劉雯　　龔玲　　曹偉　　俞瑩　　應(yīng)筱雯　　鮑彩麗　　杜山青

[摘要] 目的 對免疫透射比濁法測定血清胱抑素C的方法學(xué)性能行初步評價，并與免疫散射比濁法進(jìn)行比較。 方法 應(yīng)用Rohe Modular P全自動生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀分別對血清胱抑素C進(jìn)行初步的方法學(xué)評價，包括精密度、線性回歸試驗、回收試驗、干擾試驗。 結(jié)果 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法無論是批內(nèi)還是批間精密度均符合要求，CV均<4.5%；2種方法從低檢測范圍到高檢測范圍，均有著良好的線性回歸，斜率均接近于1，截距均接近于0，R2均>0.95；免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的回收率均>96%；干擾物試驗結(jié)果顯示血紅蛋白、三酰甘油及膽紅素均對測定無明顯影響。 結(jié)論 免疫透射檢驗的靈敏度較高，檢測范圍廣，與免疫散射試驗的結(jié)果基本一致，系統(tǒng)誤差小、抗干擾能力強，且更加快速、實用和便利。

[關(guān)鍵詞] 免疫透射比濁法；免疫散射比濁法；血清胱抑素C；方法學(xué)；檢驗

[中圖分類號] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2017）21-0096-03

Methodological comparison of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay in the determination of serum cystatin C

LIU Wen GONG Ling CAO Wei YU Ying YING Xiaowen BAO Caili DU Shanqing

Clinical Laboratory， Yangpu Hospital Affiliated to Tongji University， Shanghai 200093， China

[Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument， including precision， linear regression test， recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision， and CV was <4.5%； the two methods had good linear regression from the low detection range to the high detection range， the slope was both close to 1， the intercept was both close to 0， and R2 was both>0.95； the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%； interferent test results showed that hemoglobin， triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high， the detection range is wide， which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small， the anti-interference ability is strong， and it is more rapid， practical and convenient.

[Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay； Scatter turbidimetric assay； Serum cystatin C； Methodology； Test

胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制劑C。近年來，由于高血壓、糖尿病發(fā)病率的上升，其作為理想的反映腎小球濾過率的靈敏指標(biāo)日益受到臨床重視，國外對CysC的臨床應(yīng)用報道較多，認(rèn)為其血濃度能夠較準(zhǔn)確地反映GFR[1-3]。目前已建立的多種測定方法，包括免疫熒光測定（FIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比濁法（PETIA）與免疫散射比濁法（PENIA），我們應(yīng)用Rohe Modular P全自動生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀對CysC進(jìn)行了初步的方法學(xué)比較[4-5]，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

免疫透射比濁法使用Rohe Modular P全自動生化分析儀、免疫散射比濁法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀。

1.2 試劑

均為儀器配套試劑，其中BN-P的質(zhì)控品來源于配套試劑盒；Modular P的質(zhì)控品來源于上海市臨床檢驗中心。羅氏與西門子的CysC校準(zhǔn)品值可溯源至ERM-DA472。

1.3 標(biāo)本來源

標(biāo)本均來自2016年1～10月的我院住院患者標(biāo)本。

1.4 方法

1.4.1 兩種方法的批內(nèi)精密度測定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品連續(xù)測定20次用于計算批內(nèi)精密度。

1.4.2 兩種方法的批間精密度測定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品以及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品每天測定5次，每次間隔>1 h，連續(xù)測定4 d用于計算批間精密度。

1.4.3 兩種方法的線性分析 取2種不同方法的低濃度（接近于檢測下限）和高濃度標(biāo)本，按5/5 L+0/5 H、4/5 L+1/5 H、3/5 L+2/5 H、2/5 L+1/5 H、1/5 L+4/5 H、0/5 L+5/5 H的比例配置樣本，對樣本進(jìn)行檢測，每個樣本檢測3次，取均值作為最終結(jié)果。根據(jù)配置關(guān)系計算預(yù)期樣本量，并以之為橫軸，實際平均值為縱軸制作回歸分析模型。

1.4.4 兩種方法的回收試驗 取混合血清樣本加入等體積、不同濃度的CysC標(biāo)準(zhǔn)液，加入標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為1/2原標(biāo)準(zhǔn)液濃度，計算回收率。

1.4.5 兩種方法的干擾試驗 采用新鮮全血配置成干擾物，分為5.0 g/L、10.0 g/L兩種血紅蛋白濃度；膽紅素干擾物直接使用羅氏Cfas凍干標(biāo)準(zhǔn)品；三酰甘油酯干擾物直接使用脂肪注射液，用0.9%NACL直接配制成濃度為4.7 mmol/L和9.5 mmol/L干擾物，分別用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法進(jìn)行干擾試驗。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用描述性分析，偏態(tài)分布計量資料用中位數(shù)表示，計數(shù)資料用%表示，兩種檢驗方案分別采用CysC線性試驗分析并繪制線形圖，檢驗值α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批內(nèi)精密度評價

