王樂,李歡,李嘉豪,陳暄,黎星輝,孫康
南京農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉科學(xué)研究所,江蘇 南京 210095
EGCG納米硒的穩(wěn)定性及其對硒吸收利用的影響
王樂,李歡,李嘉豪,陳暄,黎星輝,孫康*
南京農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉科學(xué)研究所,江蘇 南京 210095
使用維生素C(Vitamin C,Vc)作為氧化還原劑和(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)作為分散劑,成功制備了納米硒(EGCG-SeNPs)。使用透射電子顯微鏡(TEM)和激光粒度分析儀電動電勢儀(Zetasizer)測定的 EGCG-SeNPs是平均直徑為(35±0.12) nm、Zeta電位為-0.05 mV的球形顆粒。EGCG-SeNPs在 pH1.0的強(qiáng)酸或70℃高溫環(huán)境下發(fā)生聚集,其顆粒大小增加大約10倍。而且,EGCG-SeNPs中的EGCG作為分散劑具有良好的穩(wěn)定性。通過分別灌胃25、50、100 μg·kg-1(以含Se量計(jì)算)的亞硒酸鈉和EGCG-SeNPs發(fā)現(xiàn),肝臟和腎臟中的硒含量在 50、100 μg·kg-1的硒處理后均顯著增加;在血清、肝臟和腎臟中,所有處理組的谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)活性均顯著增加,且具有劑量依賴效應(yīng)。然而,在相同劑量的亞硒酸鈉和EGCG-SeNPs處理組中,硒含量和 GPx活性之間沒有顯著差異。因此可以得出,Vc作為氧化還原劑制備的EGCG-SeNPs可能具有和亞硒酸鈉相似的生物利用度。
(-)-表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯;硒;納米顆粒;生物利用度;谷胱甘肽過氧化物酶活性
茶是由茶樹(Camellia sinensis (L.) O.Kuntze)的葉片制成的,并且在很久之前就被認(rèn)為是有益健康的飲料[1]。茶的健康作用主要來自于它的兒茶素,這是一組包含了(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、(-)-表沒食子兒茶素、(-)-表兒茶素沒食子酸酯、(-)-表兒茶酸、(+)-沒食子兒茶素和(+)-兒茶素的多酚物質(zhì)[2]。茶多酚對癌癥等多種病癥都有防治功能[3]。兒茶素在80℃和弱堿性條件下快速地差向異構(gòu)化[4]。其中,EGCG已經(jīng)廣泛應(yīng)用于納米顆粒領(lǐng)域,例如被包裹在脂質(zhì)納米顆粒[1]、共軛金納米顆粒[5]或者殼聚糖-聚天冬氨酸離子作用納米顆粒[6]中。
硒(Se)是一種微量元素,具有降低癌癥發(fā)病率[7]、預(yù)防心血管疾病[8]、治療肌肉紊亂[9]和其他功能[10],已經(jīng)被認(rèn)為與人類的許多健康益處相關(guān)。硒在多種抗氧化酶的位點(diǎn)起催化作用,例如硫氧還蛋白還原酶和谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)[11]。硒元素存在于植物和動物的組織中,主要有硒酸鹽、硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸的 3種形式[12]。無論是低劑量的硒還是高劑量的硒,硒主要在肝臟和腎臟中積累[13]。谷胱甘肽過氧化物酶家族包含:普遍存在于各種細(xì)胞質(zhì)中,尤其是紅細(xì)胞、肝臟、腎臟和肺中高表達(dá)的 GPx1,存在于胃腸的上皮細(xì)胞和肝臟中的 GPx2,存在于血漿中的GPx3,存在于睪丸細(xì)胞內(nèi)的GPx4和存在于嗅覺上皮細(xì)胞及胚胎中的GPx6。在谷胱甘肽過氧化物酶家族中,除GPx4和GPx6外,其余GPx蛋白活力對硒水平最為敏感,能夠作為機(jī)體內(nèi)硒水平的指標(biāo)[14]。
