任衛(wèi)科+池晶晶+李秀麗+鄢明華+張莉

摘 要： 豬偽狂犬病（pseudorabies， PR）是由偽狂犬病毒（pseudorabies virus， PRV）引起的豬的一種急性傳染病，對(duì)世界養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。疫苗免疫是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的主要措施之一。目前，國內(nèi)外臨床應(yīng)用的豬偽狂犬病疫苗包括滅活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失疫苗。近年來，隨著我國偽狂犬病的反彈和流行，偽狂犬病防控和疫苗研究再次成為研究熱點(diǎn)。本文對(duì)豬偽狂犬病疫苗的研究及使用現(xiàn)狀進(jìn)行了較為詳細(xì)的綜述。

關(guān)鍵詞： 豬；偽狂犬??；疫苗；現(xiàn)狀

中圖分類號(hào)：S852.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2017.08.009

Abstract：Pseudorabies （PR） is an acute infectious disease caused by pseudorabies virus （PRV）， which causes great losses to the pig industry in the world. Now， vaccination remains one of the main measures to prevent and control PR. At present， clinical application of PR vaccine at home and abroad include inactivated vaccine， attenuated vaccine and gene deleted vaccine. In recent years， with the rebound and epidemic of PR in China， the prevention and control of PR and vaccine research have become the focus of research again.In the article， the research and application status of PR vaccines were reviewed in detail.

Key words： swine； pseudorabies； vaccine； status

偽狂犬?。╬seudorabies， PR）是一種由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus， PRV）引起的以多種家畜及野生動(dòng)物為主的以發(fā)熱、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)障礙為主要特征的急性傳染病[1]。該病感染豬后可引起母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬發(fā)病后表現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉和神經(jīng)癥狀，兩周齡內(nèi)仔豬死亡率可達(dá)100%。20世紀(jì)90年代以來，隨著PR基因缺失疫苗（Bartha-K61株）的引入并廣泛使用，該病在我國大部分地區(qū)得到有效控制[2-4 ]。然而，自2011年以后，我國華東、華中、華北及東北等地區(qū)的疫苗免疫豬群中相繼出現(xiàn)了PR疫情，部分地區(qū)甚至大規(guī)模爆發(fā)，并呈現(xiàn)逐漸蔓延的趨勢(shì)，給養(yǎng)豬業(yè)造成新的威脅[5-6]。這些發(fā)病豬場大多都免疫過PR基因缺失疫苗，并表現(xiàn)出了新的流行特點(diǎn)[7-9]。

近期的研究結(jié)果表明，新的PRV流行株部分毒力基因相比以前的流行毒株已經(jīng)發(fā)生了變異，且對(duì)仔豬的致病性有所增強(qiáng)，現(xiàn)有的疫苗不能完全保護(hù)免疫豬抵抗PRV流行株的攻擊[10-12]。對(duì)于該病的防控，國內(nèi)外均以疫苗免疫預(yù)防為主，結(jié)合偽狂犬病毒gE抗原和gE抗體檢測(cè)淘汰、凈化野毒感染豬。目前，臨床應(yīng)用的PR疫苗大體可分為以下三類：一是將分離的野毒或強(qiáng)毒經(jīng)甲醛滅活后，加佐劑乳化制成油乳劑滅活疫苗；二是將分離的野毒或強(qiáng)毒經(jīng)非豬源細(xì)胞或者雞胚反復(fù)傳代致弱研制的弱毒疫苗；三是利用基因工程技術(shù)構(gòu)建的基因缺失疫苗。這些疫苗在PR的防控方面起到了非常重要的作用。此外，一些基因工程疫苗例如核酸疫苗、亞單位疫苗及重組疫苗尚在研究之中。本研究擬對(duì)PR疫苗研究進(jìn)展及其在我國養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行詳細(xì)闡述。

