宋亞男，宋繼榮

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

CCR7和D2-40在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系①

宋亞男，宋繼榮

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討在宮頸鱗癌中趨化因子受體7(CCR7)和D2-40的表達(dá)狀況,二者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。方法：使用免疫組化方法分別測(cè)定64例宮頸鱗癌(25例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，39例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)和30例正常宮頸中CCR7、D2-40的表達(dá)狀況,淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞用D2-40染色，計(jì)數(shù)微淋巴管密度(MLVD)。 結(jié)果：CCR7和D2-40 標(biāo)記的MLVD均在有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中高表達(dá)，與無盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及正常宮頸組比較有顯著差異，且CCR7和D2-40 標(biāo)記的MLVD呈正相關(guān)。 結(jié)論：CCR7、D2-40高表達(dá)于有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者,且兩者為正相關(guān)。將CCR7結(jié)合D2-40檢測(cè)目的就在于更精確的判斷宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

CCR7；D22-40；宮頸鱗癌；轉(zhuǎn)移

女性惡性腫瘤排名第2位的是宮頸癌[1],宮頸癌的早期治療效果較好,治療效果較差的為中晚期,關(guān)系到其預(yù)后較為關(guān)鍵的要素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。CC族趨化因子受體CCR7, 絕大多數(shù)在內(nèi)皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞的胞膜上表達(dá),參與機(jī)體反應(yīng)主要通過與其配體作用。近期，研究證明[2,3]腫瘤轉(zhuǎn)移和CCR7與配體結(jié)合相關(guān)，因此大家把腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原因聚焦在CCR7上。目前普遍認(rèn)為D2-40為有代表性的標(biāo)記淋巴管物質(zhì)[4],在探究腫瘤淋巴管與腫瘤生物學(xué)相關(guān)性方面被普遍運(yùn)用[5],對(duì)腫瘤組織微淋巴管形成、癌細(xì)胞是否出現(xiàn)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的判定有很大幫助。在宮頸癌病例中,鱗癌病例所占比例為75%～80%,本課題探討在宮頸鱗癌中趨化因子受體7和D2-40的表達(dá)狀況,二者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料

實(shí)驗(yàn)組織均來自2014-01～2016-10在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科行手術(shù)治療后的保存蠟塊，其中宮頸鱗癌組織64例(包括有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例),30例正常宮頸組織。

入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理醫(yī)師需對(duì)切片進(jìn)行反復(fù)確診；(2)患者有完整病歷資料、組織切片及存檔蠟塊；(3)患者術(shù)前未行抗腫瘤相關(guān)治療；(4)患者除外其他惡性腫瘤疾病。

1.2 主要試劑

鼠抗人CCR7單克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。鼠抗人D2-40免疫組織化學(xué)單克隆抗體、即用型快捷免疫組織化學(xué)Max Vision 檢測(cè)試劑盒、DAB 顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。

1.3 方法

CCR7和D2-40均選用檸檬酸緩沖液(pH=6.0)高溫高壓抗原修復(fù)法對(duì)常規(guī)組織切片進(jìn)行抗原修復(fù),采用免疫組化染色，具體實(shí)驗(yàn)方法參考試劑盒標(biāo)注。按1∶100濃度稀釋CCR7。已知CCR7陽性組織及淋巴管瘤切片分別作CCR7和D2-40陽性對(duì)照,PBS取代一抗作陰性對(duì)照。DAB顯色,復(fù)染，封片,再用光鏡察看。

1.4 結(jié)果判定

CCR7陽性陰性的判定方法: 細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)顯現(xiàn)棕黃色記為著色。(1) 依照著色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例評(píng)分,3分：≥50%；2分：10%～50%；1分：<10%；0分：無陽性細(xì)胞。(2)依照細(xì)胞著色強(qiáng)度評(píng)分,3分：重度染色(棕褐色)；2分：中度染色(棕黃色)；1分：輕度染色(淺黃色)；0分：無染色。兩種評(píng)分<3分記作陰性(-),≥3分記作陽性(+) 。D2-40結(jié)果判定方法: 首先低倍鏡(×100)下察看正常組織、瘤周及癌瘤內(nèi)細(xì)胞著色最密集區(qū)域,再高倍鏡(×400)下計(jì)算淋巴管數(shù)目,每個(gè)陽性染色的單個(gè)微小脈管、內(nèi)皮細(xì)胞簇和內(nèi)皮細(xì)胞均算為1個(gè)微淋巴管。各例取3個(gè)視野,算其平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CCR7、 D2-40標(biāo)記的MLVD在正常宮頸和宮頸鱗癌中的表達(dá)