通常,零價(jià)態(tài)的硒是以黑色或灰色形式存在的,沒有生物活性。Zhang等[15]以亞硒酸鈉為原料,加入蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白(BSA)為分散劑,谷胱甘肽(GSH)為還原劑,利用氧化還原體系在弱堿性條件下人工合成了零價(jià)的紅色元素硒納米顆粒(SeNPs)。SeNPs是一種紅色元素膠體,可以保護(hù)乙醇減少氧化應(yīng)激[16]、減少慢性炎癥性關(guān)節(jié)炎[17]、減輕高血糖和高脂血癥[18]等。此外,SeNPs能顯著降低順鉑對抗氧化活性的抑制作用[19],并且對抗氧化性具有提高作用[20]。同時(shí),已有研究報(bào)道,SeNPs和亞硒酸鹽或半乙基硒代半胱氨酸具有相同的生物利用度,但毒性相對更低[15,21]。納米硒不僅能夠被分散,也可以被聚乙二醇[22]、多聚糖[23]、褪黑素[24]和三磷酸腺苷[25]等物質(zhì)分散。盡管這些物質(zhì)能夠分散納米硒,除BSA納米硒外,其余均沒有比較硒的生物利用度。然而,最近有文獻(xiàn)報(bào)道聚乙酸/羥基乙酸共聚物包裹的納米顆粒的分散劑會在胃酸中降解,而導(dǎo)致納米顆粒的口服生物利用度降低[26]。因此,評價(jià)新制備納米硒顆粒的生物利用度很重要。
在調(diào)節(jié)涉及結(jié)腸癌發(fā)生的遺傳和表觀遺傳生物標(biāo)志物的方式中,硒和綠茶的組合在抑制結(jié)腸直腸腫瘤形成方面比單獨(dú)使用硒更有效[27]。兒茶素能夠作為分散劑制備納米銀[28]、納米金[29]和納米碳管[30]。本研究團(tuán)隊(duì)曾經(jīng)報(bào)道過 EGCG能夠分散的納米硒,由于該納米硒在擬胃酸環(huán)境中大量聚沉,形成微米級顆粒,導(dǎo)致其口服生物利用度下降。本研究改進(jìn)了 EGCG分散的 SeNPs的制備條件,并對EGCG納米硒的穩(wěn)定性及其對硒吸收利用的影響進(jìn)行了評價(jià)。
表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)(純度大于 99%)購買于杭州怡倍嘉茶葉發(fā)展公司。亞硒酸鈉、Vc、還原型輔酶Ⅱ(NADPH)、甲酸、純乙腈、谷胱甘肽還原酶購買于Sigma-Aldrich化學(xué)公司。還原型谷胱甘肽(GSH)購于背景索萊寶生物有限公司。所有試劑都為分析純試劑。
將適量EGCG溶于純水中攪拌5 min。將適量Vc加入EGCG溶液中,同樣攪拌5 min。然后將亞硒酸鈉溶液(Se含量為10 mg·mL-1)加入到前溶液中并攪拌。Se、Vc和EGCG的終濃度分別為 5、25、20 mmol·L-1。將溶液立即調(diào)節(jié)至pH 2.5,幾分鐘后調(diào)節(jié)至pH 8.5。最終的亮紅色溶液就是EGCG-SeNPs溶膠,4℃保存待用。顆粒的形態(tài)和大小用透射電鏡(TEM,H-7650,日立,日本)依照 Sanna等[31]的方法進(jìn)行檢測,Zeta電位用激光粒度分析儀電動電勢儀(Malvern Zetasizer Nano ZS,英國)在室溫25℃下測定。
用超高效液相儀(Waters,美國)分別測定剛制備的EGCG-SeNPs和放置于4℃冰箱中1個月的 EGCG-SeNPs(OM-EGCG-SeNPs)中的EGCG含量。標(biāo)樣的含量依次為2、10、20、100、200 mg·mL-1。將 EGCG 納米硒離心(20 000 g,4℃)30 min,將上清液稀釋1 000倍,然后通過 0.22 μm的膜。用 2%的甲酸和純乙腈進(jìn)行梯度洗脫:0~2 min,5%乙腈;3~5 min,5%乙腈;6~6.5 min,50%乙腈;6.6~8 min,5%乙腈;進(jìn)樣速度為0.350 mL·min-1,進(jìn)樣量為2 μL,檢測波長 280 nm。
在制備EGCG-SeNPs時(shí),在將pH調(diào)節(jié)為2.5后,將部分EGCG納米硒倒出,分別調(diào)節(jié)至pH1.0和pH5.0,剩下的依然調(diào)節(jié)至pH8.5。將一部分 pH8.5的樣品留存待測,另一部分pH8.5的EGCG-SeNPs分別在70℃加熱0、3、12 h,所有樣品在4℃保存待用。用TEM表征不同樣品的形態(tài)和大小;用光學(xué)圖像識別EGCG-SeNPs的顏色變化;用多功能酶標(biāo)儀(Cytation 3,Bio-Tex,意大利)測定不同條件下制備的 EGCG-SeNPs在不同波長下的吸收值。