1 滅活疫苗

2001年陳煥春等[13-14]應(yīng)用PRV分離株Ea株研制成功我國第一個(gè)全病毒油乳劑滅活疫苗。該疫苗免疫效力較好，后備母豬免疫4周后血清中和滴度可高達(dá)1∶1 412，對(duì)新生仔豬和斷奶仔豬保護(hù)率分別為90.6%，100.0%。2014年，Gu等[15]利用細(xì)菌人工染色體技術(shù)（BAC）缺失了PRV流行株ZJ01株的gE/gI基因，構(gòu)建了PRVZJ01△gE/gI株，將該病毒用福爾馬林滅活后，添加佐劑Montanide ISA 206 研制成功PRVgE/gI雙基因缺失滅活疫苗。用該疫苗免疫4周齡仔豬，二免后3周用1 mL 106.0 TCID50·mL-1的PRV-ZJ01株鼻內(nèi)攻擊，結(jié)果攻毒對(duì)照豬7 d內(nèi)全部死亡，而vZJ01△gE/gI株滅活疫苗免疫組豬未出現(xiàn)臨床癥狀，但免疫過兩次PRBartha-K61株疫苗的試驗(yàn)豬均出現(xiàn)一過性痙攣及共濟(jì)失調(diào)癥狀。2015年，Wang等[16]基于分離的PRV流行株HN1201構(gòu)建了gE基因缺失株（PRV-HN1201ΔgE株），滅活后添加佐劑Montanide ISA 206研制出PRVgE基因缺失滅活疫苗。該疫苗免疫3周齡小豬4周后用1 mL 107.0 TCID50·mL-1親本強(qiáng)毒PRV-HN1201滴鼻攻擊，攻毒后免疫豬僅有一過性發(fā)熱，沒有其他臨床癥狀，但有兩頭在攻毒后第2天經(jīng)鼻拭子檢測(cè)到排毒現(xiàn)象，持續(xù)3天；對(duì)照組攻毒后14天所有對(duì)照豬全部死亡，且攻毒后第1天至死亡時(shí)，均可經(jīng)鼻拭子檢測(cè)到排毒。

目前，我國臨床使用的PR滅活疫苗主要是PRV Ea株全病毒油乳劑滅活疫苗，但由于該疫苗不能區(qū)別免疫豬和野毒感染豬，在PR基因缺失活疫苗上市以來臨床上使用越來越少，近年來市場占有率已經(jīng)不足5%。

2 弱毒疫苗

PR弱毒疫苗是將分離到的野毒株經(jīng)非豬源細(xì)胞或雞胚反復(fù)傳代，或在高于一般培養(yǎng)溫度條件下加入致突變劑在細(xì)胞培養(yǎng)基上反復(fù)傳代而獲得。由于其特殊的自然基因缺失的特點(diǎn)，再加之免疫原性優(yōu)良，生產(chǎn)工藝簡便易行，在控制及凈化世界范圍PR的流行中起到至關(guān)重要的作用。目前，已經(jīng)報(bào)道的PR弱毒疫苗有Bartha-K61株、Bucharest株和JS-2012-F120株。其中Bartha-K61和Bucharest株弱毒疫苗應(yīng)用最為廣泛[17-18]。

Bartha株是由匈牙利科學(xué)家Bartha于1961年分離的強(qiáng)毒株經(jīng)雞胚細(xì)胞傳代致弱的[19]。致病力試驗(yàn)結(jié)果顯示，Bartha株對(duì)部分小動(dòng)物仍有一定的致病性，例如對(duì)小于4月齡的狗和貓以及小于2 kg家兔可引起50%發(fā)病死亡或麻痹；但對(duì)其他動(dòng)物的癢癥誘發(fā)力已消失。研究表明，該疫苗免疫后7 d就可產(chǎn)生抗體，5周可以達(dá)到高峰，且高水平的抗體可以維持長達(dá)2個(gè)月以上[20]。近年來，研究者用分子生物學(xué)技術(shù)分析該疫苗株的基因結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)該疫苗基因組中US區(qū)存在整個(gè)gE基因缺失，11 k和部分gI、28 k片段的缺失；在UL區(qū)gC基因信號(hào)肽存在點(diǎn)突變，UL21存在8個(gè)點(diǎn)突變[21-23]，UL10即gM基因也存在點(diǎn)突變[24]。由于gE、gC基因是PRV的重要毒力基因，因此，gE基因的缺失及gC基因的點(diǎn)突變可能導(dǎo)致該毒株的毒力下降。

