任 歡，韋海忠，周嘉玲，陳律呈，劉澤偉

(臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318020)

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切割方式和滅菌時間對野生百合生長的影響

任 歡，韋海忠*，周嘉玲，陳律呈，劉澤偉

(臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318020)

野生百合品種相思在不同切割方式及升汞不同滅菌時間處理下，在MS培養(yǎng)基中的生長觀察研究發(fā)現(xiàn)，在0.5 cm × 0.5 cm的切割方式和在0.2%升汞中滅菌4 min+0.1%升汞中滅菌4 min的處理方案為最佳。

野生百合； MS培養(yǎng)基； 升汞滅菌時間； 切割方式； 生長

百合是多年生球根花卉，其種球含豐富淀粉質(zhì)，部分品種可作蔬菜食用；還可制成百合干、百合粉，在國際市場上價格很高，是中成藥中常用藥材。百合莖直立，不分枝，草綠色，莖稈基部帶紅色或紫褐色斑點(diǎn)；地下具鱗莖，由闊卵形或披針形、白色或淡黃色、直徑6～8 cm的肉質(zhì)鱗片抱合成球形，外有膜質(zhì)層。多數(shù)須根生于球基部。單葉，互生，狹線形，無葉柄，直接包生于莖稈上，葉脈平行。有的品種在葉腋間生出紫色或綠色顆粒狀珠芽，其珠芽可繁殖成小植株；花著生于莖稈頂端，呈總狀花序，簇生或單生，花冠較大，花筒較長，呈漏斗形喇叭狀，六裂無萼片，因莖稈纖細(xì)，花朵大，開放時常下垂或平伸；花色因品種不同而色彩多樣。

百合繁殖主要用子鱗莖繁殖，采收時選個大、鱗片抱合緊密、色白形正、無損傷、無病蟲的子鱗莖作種。在田間種植時需要大量的子鱗莖，再加上田間種植所需的人力、財力、時間，以及相對較復(fù)雜的田間管理，造成種植成本大大增加，種質(zhì)資源浪費(fèi)，使生產(chǎn)者失去對種植百合的信心。百合的組織培養(yǎng)育苗具有繁殖周期短、繁殖系數(shù)高、成苗快、階段發(fā)育快和保持母本優(yōu)良性狀的特點(diǎn)。通過組培的方法可對野生百合進(jìn)行種質(zhì)資源的提純、復(fù)壯及保存，研究篩選出最佳升汞處理時間和切割方式等，為百合苗繁育及推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料為浙江省臺州市椒江區(qū)百合基地提供的野生百合品種相思。挑選組織培養(yǎng)用的母本百合時應(yīng)注意要選擇健壯無病鱗莖，所有材料的生長勢和大小一致。試驗地點(diǎn)選擇在臺州科技職業(yè)學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院的植物組培中心進(jìn)行。

1.2 處理設(shè)計

將野生百合鱗片用肥皂水沖刷干凈，采用0.6%GA3對野生百合進(jìn)行25 min的浸泡以打破休眠，再用70%的酒精進(jìn)行初步滅菌，之后用無菌水洗凈，然后在0.2%的升汞加吐溫溶液中搖晃殺菌，用無菌水沖洗干凈，再用0.1%的升汞加吐溫溶液進(jìn)行滅菌，用無菌水沖洗干凈，以無菌濾紙吸去鱗片表面水分。

外植體接種時，進(jìn)行3種切割方式處理，分別是在與培養(yǎng)基接觸的百合部位進(jìn)行背部劃傷(A)、切割成0.5 cm×0.5 cm小塊(B)和不進(jìn)行切割(CK)，切割處理后在陰涼無菌處晾干。設(shè)3個滅菌時間處理，分別為3 min(Ⅰ)、4 min(Ⅱ)和5 min(Ⅲ)。3種不同切割方式以及3個不同滅菌時間共9個處理。外植體接種到相同濃度激素培養(yǎng)基上培養(yǎng)，室溫控制在(23±2)℃，光照為2 000 lx，光照時數(shù)為12 h/d，記錄并觀察其生長情況。

試驗設(shè)計各個試驗組合的樣本數(shù)為30瓶，大樣本為180瓶，進(jìn)行隨機(jī)的組合擺放，以降低試驗的偶然性。

1.3 調(diào)查及數(shù)據(jù)處理

各處理百合在接種處理完畢后進(jìn)行登記，并進(jìn)行隨機(jī)擺放，每周觀察記錄各樣本的污染數(shù)、株高、葉片數(shù)、葉片厚度、根長，并分別進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對百合生長的影響

2.1.1 株高

由表1可見，各處理對百合株高影響效果均較好。其中以處理BⅡ、BⅢ、AⅡ為較高，CKⅠ、CKⅢ、CKⅡ的株高為較低。處理BⅠ、AⅠ分別比CKⅠ高7.8和5.5 cm；處理BⅡ、AⅡ分別比CKⅡ高13.9和7.5 cm；處理BⅢ、AⅢ分別比CKⅢ高11.0和4.6 cm。結(jié)果表明，試驗組合BⅠ、BⅡ、BⅢ的株高最明顯，其中以BⅡ的效果對野生百合株高的影響最明顯。