雄性的 ICR小鼠(18~22 g)購于常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動物有限公司。缺硒飼料購買于南通特洛菲飼料科技有限公司。小鼠飼養(yǎng)在塑料籠中,塑料籠置于濕度為(50±10)%、溫度(24±1)℃和 12 h光/暗循環(huán)的房間內(nèi),小鼠可以自由獲得食物和水。喂食42只雄性ICR小鼠缺硒飼料5周,以建立缺硒小鼠模型。將缺硒小鼠隨機(jī)分為 7組:(1)對照組(CK)灌胃鹽水;(2)Se處理組灌胃含 25、50、100 μg·kg-1(以含 Se量計(jì)算)的亞硒酸鈉溶液;(3)EGCG-SeNPs處理組灌胃給予含25、50、100 μg·kg-1(以含 Se 量計(jì)算)的 EGCG-SeNPs膠體。所有小鼠連續(xù)灌胃 7 d,并在最后一天的24 h后眼眶靜脈取血、脫頸處死,備用。
將從眼眶中取出的血液經(jīng)離心(10 000 g,4℃,10 min),取出上清血清,并將血清和血細(xì)胞分開單獨(dú)保存。解剖小鼠獲得肝臟和腎臟,并在冰的生理鹽水中洗凈。所有樣品保存在-20℃用作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)分析。用冰冷的磷酸鹽緩沖液(PBS,0.15mol·L-1,pH7.2,1 mmol·L-1EDTA·Na2)將肝臟和腎臟的組織樣品進(jìn)行勻漿,然后將勻漿液離心(12 000 g,4℃)15 min,并取出干凈的上清液儲存在-20℃用作生化分析。采用 Bradford[32]的方法進(jìn)行蛋白含量的測定,采用Smith等[33]的方法進(jìn)行 GPx活性的測定。通過改進(jìn) Zinn等[34]的方法,使用微波消解系統(tǒng)(Ethos T,Milestone,意大利)和電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(Optima 2100DV,Perkin Elmer,美國)進(jìn)行硒含量的測定。
使用Graphpad Prism 5.0軟件分析數(shù)據(jù),并以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用ANOVA進(jìn)行單因素方差分析。
TEM 圖顯示,新制備的 EGCG-SeNPs,其平均直徑約(35±0.12) nm(圖 1-a)。EGCG-SeNPs溶液的 Zeta電位為-0.05 mV(圖 1-b),這表明分布在 EGCG溶液中的SeNPs傾向于相互排斥而不聚集。UPLC的結(jié)果顯示 OM-EGCG-SeNPs和 EGCG-SeNPs中的 EGCG含量變化很小(圖 1-c和圖 1-d)。OM-EGCG-SeNP中的 EGCG的含量為(9.82±0.11) mg·mL-1,而 EGCG-SeNPs中的為(10.00±0.04) mg·mL-1。在 4℃冰箱中放置 1 個月后,EGCG-SeNPs中的 EGCG含量并沒有發(fā)生顯著降低。該結(jié)果表明,在先酸后堿的情況下,EGCG充當(dāng)穩(wěn)定劑而不是氧化劑,以維持SeNPs的穩(wěn)定性。
TEM圖顯示,在不同 pH下制備的EGCG-SeNPs具有不同的形狀和大?。▓D2-a、圖2-b和圖2-c)。在pH1.0時(shí),EGCG納米硒是絲狀的,直徑在300~400 nm;在pH5.0時(shí),EGCG納米硒是長方形的,直徑在 200~250 nm;在 pH8.5時(shí),EGCG納米硒是六邊形,近似于球形,直徑約 40 nm。此外,隨著 pH值的降低,紅色也逐漸變淺(圖 2-d)。EGCG-SeNPs的吸光值在不同pH條件下相差較大。EGCG-SeNPs在pH8.5條件下的吸光值遠(yuǎn)高于pH1.0和pH5.0兩種條件(圖2-e)。
圖1 EGCG-SeNPs的特征Fig. 1 Characteristics of EGCG-SeNPs
圖2 EGCG-SeNPs的pH特性Fig. 2 pH property of EGCG-SeNPs