批內(nèi)對比顯示，散射比濁法的低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批間精密度比較

批間對比顯示，散射比濁法的低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 免疫散射比濁法檢測CysC線性試驗分析

散射比濁法的CysC線性試驗R2=0.99197，透射比濁法的CysC線性試驗R2=0.99231

2.4 回收試驗（免疫散射比濁法）

取混合血清標(biāo)本（CysC濃度為1.12 mg/L）加入0.176 mg/L、0.885 mg/L、1.764 mg/L、濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，并加入50%濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，平均回收率為97.0%。

2.5 回收試驗（免疫透射比濁法）

取混合血清標(biāo)本（CysC濃度為0.966 mg/L）加入0.377 mg/L、1.510 mg/L、3.525 mg/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，并加入50%濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，平均回收率為98.2%。

2.6 干擾試驗

3 討論

散射比濁法和透射比濁法的原理有所差異，前者是利用光線被液體粒子折射后的偏轉(zhuǎn)角度來判斷相關(guān)成分的含量，而后者則主要是檢測復(fù)合物成分對光線的吸收率來分析成分[6-7]。以往認(rèn)為免疫透射檢驗雖然具有一定優(yōu)勢，但存在檢驗范圍狹窄、靈敏度較低的缺陷，主要是由于檢驗復(fù)合物并不能完全阻擋光線的通過或復(fù)合物過少導(dǎo)致濁度變化難以體現(xiàn)。近年來，隨著檢驗醫(yī)學(xué)的日趨發(fā)展，全自動生化儀目前的技術(shù)已非常成熟[8-9]。

以往普遍認(rèn)為免疫透射比濁法的靈敏度不夠理想，檢測范圍不夠?qū)?，原因是免疫?fù)合物顆粒太小阻擋不了光線的通過；或是免疫復(fù)合物的數(shù)量太少，其濁度變化對光通量的透過影響不大，特別是在低濃度時更加明顯[10-11]。而在抗原過量情況下，透射比濁法易出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)而導(dǎo)致結(jié)果偏低。而在速率散射比濁法檢測時，儀器設(shè)計有抗原過量檢測系統(tǒng)，抗原過量時會提示樣本稀釋，從而達(dá)到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度[12-13]。由此，在比較實驗中，速率散射比濁法在低濃度和高濃度測定中可以得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果。但是，在基層醫(yī)療單位，常常沒有條件滿足使用散射比濁法測定特定蛋白，應(yīng)用免疫透射比濁法檢測就顯得更加重要。其次，隨著檢驗醫(yī)學(xué)的日趨發(fā)展，檢驗質(zhì)量管理已規(guī)范化，實驗室應(yīng)重視不同檢測方法之間檢測結(jié)果是否存在一致性的問題[14]。從本文數(shù)據(jù)來看，可以看出免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的相關(guān)性好，R2>0.95。其回歸方程，斜率均接近于1，截距均接近于0；免疫透射比濁法無論是批內(nèi)精密度還是批間精密度都非常好，CV均<5%。

以往認(rèn)為，由于免疫透射比濁法所采用的全自動生化分析儀，可聯(lián)合應(yīng)用雙波長檢測、樣本自動稀釋，與樣本空白對照檢測，有助于最小化干擾因素對檢測的影響，并且本研究選擇的試劑廠商，提供了全面詳細(xì)的技術(shù)參數(shù)設(shè)置，在使用以上特定蛋白檢測參數(shù)時，已經(jīng)充分運用儀器的各項技術(shù)條件，使臨床上常見的干擾物所能引起的干擾降到了最小。而免疫散射比濁法對較大顆粒的CH，嚴(yán)重溶血時的Hb干擾等，儀器本身可能就存在不足，在檢測試劑和儀器參數(shù)設(shè)置等方面，也未充分提高臨床抗干擾物的實踐能力[15]。因此，免疫散射比濁法的抗干擾能力較弱，但還是符合臨床檢測要求。但從本次研究的干擾試驗的結(jié)果可知溶血、黃疸、脂血對2種方法的測定干擾均很小。

免疫透射比濁法還有其他一些優(yōu)點，如儀器投資成本低，不需要另配專用的特定蛋白分析儀；患者收費低；由于可以和生化樣本合并，故可以降低采血管的成本；生化分析儀的檢測速度快，檢驗報告時間短[16]。

因此，與免疫散射比濁法比較，免疫透射比濁法具有優(yōu)良的精密度，相似的分析靈敏度和檢測范圍，良好的相關(guān)性，抗干擾能力小，系統(tǒng)誤差小，且更加實用和方便。

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（收稿日期：2017-04-12）