點(diǎn)

本試驗(yàn)在建立豬血漿中氟苯尼考濃度的測(cè)定方法時(shí)根據(jù)以往研究對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了優(yōu)化。當(dāng)選擇0.1%氨水作為水相時(shí)，氟苯尼考出峰太早且峰型不對(duì)稱。用超純水作水相氟苯尼考保留時(shí)間在7.79min左右，且峰型對(duì)稱性良好，溶劑、空白血漿在氟苯尼考保留時(shí)間附近未見干擾峰出現(xiàn)。

4.2 對(duì)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和血藥濃度的分析

藥動(dòng)學(xué)研究顯示2%氟苯尼考預(yù)混劑的MRT和T1/2與仆仕金報(bào)道相似[4]，Tmax與研究報(bào)道的氟苯尼考粉相似[5]，略小于仆仕金報(bào)道。20%氟欣泰可溶粉主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與2%氟苯尼考預(yù)混劑基本相似。對(duì)重要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用SPSS軟件對(duì)兩制劑的Tmax、Cmax和AUC進(jìn)行均值一致性t檢驗(yàn)分析，得到的|t|值分別為0.716、1.075和0.482，均小于t0.05=2.1318，在95%的置信區(qū)間內(nèi)不存在顯著性差異。從藥時(shí)曲線得知，在給藥18h后氟苯尼考血藥濃度為0.33±0.20μg/mL，該濃度對(duì)大部分敏感菌有較強(qiáng)抑制效果。其中氟苯尼考對(duì)胸膜肺炎放線桿菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）分別為0.50μg/mL和1.0μg/mL[6]，在20%氟欣泰灌服8h和12h時(shí)，其血藥濃度分別為2.04±0.90μg/mL和0.67± 0.46μg/mL，故20%氟欣泰給藥一次后，其對(duì)胸膜肺炎放線桿菌的抑殺效果持續(xù)時(shí)間達(dá)8～12h，對(duì)豬場(chǎng)這一重要致病菌有很好的防控作用。

4.3養(yǎng)殖場(chǎng)推薦用藥方案

基于對(duì)兩種氟苯尼考制劑的比較藥動(dòng)學(xué)20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑在豬體內(nèi)存在相似的內(nèi)服藥動(dòng)學(xué)，但前者在飲水灌服給藥后15分鐘已很好的吸收分布（血藥濃度達(dá)到6.42± 2.59μg/mL）、在更短的時(shí)間達(dá)到血藥峰濃度，且血藥峰濃度略高于氟苯尼考預(yù)混劑，故在相同投藥（飲水）條件下，氟欣泰起效更快、效果更好?！?/p>

[1]Shen J,Hu D,Wang X,Coats JR.Bioavaflabflity and pharmacokinetics of florfenicol in broiler chickens[J]．Vet Pharmacol Ther., 2003,26:337-34l．

[2]蔣紅霞，曾振靈，陳杖榴,等。豬饑餓和喂飼后內(nèi)服氟甲礬霉素的藥動(dòng)學(xué)比較[J]．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，21(4)：68-69．

[3]農(nóng)業(yè)部.獸用化學(xué)藥物臨床藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo)原則[S].北京：農(nóng)業(yè)部第1247號(hào)公告，2009

[4]王雅琴，仆仕金,等．10%氟欣泰和2%紐弗羅預(yù)混劑在豬的比較藥動(dòng)學(xué)研究[C]．學(xué)術(shù)討論會(huì)，2013，S85 R96．

[5]劉帥帥，楊剛，趙永達(dá)，方秋華，黃顯會(huì)．氟苯尼考顆粒與氟苯尼考粉在豬體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)比較[J]。華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33（2）：235-238．

[6]董靜.豬肌注氟苯尼考的藥動(dòng)學(xué)-藥效學(xué)研究[D]．武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008：33．

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.05.049