在pH8.5條件下,用70℃分別加熱0、3、12 h后,EGCG-SeNPs也呈現(xiàn)了不同的形態(tài)和大小。(圖 3-a、圖 3-b和圖 3-c)。在 75℃加熱 0 h時(shí)(即不加熱),EGCG納米硒是六邊形的,近似于球形,直徑約在40 nm;在75℃加熱3 h時(shí),EGCG納米硒富集成了模糊的球形,直徑約在200 nm;在75℃加熱12 h時(shí),EGCG納米硒繼續(xù)富集成較為清晰的球形,直徑約在 400 nm。這表明,持續(xù)高溫加熱能夠使 EGCG納米硒顆粒變大,發(fā)生聚沉。聚沉的 EGCG-SeNPs使得原本的紅色膠體變得輕微渾濁(圖 3-d)。不同加熱時(shí)間處理的EGCG-SeNPs的吸光值變化不顯著(圖3-e)。
灌胃硒可以增加組織中硒的水平[35],而且 GPx活力對組織內(nèi)硒水平比較敏感[12]。因此,可通過測定組織硒水平和 GPx活力用于比較亞硒酸鈉與EGCG-SeNPs的硒利用水平,從而評價(jià) EGCG-SeNPs的硒吸收利用水平。如圖 4 所示,在肝臟中,Selenite-50、SeNPs-50、Selenite-100和 SeNPs-100組的硒含量顯著高于CK組(圖4-a)。在腎臟中,所有處理組的硒含量都顯著高于CK組(圖4-b)。但在肝臟和腎臟中,亞硒酸鈉處理組和 EGCG-SeNPs處理組的硒含量都不存在劑量依賴效應(yīng)。并且,在肝臟和腎臟中,每對相同的硒濃度的亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs組之間都沒有出現(xiàn)顯著差異,這表明亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs之間的硒積累沒有顯著差異。
圖3 EGCG-SeNPs的溫度特性Fig. 3 Temperature property of EGCG-SeNPs
GPx可以保護(hù)生物體免受自由基的氧化損傷,并且是身體氧化應(yīng)激的關(guān)鍵指示[36]。血清、肝臟和腎臟中的GPx活性如圖5所示。在血清中(圖5-a),與CK組相比,所有亞硒酸鈉或EGCG-SeNPs組的GPx活性均顯著增加,并且在每對亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs組之間,都存在劑量依賴效應(yīng),即:隨著亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs給藥濃度的增加,GPx活性顯著增加。在腎臟中,在相同的硒濃度的亞硒酸鈉和EGCG-SeNPs組之間的GPx活性沒有表現(xiàn)出顯著差異(圖5-c)。GPx活性在腎臟和肝臟中的變化趨勢和血清中的非常相似這些結(jié)果表明,EGCG-SeNPs具有與亞硒酸鈉類似的生物利用度,并且給藥的硒濃度越高,EGCG-SeNPs的生物利用度越高。
本研究得出的結(jié)論是利用 Vc作為還原劑,EGCG作為分散劑,制備的EGCG-SeNPs對擬胃酸環(huán)境和高溫有較強(qiáng)的穩(wěn)定性,而且小鼠口服該納米硒的硒吸收利用程度與口服亞硒酸鈉相似。
在本研究中,EGCG-SeNPs最初在pH2.5下制備,然后調(diào)節(jié)至pH1.0、pH5.0和pH8.5。TEM圖像顯示EGCG-SeNPs在不同的pH中會呈現(xiàn)不同形狀:絲狀、矩形和六邊形,且顆粒大小隨著 pH的降低而增加(圖 2)。研究表明,正電荷的鉻硒納米棒可以自組織成絲狀納米結(jié)構(gòu)[37],這與EGCG-SeNPs在pH1.0時(shí)的形狀相同。Sau等[38]發(fā)現(xiàn),通過調(diào)節(jié)Vc的濃度可以產(chǎn)生不同結(jié)構(gòu)的納米晶體,如長方形,這和EGCG-SeNPs在pH5.0時(shí)的形狀相同。
圖4 肝臟和腎臟中的硒含量Fig. 4 Selenium content in liver and kidney
圖5 血清、肝臟和腎臟中的GPx活性Fig. 5 GPx activity in serum, liver and kidney
