王 新，盧玉元

(佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154007)

Annexin A3在三陰乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義①

王 新，盧玉元

(佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探索討論三陰乳腺癌(TNBC)組織中Annexin A3的表達(dá)及其臨床意義。方法：搜集本院從2012-01～2015-12共100例非三陰乳腺癌(non-TNBC)組織中使用隨機(jī)區(qū)組的方式選擇50例組織標(biāo)本，TNBC組織標(biāo)本50例,癌旁正常組織標(biāo)本50例為對照組，各組間進(jìn)行對比分析。應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測Annexin A3在TNBC組織、non-TNBC組織和癌旁組織中被表達(dá)的情況，探討Annexin A3能否有望成為TNBC的特異性指標(biāo)，分析總結(jié)TNBC的臨床病理特征與Annexin A3表達(dá)情況有無相關(guān)性。結(jié)果：Annexin A3在TNBC 50例樣本組織中的陽性表達(dá)率為31/50(62%)，癌旁組織陽性表達(dá)率為5/50(10%)，前者與后者相較，前者明顯高于后者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與non-TNBC(陽性表達(dá)率62%)比較，前者與后者統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不大，無意義(P>0.05)?；颊吣挲g、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、臨床分期、家族史等均與Annexin A3在TNBC中的表達(dá)情況無明顯的相關(guān)性(P>0.05)。 結(jié)論： Annexin A3可能參與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展的過程，它可能是腫瘤患者預(yù)后差的一個(gè)危險(xiǎn)因素。TNBC臨床病理特征與Annexin A3的表達(dá)無關(guān)聯(lián)。它雖然不是TNBC的獨(dú)特的檢測指標(biāo)，但可作為一種有價(jià)值的乳腺癌的預(yù)后標(biāo)記物，有望被作為乳腺癌患者的預(yù)后不佳的非特異性標(biāo)志。

Annexin A3；TNBC；non-TNBC

乳腺癌是一種具備高度異質(zhì)性的占全國惡性腫瘤比例7%～10%的女性常見惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于宮頸癌，其發(fā)病率近年來逐年上升并有超越宮頸癌的態(tài)勢。甚至于在某些地區(qū)，高居首位的影響女性健康的惡性腫瘤已經(jīng)被認(rèn)為是乳腺癌[1]。乳腺癌當(dāng)中的ER、PR與Her-2表達(dá)均為陰性的一種類型被稱之為三陰乳腺癌(TNBC)。絕經(jīng)前的年輕女性較為多發(fā)，主要特點(diǎn)為惡性程度高、預(yù)后較差[2]。它與BLBC相較，因其在免疫表型、組織形態(tài)和臨床表現(xiàn)等多方面都有很多相似之處，從而引起各國腫瘤學(xué)家的高度關(guān)注。Nielsen等[3]學(xué)者將ER、PR與Her-2的表達(dá)均為陰性作為基底樣乳腺癌的主要特征。TNBC在分子生物學(xué)行為、臨床病理特征等多方面都具有獨(dú)特性，而且與其他類型乳腺癌相比，其預(yù)后更差。因?yàn)椴±硖卣鞯奶厥庑?，故不能采取?nèi)分泌等相關(guān)治療，目前也沒有相應(yīng)的免疫治療和靶向治療的藥物或者方法。為了找到合適的靶向治療依據(jù)和理想的腫瘤標(biāo)志物，這次試驗(yàn)采取免疫組化的方法檢測Annexin A3在TNBC組織中的表達(dá)情況及其臨床意。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院部及門診部從2012-01～2015-12共100例非三陰乳腺癌(non-TNBC)組織中使用隨機(jī)區(qū)組的方式選擇50例組織標(biāo)本，TNBC組織標(biāo)本50例,癌旁正常組織標(biāo)本50例為對照組，各組間進(jìn)行對比分析。兩組患者性別均為女性，每組患者平均年齡分別為(34.7±10.5)歲和(36.6±10.5)歲。