Bucharest株弱毒疫苗是由羅馬尼亞的布加勒斯特獸醫(yī)所通過將PR強(qiáng)毒株在雞胚尿囊膜上培養(yǎng)至200 代后致弱而成。Bucharest株的基因特點(diǎn)同Bartha-K61株相似，也在US區(qū)絕大部分的gE基因發(fā)生缺失。該疫苗同樣存在一定的毒力，對(duì)小鼠、豚鼠和家兔有一定較強(qiáng)的毒力；在豬上僅適用于9 日齡以上的仔豬和妊娠2月的母豬[25]。

JS-2012-F120株弱毒疫苗是2017年由LIANG C等[26]將親本毒JS-2012株在vero細(xì)胞上處于40 ℃的條件下連續(xù)傳代120代研制成功的。利用PCR和序列分析發(fā)現(xiàn)，該疫苗株發(fā)現(xiàn)缺失了2 307 bp，這段缺失的范圍是從gE基因的487位核苷酸到US2基因的531位核苷酸之間。用105TCID50 JS-2012-F120接種2周齡的哺乳仔豬后發(fā)現(xiàn)，該疫苗株對(duì)仔豬無任何不良反應(yīng)，而且能同時(shí)保護(hù)免疫豬被經(jīng)典PRVSC株和變異PRVJS-2012株的攻擊。

Bartha-K61株疫苗是20世紀(jì)70年代末由中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所的袁慶志等[27]從匈牙利引進(jìn)并研制成的弱毒疫苗，目前在我國廣泛使用，是我國PR防控中應(yīng)用最多的疫苗[28]，對(duì)經(jīng)典PR強(qiáng)毒具有良好的免疫保護(hù)效果，但對(duì)我國2011年以來流行的PR強(qiáng)毒株，免疫保護(hù)效果不佳[10-12]。Bucharest疫苗是用雞胚培養(yǎng)后制成的凍干苗，目前在我國應(yīng)用范圍不廣。

3 基因工程缺失疫苗

PR基因工程缺失疫苗是利用基因工程操作技術(shù)將PRV基因中對(duì)生長非必需毒力基因或糖蛋白基因進(jìn)行切除或插入，使其徹底失活，但又保持PRV的免疫原性而獲得的疫苗。已經(jīng)報(bào)道的PRV基因缺失疫苗主要有3種：單基因缺失疫苗、雙基因缺失疫苗和多基因缺失疫苗。目前，我國市場上應(yīng)用的主要是HB-98株雙基因缺失疫苗（TK基因和gG基因）和剛上市的SA215株三基因缺失疫苗（gE基因、gI基因和TK基因）。

3.1 單基因缺失疫苗

PR單基因缺失疫苗其代表疫苗株是PRV BUK-d13株，該疫苗是20世紀(jì)80年代Kit等[29]將強(qiáng)毒株P(guān)RV-BUK TK中的基因缺失掉148 bp基因序列構(gòu)建所得。動(dòng)物試驗(yàn)證明該疫苗對(duì)豬安全，并能提供有效的保護(hù)，5～6周齡豬在免疫接種該疫苗后能產(chǎn)生中和抗體，在攻毒后可以表現(xiàn)出再次免疫應(yīng)答能力。在國內(nèi)，周復(fù)春[30]和王琴等[31]先后用分離的強(qiáng)毒株Ea株和Fa株構(gòu)建了TK基因缺失疫苗，動(dòng)物試驗(yàn)證明對(duì)小鼠有保護(hù)作用。但是該疫苗有個(gè)致命的缺點(diǎn)，即無法區(qū)別PR疫苗免疫接種豬和野毒感染豬，原因在于TK基因?qū)儆诿傅鞍谆?，不能在豬體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。