表1 各處理對百合生長的影響

2.1.2 葉片數(shù)

由表1可知，BⅡ葉片數(shù)最多，達(dá)21.2張，而CKⅢ的葉片數(shù)為最少，僅4.2張，差異明顯。BⅡ、AⅡ的葉片數(shù)分別為21.2和16.4張，比對照CKⅡ分別多出14.4和9.6張；BⅢ、AⅢ的葉片數(shù)分別比CKⅢ的葉片數(shù)要多出13.2和8.0張；BⅠ、AⅠ分別比CKⅠ的葉片數(shù)要多出15.2和10.2張。綜合得到，處理組合BⅠ、BⅡ、BⅢ對野生百合葉片的生長影響效果較好，其中以BⅡ最佳。

2.1.3 葉片厚度

由表1表明，所有處理組合中，BⅠ的葉片厚度0.7 mm，CKⅠ、AⅠ、CKⅢ、AⅢ的葉片厚度均為0.5 mm。BⅡ、AⅡ的葉片厚度分別為0.9、0.6 mm。從數(shù)據(jù)中分析得到，處理組合BⅢ、BⅡ、BⅠ對百合葉片的生長影響效果較好，尤其是BⅡ處理效果對相思百合最佳。

2.1.4 根系生長

由表1得出，所有處理中，BⅡ根長為6.1 cm，大大超出其他所有處理組合；AⅢ根長僅為2.0 cm。AⅠ、BⅠ與CKⅠ的根長分別相差0、2.6 cm；AⅡ、BⅡ與CKⅡ分別相差0.4、2.9 cm；所有處理組合中最差的為CKⅢ，僅1.9 cm，分別比AⅢ、BⅢ相差0.1和2.6 cm。由此說明，在升汞滅菌時間4 min時，BⅢ、BⅡ、BⅠ以0.5 cm×0.5 cm的切割方式效果最優(yōu)，其中又以BⅡ?qū)σ吧俸细L的效果最佳。

2.2 對百合污染率的影響

由表2可見，所有處理組合中，BⅡ污染率最低，僅為3瓶；最高的是CKⅠ，達(dá)15瓶。AⅠ、BⅠ污染瓶數(shù)分別比CKⅠ污染瓶數(shù)少4和7瓶；AⅡ、BⅡ分別比CKⅡ少2和5瓶；AⅢ、BⅢ分別比CKⅢ少2和4瓶；綜合來看，處理組合BⅡ的污染率最低，效果最佳。

表2 各處理組合對相思百合污染率的影響

3 小結(jié)與討論

通過對不同切割方式和升汞滅菌時間對野生百合生長的影響試驗得出，將百合外植體切割成0.5 cm×0.5 cm小塊，用0.2%升汞處理4 min，并在0.1%升汞浸泡4 min的處理下，相思百合成活率最高，污染率最低，百合組培苗的株高、葉片數(shù)、葉片厚度、根長的效果最佳。這主要是因為將百合鱗莖切割為小塊能使百合傷口經(jīng)脫分化形成愈傷組織，從而使組培百合小苗能更好地進(jìn)行分化和生根。野生百合外植體的滅菌在初步清洗干凈后再進(jìn)行深一步的滅菌，先用0.2%升汞溶液加植物清潔劑進(jìn)行滅菌，期間4 min不停搖晃的目的是讓鱗莖充分滅菌；其次是用0.1%升汞溶液進(jìn)行滅菌，采用同樣的滅菌方式，滅菌時間定為4 min，是因為在試驗過程中低于和高于4 min的試驗的結(jié)果顯示其污染量高。采用不同切割方式和升汞的滅菌時間相結(jié)合成的試驗方案使百合在組織培養(yǎng)過程中在產(chǎn)量和成本、時間上有明顯的提升和縮短。

但組織培養(yǎng)常會因為百合的外植體處理不干凈致使污染狀況相對較嚴(yán)重。因此在本試驗中外植體的處理過程為重中之重，在外植體處理過程中，要確保處理過程中的細(xì)節(jié)，不能出一點(diǎn)差錯。最好的方法是將百合表面的污垢處理干凈，用75%的酒精浸泡5 s，再用無菌水洗凈，用升汞和植物清潔劑滅菌，最后用無菌水洗凈備用。本試驗中，切割方式與浸泡時間對其生長有很大影響。因此，組培百合鱗莖時，除要保證適當(dāng)?shù)臏囟?、水分、光照外，還應(yīng)采取相應(yīng)的滅菌方式和GA3的浸泡時間，以便提高百合分化和生根的水平。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

2017-03-06

浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新項目(2016R463001)

任 歡，園藝專業(yè)在校學(xué)生。

韋海忠(1968—)，浙江東陽人，副教授，碩士，研究方向為園藝作物設(shè)施栽培與生理，E-mail：hzwei910@126.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170745

S681

B

0528-9017(2017)07-1235-02

文獻(xiàn)著錄格式：任歡，韋海忠，周嘉玲，等. 切割方式和滅菌時間對野生百合生長的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(7)：1235-1236，1241.