1.2 試劑和方法

濃縮型鼠抗人Annexin A3單克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司、SP試劑盒和DAB顯色劑均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化檢測 Annexin A3在non-TNBC,TNBC和癌旁組織中的表達(dá),首先將選取的標(biāo)本蠟塊按4μm厚度切片,每例5張切片，石蠟切片脫蠟后蒸餾水中漂洗5分鐘，高壓修復(fù)后取出切片放入蒸餾水沖洗兩次，滴加一滴3%的過氧化氫溶液以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，再次沖洗后滴加PH7.8的胃蛋白酶，滴加封閉液，滴加適當(dāng)濃度的(Annexin A3稀釋度為 1∶200)一抗，PBS沖洗后滴加二抗，每張切片加2滴新鮮配制的DAB工作液，顯色情況通過顯微鏡觀察，蘇木紫染色 、分化液、返藍(lán)，酒精、二甲苯依次脫水，中性樹膠封片，晾干，PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 陽性結(jié)果判定

由本院病理科兩位主任醫(yī)師對疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行審閱，Annexin A3主要被著色于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。陽性強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例評分作為免疫組化評分標(biāo)準(zhǔn)，評分方法：①細(xì)胞數(shù)表達(dá)為陽性的評分方法：每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍視野進(jìn)行觀察并計(jì)數(shù)陽性數(shù)細(xì)胞，將陽性率分為1%～24%、25%～49%、50%～74%、≧75%四個(gè)等級，分別記分為1分、2分、3分、4分。②判斷染色強(qiáng)度的評分方式：0分為無染色，1分為顯色明顯比背景高的淡黃色顆粒，2分為淺棕黃色顆粒，3分為深棕黃色顆粒。陰性(-)結(jié)果為上述二者評分之和小于2分者，弱陽性(+)為2～3 分，中度陽性()4～5分，強(qiáng)陽性()為6～7 分[4]。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用χ2檢驗(yàn)和四格表的精確概率法判斷Annexin A3在各族資料中的表達(dá)與各病理指標(biāo)的相互關(guān)系,運(yùn)用spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)來判斷Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織之間的相互關(guān)系用

以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果

Annexin A3主要被表達(dá)于組織的細(xì)胞核和細(xì)胞漿中，TNBC和癌旁組織中Annexin A3的陽性表達(dá)率分別為31/50(62%)和5/50(10%)。前后兩組進(jìn)行比較，差異顯著，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義(χ2=5.774P<0.05)。見圖1、圖2。

圖1 Annexin A3在TNBC中的陽性表達(dá)(En Vision×400)

圖2 Annexin A3在癌旁組織中的陽性表達(dá)(En Vision×400)表1 Annexin A3的表達(dá)與TNBC患者臨床病理特征的關(guān)系

分組nAnnexinA3陽性數(shù)陽性率(%)χ2值P值年齡(歲) <35191052.61.142>0.05 ≥35312167.4腫瘤家族史 無302066.70.693>0.05 有201155.0病理類型 浸潤性癌452760.00.764>0.05 其他類型5480.0腫瘤大小 ≤2cm7228.60.198>0.05 >2～5cn281967.9 ≥5cm151066.7腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無301756.70.905>0.05 有201470.0臨床分期 Ⅰ期、Ⅱ期271866.70.543>0.05 Ⅲ期、Ⅳ期231343.5

2.2 TNBC臨床病理特征與Annexin A3之間的表達(dá)情況的相互關(guān)系

患者的年齡、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、家族史等因素與Annexin A3的陽性表達(dá)率無關(guān)(P均>0.05)，見表1。

2.3 TNBC與non-TNBC組織Annexin A3的表達(dá)情況對比

Annexin A3主要表達(dá)于二者的細(xì)胞核和細(xì)胞漿中，其在non-TNBC中的陽性表達(dá)率為31/50(62%)，與癌旁正常乳腺組織相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其與TNBC組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 Annexin A3在各類乳腺癌組織中的表達(dá)情況(n=50)