3.2 雙基因缺失疫苗

PR雙基因缺失疫苗相比PR單基因疫苗有很大優(yōu)點(diǎn)，由于缺少2個(gè)毒力基因，因而所構(gòu)建的疫苗毒力進(jìn)一步降低，對(duì)免疫動(dòng)物安全性也更高。另外，在非編碼必需糖蛋白的基因內(nèi)引入了一個(gè)新的缺失或插入一個(gè)報(bào)告基因，這樣得到的突變株疫苗免疫動(dòng)物后就不能產(chǎn)生被缺失的糖蛋白抗體，從而可以通過血清學(xué)方法將免疫豬與野毒感染豬相區(qū)分。1987年Kit S等[32]在PRV-d13株的基礎(chǔ)上，通過缺失gC基因序列的1 100 bp，構(gòu)建了PRV-delTK/gC雙基因缺失疫苗株，動(dòng)物試驗(yàn)證明該缺失疫苗接種動(dòng)物后不能產(chǎn)生抗gC的抗體。何啟蓋[33]用經(jīng)典強(qiáng)毒株Ea株構(gòu)建了TK和gG雙基因缺失株P(guān)RV HB-98株。該疫苗株動(dòng)物試驗(yàn)表明應(yīng)用比較安全，且免疫原性表現(xiàn)優(yōu)良，例如用病毒量為107.0 TCID50的PRV HB-98株接種BALB/c小鼠不會(huì)引起小鼠死亡，其毒力明顯低于Bartha-K61株。同樣，用病毒量為107.0TCID50PRV HB-98株接種妊娠50～60 d母豬和1日齡仔豬，母豬均能正常產(chǎn)仔，仔豬也未出現(xiàn)任何臨床癥狀；用病毒含量為105.0 TCID50的PRV HB-98株免疫妊娠50～60 d母豬和1日齡仔豬，分別在免疫后28，20 d，用107.0 TCID50 PRV-Ea株強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊，結(jié)果所有免疫豬均得到良好的保護(hù)，未表現(xiàn)異常狀況[34]。該疫苗株于2006年獲得國家新獸藥注冊(cè)證書和生產(chǎn)許可證[35]，目前在我國應(yīng)用較為廣泛。近年，有學(xué)者用分離的PRV變異株構(gòu)建PR雙基因缺失疫苗在動(dòng)物試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好免疫原性，例如2014年Wang等[16]用PRV變異株TJ株構(gòu)建的rPRVTJ-delgE疫苗以103，104和105TCID50 的劑量分別免疫6周齡仔豬，1 周后用TJ株攻擊，結(jié)果所有免疫豬均未表現(xiàn)出任何臨床癥狀。2016年Tong W等[36]用分離的變異株P(guān)RV JS-2012株構(gòu)建了gE和gI雙基因缺失苗株P(guān)RV-JS-2012-△gE/gI，用病毒含量為105.0TCID50的該疫苗株鼻內(nèi)接種2周齡小豬，4周后同樣用病毒含量為105.0TCID50PRV經(jīng)典強(qiáng)毒株SC株和PRV親本變異株JS-2012株鼻內(nèi)攻擊免疫豬，結(jié)果免疫豬均得到100%的保護(hù)。