此外,還有報(bào)道表明,EGCG-SeNPs在pH1.0時(shí)會發(fā)生廣泛聚集并且失去納米特征[39],這與本研究發(fā)現(xiàn) pH1.0條件下納米硒尺寸增加的結(jié)果相似。因此,EGCG-SeNPs在pH1.0的條件下,能夠發(fā)生激烈的聚集,其顆粒尺寸大約增加10倍。在pH8.5的條件下,以70℃加熱0、3、12 h后,EGCG-SeNPs分別呈現(xiàn)六邊形、球形和球形,且隨著加熱時(shí)間的增加,顆粒大小明顯增加。已有研究表明,納米顆粒的熱穩(wěn)定性取決于其顆粒大小,相比于小直徑的納米顆粒,大直徑的納米顆粒在加熱過程中更容易轉(zhuǎn)變成納米棒[40]。不難發(fā)現(xiàn),在加熱 3 h和12 h后,EGCG-SeNPs的平均直徑分別從(35±0.12) nm增加到約200 nm和400 nm。這是因?yàn)槌掷m(xù)高溫破壞了 EGCG-SeNPs的穩(wěn)定性,使得納米顆粒從均勻的 EGCG分散體系中出來,相互聚集在一起。Su等[41]發(fā)現(xiàn)兒茶素在 70℃保存 3 h后其濃度會降低。在低溫(25~100℃)的等溫反應(yīng)中,發(fā)現(xiàn)了 EGCG的同時(shí)降解和差向異構(gòu)化[42]。EGCG-SeNPs在200~900 nm波長處的吸光度表明,隨著pH值的降低,吸光度下降(圖2-e)。其原因可能是解離 EGCG在酸性條件下能夠進(jìn)入 SeNPs系統(tǒng)。然而,EGCG-SeNP的吸光度在加熱或不加熱的那些之間沒有顯著的差異(圖3-e)。由于 EGCG-SeNPs在沒有足夠氧氣的密閉環(huán)境中加熱,EGCG氧化不明顯。因此,吸光度沒有發(fā)生顯著的變化。
之前的研究指出,EGCG在酸性條件下的質(zhì)子化導(dǎo)致 SeNPs的大量聚集,而在谷胱甘肽體系的堿性條件下,雖能成功制備成EGCG-SeNPs,由于在擬胃酸環(huán)境中該顆粒發(fā)生聚集,3 min內(nèi)形成微米級顆粒導(dǎo)致生物利用度顯著降低[36]。然而,在這項(xiàng)研究中,EGCG-SeNPs在擬胃酸環(huán)境中或高溫條件下盡管發(fā)生聚集,但是其納米硒顆粒大小能夠長時(shí)間保持在 300~400 nm,從而使得其硒的生物利用度與亞硒酸鈉相比沒有顯著下降。另外,EGCG的氧化還原電位為+420 mV,Se4+/Se為+320 mV,這意味著 EGCG無法還原亞硒酸鈉。因此,可以使用氧化還原電位為-166 mV的 Vc作為還原劑,將四價(jià)硒還原成零價(jià)硒。同時(shí),作為含有四羥基的強(qiáng)酸性物質(zhì),Vc可以更容易地提供酸性環(huán)境,避免EGCG降解和異構(gòu)化。Chen等[43]認(rèn)為,添加Vc可以提高EGCG的穩(wěn)定性,并且具有劑量效應(yīng)。同時(shí),Vc還可以提高作為兒茶素主要結(jié)構(gòu)的二聚體的穩(wěn)定性[44]。因此,作為還原劑,Vc可以通過減少多酚自由基和可溶性氧的體積來保護(hù)EGCG。
小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,肝臟和腎臟中,亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs中的硒含量均明顯高于CK 組(圖 4-a和 4-b),這直接證明EGCG-SeNPs中的硒可以在體內(nèi)積累和吸收。相同濃度下的亞硒酸鈉和 EGCG-SeNPs處理后的硒含量沒有顯著差異,這說明二者有著相似的生物利用度。研究結(jié)果還顯示,無論在血清、肝臟還是腎臟中,與CK組相比,隨著硒含量的增加,所有亞硒酸鹽或 EGCG-SeNPs處理組中的 GPx活性均顯著升高。這一現(xiàn)象表明,SeNPs具有有效的生物利用度,且伴隨劑量依賴性作用??梢酝茰y,在酸性條件下制備的而不是之前在堿性條件下制備 SeNPs通過胃內(nèi)給藥在胃液中可以保持生物利用度。其原因可能是,EGCG在制備過程中發(fā)生了質(zhì)子化,這使得其在 SeNPs的內(nèi)部或表面沒有發(fā)生去質(zhì)子化。由于 EGCG在通過胃液時(shí)沒有發(fā)生質(zhì)子化,所以 EGCG-SeNPs的聚集速度非常緩慢。
綜上所述,EGCG-SeNPs可以用Vc作氧化還原劑在先pH2.5后pH8.5的條件下成功制備。EGCG-SeNPs良好的理化性質(zhì)保證了其動物實(shí)驗(yàn)中的良好用途,使得 EGCG-SeNPs的生物利用度不會降低。然而,關(guān)于EGCG-SeNPs的毒性需要進(jìn)一步的探究以期獲得更好的應(yīng)用。