注：*與TNBC組比較；**與癌旁正常組比較；***與 non-TNBC組比較。

3 討論

Annexin A3是一種約占體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)總蛋白的2%[5]的磷脂結(jié)合蛋白超家族的成員之一，其超家族具有由70個(gè)氨基酸殘基組成的保守的中心結(jié)構(gòu)域和特異的N端序列，其與胞吐作用中的膜融合、囊泡的運(yùn)輸及鈣離子通道的形成以及不同通路中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等膜轉(zhuǎn)運(yùn)等有關(guān)，另外還參與了一些依賴于鈣調(diào)蛋白的通路，并能夠參與調(diào)控細(xì)胞的分化、細(xì)胞骨架蛋白間的相互作用及炎性反應(yīng)等不同過程。它還具有獨(dú)特的 N 端序列，這種特異的N端序列與它所特有的功能相關(guān)聯(lián)。其與患者的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤是否復(fù)發(fā)及患者的生存率下降等密切相關(guān)。在大部分惡性腫瘤中，Annexin A3在不同程度上都可檢測到表達(dá)失調(diào)的情況，有研究[6～7]顯示在肺腺癌中，Annexin A3的表達(dá)明顯升高。Kollermann 等[8]的研究已經(jīng)表明，Annexin A3的表達(dá)可以作為評價(jià)前列腺癌預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)之一。由于TNBC的高度異質(zhì)性，并且目前沒有發(fā)現(xiàn)有效的免疫治療和靶向治療等方式，雖對化療有一定療效，但其預(yù)后來看明顯不如其他類型乳腺癌患者，有研究顯示[9]，在傳統(tǒng)化療方案(紫衫類蔥環(huán)類為基礎(chǔ))的基礎(chǔ)上加用希羅達(dá)能顯著改善TNBC患者的無復(fù)發(fā)生存期和總生存期。

為了尋找針對TNBC的獨(dú)特的靶點(diǎn)，為其治療和改善預(yù)后打開新的思路，本實(shí)驗(yàn)試圖通過免疫組織化學(xué)(SP)法來檢測Annexin A3的表達(dá)情況，結(jié)果表明：在TNBC和癌旁組織中Annexin A3的陽性表達(dá)率分別為(62%)和(10%)，前后兩組進(jìn)行比較，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.774，P<0.05)。表明在乳腺癌發(fā)生的早期分子生物學(xué)事件中，Annexin A3也參與其中，可能是腫瘤患者預(yù)后差的一個(gè)危險(xiǎn)因素。TNBC患者的年齡、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、家族史等因素等與Annexin A3的表達(dá)均無明顯相關(guān)性(P均>0.05)。表明各項(xiàng)臨床病理特征與TNBC患者無相關(guān)性，不能作為評判TNBC獨(dú)特性或者嚴(yán)重程度的指標(biāo)。Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織中的表達(dá)情況，二者無明顯的差異，從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度分析，差異無意義(P>0.05)，表明Annexin A3不是TNBC的獨(dú)特的檢測指標(biāo)，不能作為TNBC指導(dǎo)治療的獨(dú)特要素。Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織中的表達(dá)明顯比癌旁組織組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2均=14.67，P均<0.05)，說明Annexin A3只能作為乳腺癌的特異指標(biāo)，不能作為TNBC的獨(dú)特性的指標(biāo)，其有可作為一種有價(jià)值的乳腺癌的預(yù)后標(biāo)記物，為以后的乳腺癌的治療和預(yù)后提供新的方法。

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王新( 1963 ～ ) 男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。

盧玉元(1989～)男，甘肅酒泉人，在讀碩士研究生。E-mail:278389575@qq.com。

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1008-0104(2017)04-0079-03

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