3.3 三基因缺失疫苗

2003年陳陸[37]將PRV-Fa株通過酶切、同源重組等基因操作方法，去掉其主要毒力基因gE、gI和TK，構(gòu)建了獨(dú)特的三基因缺失株SA215。該疫苗已經(jīng)獲得國家二類新獸藥證書，也是第一個(gè)在我國注冊(cè)上市的PRV三基因缺失疫苗。該疫苗臨床應(yīng)用證明對(duì)1日齡仔豬、妊娠60 d的母豬、牛、羊以及家兔均安全，無任何反應(yīng)，接種動(dòng)物不排毒。用病毒含量為105PFU的SA215株疫苗肌注免疫的3周齡豬，免疫對(duì)照組用Bartha株，4周后再用病毒含量為107PFU PRV-Fa強(qiáng)毒株鼻內(nèi)攻擊所有免疫豬，攻毒后所有攻毒試驗(yàn)豬均出現(xiàn)一過性發(fā)熱期、增重受阻和散毒，但免疫SA215株疫苗的發(fā)熱期、增重受阻天數(shù)和散毒的滴度均低于Bartha株疫苗免疫豬[38]。2015年Zhang C L等[39]利用BAC技術(shù)將分離的變異PRV HN1201株缺失了TK、gE和gI 3個(gè)基因，構(gòu)建了三基因缺失疫苗vPRV HN1201TK-/gE-/gI-株。用劑量為107.0 TCID50 的該疫苗經(jīng)滴鼻免疫9日齡哺乳仔豬，4周后用同樣劑量的親本毒變異PRV HN1201株鼻內(nèi)攻擊，結(jié)果免疫組的豬中只有2/5的豬出現(xiàn)一過性的體溫增高，再無其他癥狀，且攻毒14 d后免疫豬的PRV gE抗體均為陰性。胡睿銘[40]利用基因同源重組技術(shù)將變異PRV SMX/2012株缺失了TK、gE和gI基因后構(gòu)建了基于變異株的三基因缺失疫苗rSMX△gI/gE△TK株，該疫苗安全性較高，使用劑量為107.0 TCID50接種小鼠和家兔，均未有不良反應(yīng)。用劑量為108.0 TCID50接種綿羊，同樣未有任何臨床癥狀。同樣，用劑量為108.0 TCID50經(jīng)滴鼻或肌注接種1日齡仔豬和妊娠母豬，均未有任何不良反應(yīng)，且同窩或同群豬未檢測(cè)到PRV抗體。該疫苗的免疫效力明顯優(yōu)于Bartha-K61株，例如用該疫苗劑量為106.0 TCID50 肌注免疫21日齡的仔豬，對(duì)照組用劑量為106.3 TCID50 Bartha-K61株免疫，免疫后28 d用107.0 TCID50劑量的親本毒PRV SMX/2012滴鼻攻擊所有免疫豬。結(jié)果顯示，rSMX△gI/gE△TK免疫豬僅出現(xiàn)一過性體溫略升高，沒有超過41 ℃，攻毒后3 d的排毒峰值為103.3TCID50，而Bartha-K61株免疫豬攻毒后體溫升高至41 ℃以上，且有嚴(yán)重的呼吸癥狀，3/5的豬只出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，且持續(xù)了4～6 d，雖未造成死亡，但也失去飼養(yǎng)價(jià)值。Cong等[41]在變異PRV雙基因缺失疫苗rPRVTJ-delgE/gI株的基礎(chǔ)上刪除了TK基因，構(gòu)建了rPRVTJ-delgE/gI/TK。該疫苗株相對(duì)于其親本rPRVTJ-delgE/gI株安全性有了很大的提升，例如rPRVTJ-delgE/gI/TK株對(duì)小鼠的LD50高于106.0 TCID50，而rPRVTJ-delgE/gI株對(duì)小鼠的LD50為104.13TCID50；用105.0 TCID50的rPRVTJ-delgE/gI/TK株疫苗和rPRVTJ-delgE/gI株分別接種18月齡的綿羊，結(jié)果rPRVTJ-delgE/gI接種綿羊全部死亡，而rPRVTJ-delgE/gI/TK接種羊全部存活，且未表現(xiàn)出任何臨床癥狀。

4 結(jié)論與展望

PR是威脅世界養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一，該病在傳入我國后，曾經(jīng)給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，但在以Bartha-K61株為主的基因缺失疫苗得到廣泛應(yīng)用以后，該病在我國得到很好的控制，許多豬場還完成了偽狂犬野毒的凈化。然而，2011年以來豬偽狂犬病的重新流行和反彈，使我國養(yǎng)豬業(yè)再次蒙受嚴(yán)重的損失。研究發(fā)現(xiàn)，PRV流行株基因組已經(jīng)發(fā)生變異，現(xiàn)有商品化疫苗不能完全保護(hù)免疫豬抵抗新的PRV流行株的攻擊，因此，如何防控PR的發(fā)生和流行，研究開發(fā)針對(duì)PRV流行株的偽狂犬病疫苗，迫在眉睫。令人欣喜的是，近兩年來我國獸醫(yī)科研工作者已經(jīng)在預(yù)防PR疾病和凈化PR方面取得重要進(jìn)展，新的PR流行變異株基因缺失疫苗也相繼被研究成功，雖然新疫苗距離臨床使用仍需一段時(shí)間，但相信在廣大獸醫(yī)研究工作者的共同努力下，新的PR流行株疫苗將在PR預(yù)防、控制和凈化過程中發(fā)揮重要作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙德明， 張仲秋， 沈建忠. 豬病學(xué) [M]. 9版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社， 2009：647-468.