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The Evaluation of the Stability of EGCG-Selenium Nanoparticles and Its Effect on Selenium Absorption and Utilization
WANG Le, LI Huan, LI Jiahao, CHEN Xuan, LI Xinghui, SUN Kang*
Tea Research Institute, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China
(-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) dispersed Selenium nanoparticles (EGCG-SeNPs) were prepared using vitamin C (Vc) and EGCG as the redox agent and dispersant. Characteristics of EGCG-SeNPs, which were determined using transmission electron microscope (TEM) and zetasizer, were spherical in shape with a mean diameter of (35±0.12) nm and -0.05 mV zeta potential. The particles were aggregated in strong acid and high temperature conditions (pH1.0 and 70℃), with the particle size increased by about 10 times. And, EGCG in EGCG-SeNPs had good stability as a dispersant. With the administration of 25, 50 and 100 μg·kg-1(Calculated with selenium content), selenium content in liver and kidney of 50 and 100 μg·kg-1sodium selenite and EGCG-SeNPs treated mice were significantly increased. Glutathione peroxidase (GPx) activity in serum, liver and kidney of all the treatment groups were significantly increased in a dose-dependent manner. However, there was no significant difference between sodium selenite and EGCG-SeNPs at the same dose on selenium content and GPx activity. Hence, it can be concluded that EGCG-SeNPs synthesized using Vc as the redox agent might have the similar bioavailability to sodium selenite.
(-)-epigallocatechin-3-gallate, selenium, nanoparticle, bioavailability, glutathione peroxidase activity
TS272;Q946.84+1
A
1000-369X(2017)04-373-10
2017-05-05
2017-05-26
江蘇省自然科學(xué)基金(BK20160735)、江蘇省博士后科學(xué)基金(1601078C)、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金(CARS-23)、江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目
王樂,女,碩士研究生,主要從事茶葉生物化學(xué)與綜合利用研究。*通訊作者:sunkang@njau.edu.cn