CCR7在兩種組織中存在陽性表達(dá)，較少表達(dá)于成熟血管外周，較多表達(dá)于不成熟的血管外周。D2-40在兩種組織中存在陽性表達(dá)，D2-40在微淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)染色，呈棕黃色至棕褐色，染色區(qū)域主要集中在瘤周淋巴管上皮細(xì)胞，瘤間質(zhì)內(nèi)淋巴管稀疏染色。CCR7和D2-40均在宮頸鱗癌組織中高表達(dá)，與正常宮頸組織比較有顯著差異，見表1。

表1 CCR7、 D2-40標(biāo)記的MLVD在正常 宮頸和宮頸鱗癌中的表達(dá)

2.2 CCR7、 D2-40標(biāo)記的MLVD在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)

CCR7和D2-40均在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中高表達(dá)，與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較有顯著差異，見表2。

表2 CCR7、 D2-40標(biāo)記的MLVD在有淋巴結(jié) 轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)

2.3 宮頸鱗癌中CCR7與MLVD表達(dá)的相關(guān)性

D2-40標(biāo)記的MLVD計(jì)數(shù)在CCR7陰性組(13.87±5.22)低于陽性組(17.77±5.17),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。根據(jù)Spearman相關(guān)分析得出CCR7和MLVD的關(guān)系為正相關(guān)(rs=0.444，P<0.05)。

3 討論

細(xì)胞的遷移主要依靠趨化因子發(fā)揮作用,細(xì)胞從趨化因子低濃度方向向高濃度方向移動(dòng),趨化因子受體在靶細(xì)胞表面有選擇性表達(dá)。CCR7屬于CC趨化因子受體亞家族的成員,功能性表達(dá)于多種組織和細(xì)胞類型, 其在機(jī)體發(fā)揮作用是通過結(jié)合相應(yīng)配體CCL19、CCL21[6]，特別是在腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān)研究中占據(jù)重要地位。大部分集中在外周免疫器官或組織的CCL21為CCR7的重要配體，CCL21發(fā)揮趨化作用的對(duì)象為大量免疫細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞表面CCR7與淋巴結(jié)T細(xì)胞區(qū)CCL21結(jié)合, 誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)機(jī)動(dòng)蛋白聚合，此過程促進(jìn)偽足形成，偽足為腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要的條件，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞沿淋巴結(jié)發(fā)生運(yùn)動(dòng)浸潤(rùn)繼而轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處。在宮頸癌中,Kodama[7]等發(fā)現(xiàn)在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中CCR7高表達(dá),并且和淋巴管或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著緊密的聯(lián)系。D2-40作為單克隆抗體,能夠忽略血管內(nèi)皮細(xì)胞，而精確的標(biāo)識(shí)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞[8],可應(yīng)用在腫瘤的淋巴管內(nèi)皮,在腫瘤組織微淋巴管形成、判定癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移方面有很大幫助。國(guó)內(nèi)研究示[9]D2-40抗體測(cè)定腫瘤的淋巴管具備特異性強(qiáng)和敏感度高的特點(diǎn),有助于預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后,在宮頸鱗癌治療方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用。文獻(xiàn)報(bào)道, D2-40水平在惡性腫瘤(如肺癌、口腔癌、結(jié)直腸癌、胃癌等)中和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。CCR7通過上調(diào)VEGF-C(淋巴管生成因子)使腫瘤淋巴管增生,通過與相應(yīng)受體特異性結(jié)合,活化酪氨酸激酶?jìng)鲗?dǎo)通路,促進(jìn)腫瘤淋巴管形成,目前標(biāo)識(shí)淋巴管具有特異性的物質(zhì)為D2-40,故用此計(jì)算微淋巴管密度。本研究顯示: CCR7、D2-40高表達(dá)于有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者,且兩者為正相關(guān)。直接蔓延及淋巴轉(zhuǎn)移為宮頸癌的重要轉(zhuǎn)移方式,浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因[10]，因此宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更得到大家的重視。CCR7、D2-40作為評(píng)價(jià)宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能的標(biāo)志物,聯(lián)合監(jiān)測(cè)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供更為有效的指標(biāo),同時(shí)對(duì)臨床治療方案選擇起指導(dǎo)作用,為宮頸癌醫(yī)治及抑制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供充足的參考資料。

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宋亞男(1990～)女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。

宋繼榮(1969～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:786577037@qq.com。

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1008-0104(2017)04-0164-02

2016-12-19)