[2]童光志， 陳煥春. 偽狂犬病流行現(xiàn)狀及我國應(yīng)采取的防制措施[J]. 中國獸藥學(xué)報(bào)， 1999（19）： 1-2.

[3]萬遂如. 當(dāng)前我國豬偽狂犬病流行情況與防制對(duì)策[J]. 今日養(yǎng)豬業(yè)， 2005（1）： 32-33.

[4]周緒斌， DANIEL T G， 李國友， 等. 通過檢測(cè)淘汰野毒陽性公豬并強(qiáng)化疫苗免疫成功凈化豬場偽狂犬病[J]. 今日養(yǎng)豬業(yè)， 2007（5）： 34-37.

[5]薛雙， 馮艷， 周坤， 等. 豬偽狂犬病在我國的流行現(xiàn)狀[J]. 中國豬業(yè)， 2012（12）： 41-42.

[6]初小輝. 吉林省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查與防控措施的研究及應(yīng)用[D]. 長春： 吉林大學(xué)， 2011： 23-25.

[7]WU R， BAI C Y， SUN J Z，et al. Emergence of virulent pseudorabies virus infection in Northern China[J]. Journal of veterinary science， 2013， 14 （3） ：363-365.

[8]彭金美， 安同慶， 趙鴻遠(yuǎn)， 等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2013（1）： 1-4.

[9]孫惠玲， 李桂萍， 白佳樺， 等. 偽狂犬病病毒感染抗體監(jiān)測(cè)及偽狂犬病流行狀況分析[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2013（12）： 11-13.

[10]WANG C H， YUAN J， QIN H Y， et al. A novel gE-deleted pseudorabies virus （PRV） provides rapid and complete protection from lethal challenge with the PRV variant emerging in Bartha-K61-vaccinated swine population in China[J]. Vaccine， 2014， 32： 3379-3385.

[11]GU Z Q， HOU C C， SUN H F， et al. Emergence of highly virulent pseudorabies virus in southern China[J]. Canadian journal of veterinary research， 2015， 79（3）：221-228.

[12]YANG Q Y， SUN Z， TAN F F， et al. Pathogenicity of a currently circulating Chinese variant pseudorabies virus in pigs[J]. World journal of virology， 2016，5（1）： 23-30.

[13]陳煥春， 方六榮， 何啟蓋， 等. 豬偽狂犬病病毒鄂A株的分離鑒定[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 1998， 29（2）： 97-104.

[14]陳煥春， 金梅林， 何啟蓋， 等. 豬偽狂犬病油乳劑滅活疫苗的制備及安全性與免疫性試驗(yàn)[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2001， 32（1）： 44-51.

[15]GU Z Q， DONG J， WANG J C， et al. A novel inactivated gE/gI deleted pseudorabies virus （PRV） vaccine completely protects pigs from an emerged variant PRV challenge[J]. Virus research， 2014， 195： 57-63.

[16]WANG C H， YUAN J， QIN H Y， et al. A novel gE-deleted pseudorabies virus （PRV） provides rapid and complete protection from lethal challenge with the PRV variant emerging in Bartha-K61-vaccinated swine population in China[J]. Vaccine， 2014， 32： 3379-3385.

[17]ZPARA M L， AFILRI Y R， PARSONS L， et al. A wide extent of inter-strain diversity in virulent and vaccine strains of alphaherpesviruses[J]. Plos pathogens， 2011， 7（10）： e1002282.

[18]POMORSKAM L M， MARKOWSKADANIEL I， PEJSAK Z. Evaluation of humoral and antigen-specific T-cell responses after vaccination of pigs against pseudorabies in the presence of maternal antibodies[J]. Veterinary microbiology， 2010， 144（3/4）： 450-454.

[19]BARTHA A. Aujeszky memorial lecture[J].Actaveterinaria hungaria，1994， 42（2/3）： 149-152.

[20]吳文福， 游啟有， 楊傲冰， 等. 偽狂犬病活疫苗免疫豬血清抗體消長規(guī)律的研究[J]. 廣東畜牧獸醫(yī)科技， 2006， 31（6） ： 39 -41.

[21]LOMNICZI B， WATANABE S， BENPORAT T， et al. Genome location and identification of functions defective in the Bartha vaccine strain of pseudorabies virus[J]. Journal of virology， 1987， 61（3）： 796-801.

[22]PETROVSKIS E A， POST L E. A small open reading frame in pseudorabies virus and implications for evolutionary relationships between herpesviruses[J]. Virology， 1987， 159（1）： 193-195.

[23]METTENLEITER T C， ZSAK L， KAPLAN A S， et al. Role of a structural glycoprotein of pseudorabies in virus virulence[J]. Journal of virology， 1987， 61（12）： 4030-4032.

[24]PETROVSKIS E A， TIMMINS J G， GIERMAN T M， et al. Deletions in vaccine strains of pseudorabies virus and their effect on synthesis of glycoprotein gp63[J]. Journal of virology， 1986， 60（3）：1166-1169.

[25]KIT M， KIT S. Modified live pseudorabies： 4154496 [P]. 1985-01-01.

[26]LIANG C， TONG W， ZHENG H， et al. A high-temperature passaging attenuated Pseudorabies vaccine protectspiglets completely against emerging PRV variant[J]. Research in veterinary science， 2017， 112 ： 109-115.

[27]袁慶志， 吳裕祥， 李亞香， 等. 偽狂犬病免疫的研究Ⅰ、偽狂犬病弱毒疫苗的研究[J].家畜傳染病， 1983（1）： 1-6.

[28]薛爽. 豬偽狂犬基因缺失疫苗的研究進(jìn)展[J]. 湖南畜牧獸醫(yī)， 2016（4）： 47-49.

[29]KIT S， KIT M， PIRTLE E C. Attenuated properties of thymidine kinase-negative deletion mutant of pseudorabies virus[J]. American journal of veterinary research， 1985， 46（6）： 1359-1367.

[30]周復(fù)春. 偽狂犬病病毒鄂A株基因缺失突變株的構(gòu)建[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，1998.

[31]王琴， 郭萬柱， 婁高明， 等. 偽狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的構(gòu)建[J].病毒學(xué)報(bào)，1996，12（4） ： 348-354.

[32]KIT S， SHEPPARD M， ICHIMURA H， et al. Second-generation pseudorabies virus vaccine with deletions in thymidine kinase and glycoprotein genes[J]. American journal of veterinary research， 1987， 48（5）： 780-793.

[33]何啟蓋. 豬偽狂犬基因缺失疫苗的研究[D]. 武漢： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2000.

[34]何啟蓋， 陳煥春， 方六榮， 等. 豬偽狂犬病病毒雙基因缺失突變株（HB-98株）安全性、穩(wěn)定性和免疫原性測(cè)定[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2006， 26（2）： 165-168.

[35]湯細(xì)彪， 劉蜂， 諶磊， 等. 豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）的分子特性與免疫效果分析[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊， 2011（6）： 42-43.

[36]TONG W， LI G， LIANG C， et al. A live， attenuated pseudorabies virus strain JS-2012 deleted for gE/gI protects against both classical and emerging strains[J]. Antiviral research， 2016， 130： 110-117.

[37]陳陸. 偽狂犬病基因缺失疫苗SA215研究[D]. 成都： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2003.

[38]陳陸， 郭萬柱， 徐志文， 等.偽狂犬病基因缺失疫苗株（SA215）生物學(xué)特性研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2005， 36（3）： 278-282.

[39]ZHANG C L， GUO L， JIA X， et al. Construction of a triple gene-deleted Chinese Pseudorabies virus variant and its efficacy study as a vaccine candidate on suckling piglets[J]. Vaccine， 2015， 33（21）：2432-2437.

[40]胡睿銘. 偽狂犬病病毒變異株基因工程疫苗研究[D]. 武漢： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2016.

[41]CONG X， LEI J L， XIA S L， et al. Pathogenicity and immunogenicity of a gE/gI/TK gene-deleted pseudorabies virus variant in susceptible animals[J]. Veterinary microbiology， 2016， 182： 170-177.